果蝇伴性隐性致死试验 GB 15193.11-2003.pdf

GB15193.11-2003剂量可占饲料的5%。阳性对照物可用甲基磺酸乙酯、甲基磺酸甲酯、N-亚硝基二甲胺。6操作步骤6.1受试物配制一般受试物应溶解在水中，如受试物不溶于水，可用食用油、医用淀粉、羧甲基纤维素等配成乳化液或悬浮液，然后再在给样前用水或生理盐水稀释。避免用二甲基亚砜作为介质。受试物应于灌胃前新鲜配制，除非有资料表明以溶液（或悬浊液、乳浊液等）保存具有稳定性，6.2处女蝇的收集开始羽化后，清除管内所有成蝇，然后在6一12内收集的堆蝇即为处女蝇。将处女蝇放入新试管，一只管中不超过25只，以免过分拥挤。6.3接触受试物受试物接触方法常用溶液饲养。受试物溶解后用1%一5%的谁糖水稀择成不同浓度，试管内放入一团手纸，加人1L受试液使纸充分湿透，放人经饥饿4h的雄蝇进行喂饲，新配制的培养基冷却到55C时，倒入受试物，快速磁搅拌2mi接触受试物时间1天3天。6.4交配程序及方法为检测受试物对哪一期生殖细胞最敏感，将雄蝇在接触受试物后按2一3一3天间隔（分别表示对精子、精细胞和精母细胞的效应)与处女蝇交配。即每一试管以一只经处理过的雄蝇按上述程序顺次与2只处女蝇交配，再以所产F,代按雌与雄(1：1或1：2)进行F,一F,交配。12天14天后观察F2代，厚育温度为25C。每一个实验组至少应有3000个样本数。7数据处理根据受试染色体数（即F,代交配的堆蝇数诚去不育数和废管数）与致死阳性管数求出致死率。致死管数致死率(%)=受武染色体数1000以试验组与对照组的致死率按Kastenbaum and Bowman方法进行统计。8结果判定对F,代结果的判斯标准如下：8.1每一试管在多于20个仔代（雌及雄）中没有红色圆眼的野生型雄蝇为阳性，属致死突变。如有2只以上的红色圆眼的野生型雄绳者为阴性。8.2每一试管如确少于20个仔代或只有一只野生型雄蝇的可疑管，需进行F:代的观察。8.3不育：仅存雄、啡亲本而无仔蝇者。