常见过敏蛋白的测定 液相色谱-串联质谱法 GBT 38163-2019.pdf

ICS07.080A40中华人民共和国国家标准GB/T38163-2019常见过敏蛋白的测定液相色谱-串联质谱法Determination of allergenic protein-LC-MS/MS method2019-10-18发布2019-10-18实施国家市场监督管理总局中国国家标准化管理委员会发布GB/T38163-20196主要仪器设备6.1液相色谱-串联质普仪：配有电喷雾离子(ES)源的三重四级杆质谱仪，6.2分析天平：感量为0.01g、0.001g、0.1g。6.3恒温水浴锅。6.4离心机：转速不低于2683g。6.5超滤离心管(10kD截止膜)。6.6注射器和0.22m水系滤膜（聚醚砜滤膜）。6.7涡旋混匀仪。6.8pH计：测量精度为0.01。6.9微量移液器：0.5L10L,10L100L,20L200L,200L1000L。6.10组织研磨器。6.11具塞离心管。6.12旋转蒸发仪。6.13分光光度计。7.1试样制备7.1标准工作液制备7.11过敏原标准品：棒子、核桃、杏仁、大豆、花生、全脂奶粉和全蛋粉，或等效商业化标准品。7.12食品基质标准品：小麦粉（饼干基质）、腰果（坚果基质）、燕麦粉（早餐谷物基质）、可可粉（巧克力基质)（以上基质均无7.11中提到的7种过敏原），或等效商业化标准品。7.1.3样品制备：称取每种过敏原标准品和食品基质标准品500g士0,1g,采用粉碎机粉碎后，再将其研磨成细粉状，过50目筛，装入洁净盛样容器内，密封并标明标记，备用。7.1.4标准储备液：分别准确称取1g(士0.005g)(精确至0.001g)过敏原标准品和食品基质(7种过敏原分别配制4种基质)，充分混匀后加入Tris-HC1溶液，定容至20L。震荡均匀使试样完全溶解，置于水浴锅60加热振荡提取3h。提取液以13800g高速高心5mi,上清液过低蛋白质吸附的0.22m聚醚砜滤膜后，用Bradford方法（考马斯亮蓝法）测定提取液中总蛋白的浓度，总蛋白浓度在0.05g/mL以上视为有效提取，储备液置于一20冰箱内保存备用。7.1.5系列标准溶液：准确移取适量的标准储备液，用含不同基质的Tis-HCI溶液配制成最终浓度为含全脂奶粉总蛋白0.25mg/L、0.5mg/L、1mg/L、2mg/L、10mg/L、50mg/L、100mg/L(相当于过敏原质量分数2.5mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg、100mg/kg、500mg/kg、1000mg/kg),花生、榛子、杏仁、大豆、鸡蛋、核桃总蛋白0.5mg/L、1mg/L、2mg/L、4mg/L、20mg/L、80mg/L、160mg/L(相当于过敏原质量分数5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg、200mg/kg、800mg/kg、1600mg/kg)的系列标准工作溶液。7.2试样保存试样与蛋白提取液均在一20冰箱保存。在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化，