番茄黑环病毒检疫鉴定方法 GBT 31795-2015.pdf

中华人民共和国国家标准番茄黑环病毒检疫鉴定方法GB/T31795-2015中国标准出版社出版发行北京市朝阳区和平里西街甲2号(100029)北京市西城区三里河北街16号(100045)网址：服务热线：400-168-0010010-685220062015年8月第一版书号：1550661-49526版权专有侵权必究GB/T31795-2015番茄黑环病毒检疫鉴定方法1范围本标准规定了番茄黑环病毒的DAS-ELISA、RT-PCR、免疫磁珠RT-PCR、实时荧光RT-PCR、鉴别寄主检测和免疫电镜等检疫鉴定方法。本标准适用于植物材料，包括无性繁殖材料、种子和苗木中番茄黑环病毒的检疫鉴定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。SN/T1840植物病毒免疫电镜检测方法SN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样3仪器设备、设施、用具和试剂3.1仪器设备酶标仪、PCR仪、实时荧光PCR仪、超净工作台、电子天平（感量0.001g)、电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统、电子透射显微镜、水浴锅、高速冷冻离心机、超低温冰箱(-80)、高压灭菌锅、制冰机、微波炉、涡旋振荡器。3.2设施植物隔离检疫圃。3.3用具可调式微量移液器(2L、10 L、100 L、200 L、1 000 L)及相应的无 RNase吸头、无 RNase离心管、PCR管、研钵、样品袋、标签、镊子、放大镜、磁力架等。3.4主要试剂除有特殊说明外，所有实验用试剂均为分析纯或生化试剂。TBRV抗体、磁珠（具有超顺磁性的聚苯乙烯珠子，直径280 nm,表面标记有甲苯磺酰基）、Trizol、焦碳酸二乙酯(DEPC)、液氮、三氯甲烷、异戊醇、异丙醇、乙醇、AMV反转录酶、RNA酶抑制剂、TaqDNA聚合酶、DNA分子标记、溴化乙锭、琼脂糖、溴酚蓝等。血清学和分子生物学检测试剂配制见附录B。4症状观察及抽样4.1症状观察现场检疫主要观察进境植物材料上病毒为害的症状，TBRV为害症状描述参见附录A。1