食品安全国家标准 贝类中神经性贝类毒素的测定 GB 5009.261-2016.pdf

GB5009.261-2016中再加入100mL乙醚，盖塞，充分振摇。6000r/min离心15min。离心后小心倒出醚层（上层）溶液至1000mL分液漏斗中，用乙醚重复三次抽提离心管中的沉淀，三次抽提用总量为250mL乙醚，转移醚层液体至分液漏斗中。轻轻振荡（不能生成乳浊液），静置分层后去除水层（下层）及贝肉碎片。将乙醚层移入500mL的圆底烧瓶中，诚压浓缩（旋转蒸发器，35士1）去除乙醚。用1%吐温-60生理盐水将浓缩物在刻度试管中稀释到10mL,充分振摇，制成均匀NSP-1%吐温60生理盐水混悬液。此时1mL液量相当于预先测定的10g去壳贝肉的重量，以此悬浮液作为试验原液进行动物实验。5.3小白鼠试验选择体重为19g一21g的健康ICR品系雄性小鼠6只，随机分2组：检测样品组和空白对照组(1%吐温-60生理盐水)，3只/组。分别取1L待测液或1%吐温-60生理盐水腹腔注射。注射时若有提取液溢出，须将该只小鼠丢弃，并重新注射一只小鼠。记录注射完毕时间和小鼠停止呼吸时的死亡时间，连续观测930m。若小鼠的中位数死亡时间在2h以内，则要用1%吐温-60生理盐水对待测液进行稀释后重新注射，直到小鼠的死亡时间在2h6h内。6分析结果的表述6.1待测样品校正鼠单位(CMU)的确定根据待测样品的小鼠死亡时间（见表A.1)查出相应的鼠单位数MU:根据小鼠的重量（见表A.2)查出其对应的体重校正系数。同一只小鼠的鼠单位与体重校正系数相乘，即得该只小鼠的CMU。选取检测样品受试组中3只小鼠CMU的中位数，即为该样品受试组的中位数CMU,以此值进行62的计算。6,2毒素毒力的计算与结果表述6.2.1NSP毒力的计算试样中NSP毒力按式(1)计算：X=CMUX10、X DF100式中：X一试样中NSP毒力，单位为鼠单位每克(MU/g):CMU一检测样品受试组小鼠的中位数校正鼠单位，单位为鼠单位每毫升(MU/mL):DF一稀释倍数。注：10一单位为毫升，100一单位为克6.2.2结果表述在空白对照组小鼠正常的情况下进行如下判断和表述：若小鼠的死亡时间等于360min,则待测样品的NSP毒力即相当于0.2MU/g。若实验组中位数死亡时间小于120m,则应对样品提取液进行稀释，再选取3只小鼠进行试验，直至得到中位数死亡时间为120min360min为止，根据最后的稀释液实验结果计算样品的鼠单位毒力，报告该样品的NSP毒力为：XX XMU/g。若实险组中位数死亡时间大于360i,则直接计算确定样品鼠单位毒力，报告该样品的NSP毒力为：XX XMU/g.若实验组中所有小鼠在观察930min内均不死亡，则也可报告该样品的NSP毒力小于0.1MU/g。3