多肽抗菌性测定 抑菌圈法 GBT 39101-2020.pdf

GB/T39101-20207.1.2.2菌悬液制备预先按照GB4789.2进行指示菌的菌落计数，建立菌落数与吸光度值(OD%)的对应关系，将第三代培养液调整至合适的吸光度值，使其菌悬液浓度为1103CFU/mL510CFU/mL。7.1.3检测平板制备将配制的NA培养基加热溶解，冷却至4550，将制备的指示菌菌悬液按照1%的添加量加人NA培养基中，充分混合均匀，量取20L倾倒入灭菌平皿，轻轻摇动平皿使之均匀辅平，待其疑固后备用。7.1.4测定在含有指示菌的检测平板中等拒离安放5个一6个牛律杯，轻轻按压，量取多肽样品100L,缓缓加入牛津杯中，每个处理重复3次，将平板移入46冰箱中预扩散4h10h,取出平板，放人36土1恒温培养箱中，正置培养至抑菌圈清晰，采用游标卡尺或抑菌圈测量仪测定抑菌圈直径，每个抑菌圈沿不同方向测量3次，并记录平均值。以多肽稀释倍数倒数的对数值为横坐标，以抑菌圈直径为纵坐标，建立线性方程(R20.9900)。杆菌肽对S.aureus ATCC25923的线性关系图参见附录B的图B.1。7.2抗丝状真菌性能测定7.2.1样品制备同7.1.1。7.2.2指示菌孢子悬液制备7.2.2.1菌种活化将指示菌孢子或菌悬液接种于PDA培养基的固体平板上，29士1恒温培养48h72h,作为第一代孢子培养物，取第一代孢子培养物接种于PDA培养基的固体平板上，29士1恒温培养4872,作为第二代孢子培养物；取第二代孢子培养物接种于PDA培养基的固体平板上，291恒温培养48h72h,作为第三代孢子培养物。7.2.2.2孢子悬液制备将第三代孢子培养物用0.85%生理盐水洗脱孢子，血球计数板计数，将孢子浓度调整至1105 CFU/mL5X105 CFU/mL.7.2.3检测平板制备将配制的PDA培养基加热溶解，冷却至45一50，将制备的指示菌泡子悬液按照1%的添加量加入PDA培养基中，充分混合均匀，量取20L倾倒入灭菌平皿，轻轻摇动平板使之均匀铺平，待其凝固后备用。7.2.4测定在含有指示菌的检测平板中等距离安放5个6个牛津杯，轻轻按压，量取多肽样品100L,缓缓加入牛津杯中，每个处理重复3次，将平板移入46冰箱中预扩散4h10h,取出平板，放人29士1恒温培养箱中，正置培养18h24h至抑菌圈清晰，此时指示菌为菌苔状，基本还未形成菌3