茶叶中茶多酚和儿茶素类含量的检测方法 GBT 8313-2008.pdf

GB/T8313-20085.7稳定溶液：分别将25 mnL EDTA溶液(5.5)、25mL抗坏血酸溶液(5.6)、50mL乙腈(5.1)加入500mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。5.8液相色谱流动相5.8.1流动相A:分别将90mL乙腈(5.1)、20mL乙酸(5.3)、2 mL EDTA(5.5)加人1000mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。溶液需过0.45m膜。5.8.2流动相B:分别将800mL乙睛(5.1)、20mL乙酸(5.3)、2 nL EDTA(5.5)加入1000mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。溶液需过0.45m膜。5.9标准储备溶液5.9.1咖啡减储备溶液：2.00mg/mL。5.9.2没食子酸(GA)储备溶液：0.100mg/mL。5.9.3儿茶素类储备溶液：十C1.00mg/mL,+EC1.00mg/mL,十EGC2.00mg/mL,+EGCG2.00 mg/mL,+ECG 2.00 mg/mL.5.10标准工作溶液：用稳定溶液(5.7)配制。标准工作溶液的浓度：没食子酸5g/mL25g/mL、咖啡碱50g/mL150g/mL、十C50 ug/mL150 ug/mL.+EC 50 ug/mL150 ug/mL,+EGC 100 ug/mL300 ug/mL,+EGCG100 ug/mL400 ug/mL.+ECG 50 ug/mL200 ug/mL.6操作方法6.1取样按GB/T8302的规定。6.2试样制备按GB/T8303的规定。6.3测定步骤6.3.1干物质含量测定按GB/T8303的规定。6.3.2供试液的制备6.3.2.1母液：称取0.2g(精确到0.0001g)均匀磨碎的试样(6.2)于10mL离心管中，加入在70C中预热过的70%甲醇溶液(5.4)5mL,用玻璃棒充分搅拌均匀湿润，立即移人70C水浴中，浸提10min(隔5min搅拌一次)，浸提后冷却至室温，转人离心机在3500r/min转速下离心10min,将上清液转移至10mL容量瓶。残渣再用5mL的70%甲醇溶液提取一次，重复以上操作。合并提取液定容至10mL,摇匀，过0.45m膜，待用（该提取液在4下可至多保存24h)。6.3.2.2测试液：用移液管移取母液(6.3.2.1)2mL至10mL容量瓶中，用稳定溶液(5.7)定容至刻度，摇匀，过0.45m膜，待测。6.3.3色谱条件流动相流速：1mL/min。柱温：35C,紫外检测器：入=278nm。梯度条件：100%A相保特10min15min内由100%A相68%A相、32%B相68%A相、32%B相保持10min100%A相2GB/T8313-20086.3.4测定待流速和柱温稳定后，进行空白运行。准确吸取10L混合标淮系列工作液注射入HPLC。在相同的色谱条件下注射10L测试液。测试液以峰面积定量。7结果计算7.1计算方法7.1.1以儿茶素类标准物质定量，按式(1)计算：儿茶素含量(%)=Ax fsxvxd1O0n（1）m X 105 X m式中：A一所测样品中被测成分的峰面积：f3d一所测成分的校正因子（浓度/峰面积，浓度单位“g/mL”):V一样品提取液的体积，单位为毫升(mL):d一稀释因子（通常为2mL稀释成10mL,则其稀释因子为5）：一样品称取量，单位为克(g):一样品的干物质含量，%。7.1.2以咖啡碱标准物质定量，按式(2)计算：儿茶素含量(%)=ARRFXV义dX1O0Sca X m X 105 X m式中：RRFs一所测成分相对于咖啡碱的校正因子：Sc一咖啡碱标准曲线的斜率（峰面积/浓度，浓度单位“g/mL”)。7.2儿茶素类相对咖啡碱的校正因子表见表1。表1儿茶素类相对咖啡碱的校正因子表名称GA+EGC+C+EC+EGCG十ECGRRFsd0.8411.243.583.671.721.427.3儿茶素类总量计算公式见式(3).儿茶素类总量(%)=EGC含量十C含量十EC含量十EGCG含量十ECG含量(3)7.4重复性同一样品儿茶素类总量的两次测定值相对误差应10%，若测定值相对误差在此范围，则取两次测得值的算术平均值为结果，保留小数点后两位。方法二茶叶中茶多酚的检测8原理茶叶磨碎样中的茶多酚用7o%的甲醇在70水浴上提取，福林酚(Folin-Ciocalteu)试剂氧化茶多酚中一0H基团并显蓝色，最大吸收波长入为765m,用没食子酸作校正标准定量茶多酚。9仪器9.1分析天平：感量0.001g,9.2水浴：70C土1C。