棉花原(良)种产地检疫规程 GB 7411-1987.pdf

GB7411-874.4.1发现病株率在0.1%以上（不含0.1%）的病田棉籽不作种用。4.4.2严格封锁病田：作好病株标记，拔除并集中销毁病株及病残体，清除杂草寄主，及时消毒处理病点土壤（处理技术见附录E)。4.4.3实行水早轮作三年以上。5检疫签证5.1田间检在5.1.1时间：每年进行三次，即蕾期、花铃期和吐絮后期。蕾期以棉枯萎病为主，花铃期以棉黄菱病为主。5.1.2检查要求：第一、二次要求全面调查，块块查到，一株不漏。后期剖杆数，株行团50%，株系圃10%，原种雨和繁殖基地可根据上段检查疑点进行抽样剖查。隔离观条圃的新材料要求全部剖杆检查。5.2室内检查5.2.1主要检查设备：显微镜一台冰箱一台恒温箱二台高压消毒锅二台接种箱（超净台）一个（台）培养皿200副酒精灯四个500m1三角瓶20只5.2.2病残体检验方法选用下列之一：5.2.2.1保湿培养：取可疑病株的枝、茎一小段，清洗干净后，剥去表皮，用70%酒精表面消罨3min或0.1%升汞液（升汞1g,浓盐酸2.5ml,水1000m1配制）消毒13min,并用消毒水冲洗3次（新鲜病苗可以先在95%酒精里预浸后，在酒精灯火焰上烧去酒精，撕去表皮），再将木质部削成35m长的小块，放在滴有无菌水滴的载玻片上，每片放34块，将玻片放人垫有双层吸水纸或脱脂棉的培养皿内，盖好皿盖置于20.022.5或2730温箱诱发黄萎病和枯萎病，或直接放在房间进行保温培养，25天后，长出白色菌丝体时，直接用显微镜检查，鉴定枯、黄菱病病菌。5.2.2.2组织分离：组织分离要在无菌室（超净台）或接种箱酒精灯火焰灭菌条件下进行。将病株茎杆刘去表皮洗净，用0.1%升汞液表面消毒1mi或10%漂白粉表面消毒3min,用灭菌水冲洗3次，然后用灭茵剪刀剪取长约5mm的小块，置于经灭菌和凝固了的马铃薯琼脂培养基平面上（培养基：马铃薯2008，蔗糖15g,粗琼脂20g,水1000m1),每皿放56块，在2426温箱中培养515天，先用肉眼检查菌落，然后进行镜检。如怀疑枯、黄萎病混生，可选择单纯的琼脂培养基（琼脂20g,水1000m1)使黄菱病菌能同时生长出来。5.2.2.3种子检验：5.2.2.3.1流水冲洗：将应检种子置于三角瓶中(500m1三角瓶可放种子50100粒)，瓶口罩上铁网或纱布，取橡皮管一段，一瑞连接在自来水龙头上，另一端接一玻管，插入三角瓶，开放龙头，在流水下冲洗24h,如无流水冲洗条件，可将棉籽放入70%酒精中浸23s除去气泡，然后置于0.1%升汞液中消毒2min,再用灭菌水冲洗23次。或将棉籽放在20%漂白粉液中浸35min,无需冲洗。5.2.2.3.2分离：将冲洗或消毒过的种子，用灭菌镊子移放在分离黄菱病菌的琼脂培养基和分离枯菱病菌的马铃薯蔗糖琼脂培养基平面上，每放5粒，置2225左右的温箱培养1015天，用低倍镜检查每粒棉籽周围有无枯、黄菱病菌，并用高倍镜检有无大分生孢子来确定是否枯萎病菌，记载