动物源食品中激素多残留检测方法 液相色谱-质谱质谱法 GBT 21981-2008.pdf

ICS67.120X04B中华人民共和国国家标准GB/T21981-2008动物源食品中激素多残留检测方法液相色谱-质谱/质谱法Determination of hormone multiresidues in foodstuffs ofanimal origin-LC-MS/MS method2008-06-06发布2008-07-03实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会发布GB/T21981-20084.13同位素内标：块诺学围-d6、草酮-d、甲地孕酮乙酸酯-d、甲羟草酮-d3、美仑学酮-d3、炔诺雨-3C,、氯翠酮乙酸酯-d3、氯翠酮-d、16B羟基司坦唑醇-d、甲黎酮-d3、勃地龙-d、氢化可的松-d、黎酮-3C2、雌酮-d2、堆二醇3C:、己烯雌酚-ds、己二烯雌酚-d、己烷雌酚-d,物质英文名称见附录B。4.14标准储备液：分别准确称取10.0mg的标准品及内标于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度制成1.0mg/mL标准储备液，一18C以下保存，标准储备液在12个月内稳定。4.15混合内标工作液：用甲醇将各标准储备溶液配制成浓度为100g/L的混合内标工作液。4.16混合标准工作液：根据需要，用甲醇-水溶液(4.9)将各标准储备溶液配制为适当浓度(0.5,1,2，5,10,20和40g/L,其中炔诺酮、表雄酮、布地奈德、17羟基维烷-3-酮、氟米龙、氟甲睾酮为其他化合物浓度的5倍)，标准工作溶液中含各内标浓度为10g/L,4.17ENV-Carb固相萃取柱(500mg,6mL)或相当者，使用前依次用6mL二氯甲烷-甲醇溶液(4.10)、6mL甲醇、6mL水活化。4.18氨基固相萃取柱(500mg,6mL),使用前用6mL二氯甲烷-甲醇溶液(4,10)活化。5仪器5.1液相色谱-串联四极杆质谱仪：配有电喷雾离子源。5.2电子天平：感量为0.0001g和0.01g。5.3组织匀浆机。5.4涡旋混合器。5.5恒温振荡器。5.6超声清洗仪。5.7离心机：10000r/min。5.8固相萃取装置。5.9氮吹仪，5.10pH计。5.11移液器。6试样制备6.1动物肌肉、肝脏、虾从所取全部样品中取出有代表性样品约500g,别除筋膜，虾去除头和壳。用组织捣碎机充分捣碎均匀，均分成两份，分别装入洁净容器中，密封，并标明标记，于一18以下冷冻存放。6.2牛奶从所取全部样品中取出有代表性样品约500g,充分摇匀，均分成两份，分别装入洁净容器中，密封，并标明标记，于04以下冷藏存放。6.3鸡蛋从所取全部样品中取出有代表性样品约500g,去壳后用组织捣碎机充分搅拌均匀，均分成两份，分别装入洁净容器中，密封，并标明标记，于0C4以下冷藏存放。注：制样操作过程中应防止样品被污染或其中的残留物发生变化，7分析步骤7.1提取称取5g试样（精确至0.01g)于50mL具塞塑料离心管中，准确加入内标溶液(4.15）100L和10mL乙酸-乙酸钠缓冲溶液(4.8)，涡旋混匀，再加入仔葡萄糖醛酸酶/芳香基硫酸酯酶溶液100L,于37C1C振荡酶解12h。取出冷却至室温，加入25mL甲醇超声提取30min,0C4下2GB/T21981-200810000r/min离心10min。将上清液转入洁净烧杯，加水100mL,混匀后待净化。7.2净化提取液(7.1)以2mL/min3mL/min的速度上样于活化过的ENV-Carb固相萃取柱(4.17)。将小柱减压抽干。再将活化好的氨基柱串接在ENV-Cb固相萃取柱下方。用6mL二氯甲烷-甲醇溶液(4.10)洗脱并收集洗脱液，取下ENV-Carb小柱，再用2mL二氯甲烷-甲醇溶液(4.10)洗氨基柱，洗脱液在微弱的氨气流下吹干，用1L甲醇-水溶液(4.9)溶解残渣，供仪器测定。8测定8.1雄激素、孕激素、皮质醇激素测定8.1.1液相色谱条件a)色谱柱：ACQUITY UPLCTM BEH CI柱，2.1mm(内径)100mm,1.7m,或相当者。b)流动相：A,0.1%甲酸水溶液(4.11)：B,甲醇。梯度淋洗，参考梯度条件参见表C.1。c)流速：0,3mL/min。d)柱温：40C。c)进样量：10L。8.1,2雄激素、孕激素测定参考质谱条件)电离源：电喷雾正离子模式。b)毛细管电压：3.5kV。c)源温度：100。d)脱溶剂气温度：450C。e)脱溶剂气流量：700L/h。D碰撞室压力：0.31Pa(3.1X10-3mbar)。g)维微素、中激素的特征离子参见表D.1和表D,2。8.1.3皮质醇激素测定参考质谱条件)电离源：电喷雾负离子模式。b)毛细管电压：3.0kV。c)源温度：100C。d)脱溶剂气温度：450。e)脱溶剂气流量：700L/h。D碰撞室压力：0.31Pa(3.110-3mbar)。g)皮质醇激素的特征离子参见表D.3。8.2雌激素测定8.2.1雌激素测定液相色谱条件a)色谱柱：ACQUITY UPLCTM BEH C柱，2.1mm(内径)X100mm,1.7m,或相当者，b)流动相：A,水：B,乙腈。梯度洗脱，参考梯度条件参见表C.2。c)流速：0.3mL/min.d)柱温：40。c)进样量：10L,8.2.2雌激素测定质谱条件)电离源：电喷雾负离子摸式。b)毛细管电压：3.0kV。c)源温度：100C,d)脱溶剂气温度：450C.