动物细胞培养综合.pptx

第一页，共三十页。细细胞胞工工程程植物组织培养植物组织培养植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞培养动物细胞培养动物细胞融合动物细胞融合单克隆抗体技术单克隆抗体技术胚胎移植胚胎移植核移植核移植植物植物细胞细胞工程工程技术技术动物动物细胞细胞工程工程技术技术第二页，共三十页。所采用技术的理论根底 植物细胞工程通常采用的技 术 手 段 植物组织培养植物组织培养 植物体细胞杂交植物体细胞杂交植物细胞的全能性植物细胞的全能性植物组织培养植物组织培养第三页，共三十页。第四页，共三十页。烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健康皮烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植，但对于大面积烧伤病人来讲，肤进行自体移植，但对于大面积烧伤病人来讲，健康皮肤很有限，请同学们想一想如何来治疗该健康皮肤很有限，请同学们想一想如何来治疗该病人？病人？许多动物的细胞能够分泌蛋白质许多动物的细胞能够分泌蛋白质,如抗体等如抗体等.但但是是,单个细胞产生的蛋白质量是很少的单个细胞产生的蛋白质量是很少的,怎样才能怎样才能获得大量的分泌蛋白呢获得大量的分泌蛋白呢?第五页，共三十页。一、动物细胞培养条件一、动物细胞培养条件 P461、无菌、无毒的环境、无菌、无毒的环境 添加一定量的抗生素，定期更换培养液添加一定量的抗生素，定期更换培养液2、营养、营养葡萄糖、氨基酸、微量元素、无机盐、促生长因葡萄糖、氨基酸、微量元素、无机盐、促生长因子、动物血清、血浆等。子、动物血清、血浆等。3、温度和、温度和PH 36.5+-0.5度度,7.2-7.44、气体环境：、气体环境：O2和和CO295%空气和空气和5%CO2 保证细胞顺利的生保证细胞顺利的生长增殖长增殖第六页，共三十页。二、动物细胞培养概念二、动物细胞培养概念 P441、概念：2、目的：3、理论根底：细胞增值细胞增值获得细胞和细胞产物获得细胞和细胞产物 就是从动物机体内取出相关的组织，就是从动物机体内取出相关的组织，将它将它分散分散成单个细胞，然后，放在成单个细胞，然后，放在适宜适宜的培养基的培养基中，让这些细胞生长和增殖。中，让这些细胞生长和增殖。三、动物细胞培养过程三、动物细胞培养过程 P44-46第七页，共三十页。动物动物胚胎胚胎或或幼龄幼龄动动物的组织、器官物的组织、器官胰蛋白酶胰蛋白酶剪碎剪碎单个细胞单个细胞加培养液加培养液制成制成细胞细胞悬浮悬浮液液 原代培养原代培养细胞增殖细胞增殖去掉组织去掉组织间蛋白间蛋白 传代培养传代培养胰蛋白酶胰蛋白酶10代细胞代细胞50代细胞代细胞50代以后代以后核型不变核型不变核型改变核型改变遗传物质遗传物质改变改变三、动物细胞培养过程：三、动物细胞培养过程：第八页，共三十页。四、动物细胞培养技术的应用四、动物细胞培养技术的应用 P47v大规模生产有重要价值的生物制品，如病毒大规模生产有重要价值的生物制品，如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等疫苗、干扰素、单克隆抗体等v为基因工程提供受体细胞为基因工程提供受体细胞v用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性v科学家培养正常或各种病变的细胞，用于生科学家培养正常或各种病变的细胞，用于生理、病理、药理等方面的研究。理、病理、药理等方面的研究。第九页，共三十页。获得细胞获得细胞或细或细胞产物胞产物细胞的全能性细胞的全能性植物体植物体培养结果培养结果快速繁殖、培育无快速繁殖、培育无病毒植株等病毒植株等培养目的培养目的葡萄糖、葡萄糖、动物动物血清血清蔗糖、蔗糖、植物激植物激素素培养基特有成分培养基特有成分液体培养基液体培养基固体培养基固体培养基培养基性质培养基性质细胞增殖细胞增殖原理原理动物细胞培养动物细胞培养植物组织培养植物组织培养比较工程比较工程植物细胞和动物细胞培养的比较植物细胞和动物细胞培养的比较细胞群体细胞群体第十页，共三十页。1、动物细胞培养的正确过程是 A原代培养传代培养传代培养细胞株细胞株细胞系细胞系B原代培养传代培养传代培养细胞系细胞系细胞株细胞株C传代培养细胞系细胞系原代培养原代培养细胞株细胞株D原代培养细胞系细胞系传代培养传代培养细胞株细胞株2、动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于A 培养基不同B 动物细胞培养不需要在与菌条件下进行C 动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能D 动物细胞能大量培养，而植物细胞只能培养成植株第十一页，共三十页。3、以下有关动物细胞培养的表达，正确的选项是A 动物细胞培养的目的是获得大量的细胞分泌蛋白B 细胞遗传物质的改变发生于原代培养过程中C 在培养瓶中要定期用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离，制成悬浮液D 动物细胞培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、生长素和动物血清等 4、动物细胞培养技术的用途有 生产有价值的生物制品，如病毒疫苗、干扰素等 生产基因工程技术中所用的受体细胞可以用于检测有毒物质培养的各种细胞可直接用于生理、病理、药理等方面的研究 A B C D 第十二页，共三十页。(1)容器A中放置的是动物器官或组织。它一般取自 (2)容器A中的动物器官或组织首先要进行的处理是，然后用酶处理，这是为了使细胞分散开来。这样做的目的是 (3)培养首先在B瓶中进行，这时的细胞培养称为。(4)为了把B瓶中的细胞分装到C瓶中，用处理，然后配置成，再分装。(5)有少数的细胞能存活下来，继续传下去，一般能传到4050 代，这种传代细胞叫做。这种细胞的遗传物质与前面的细胞相同，不同。6这种细胞传至50代后一般不能再传，但有少数细胞遗传物质发生改变，带有 细胞的特征，有可能在培养条件下无限制的传下去。胚胚胎或幼龄动物组织器官胎或幼龄动物组织器官剪碎剪碎胰蛋白胰蛋白使每个细胞都能与培养液接触使每个细胞都能与培养液接触原代培养原代培养胰蛋白酶胰蛋白酶悬浮液悬浮液细胞株细胞株相同相同癌癌第十三页，共三十页。第十四页，共三十页。动物体细胞核移植概念动物体细胞核移植概念:将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新胚胎最终发育成动物一个新的胚胎，这个新胚胎最终发育成动物个体。个体。用核移植的方法得到的动物称为用核移植的方法得到的动物称为克隆动物克隆动物核移植核移植胚胎细胞核移植胚胎细胞核移植体细胞核移植难度体细胞核移植难度高高受体细胞：受体细胞：M期期的卵母细胞的卵母细胞第十五页，共三十页。、动物的克隆与植物克隆一样吗？、动物的克隆与植物克隆一样吗？不不、用动物体细胞进行克隆的过程、用动物体细胞进行克隆的过程,其实际其实际操作过程是什么？操作过程是什么？动物克隆过程的实际是动物克隆过程的实际是细胞核移植细胞核移植、阅读课本、阅读课本P48，简述高产牛体细，简述高产牛体细胞核移植过程胞核移植过程第十六页，共三十页。第十七页，共三十页。思考题思考题、核在进行体细胞核移植之前，为何要去掉受体卵母细胞的核、核在进行体细胞核移植之前，为何要去掉受体卵母细胞的核？为使核移植动物的遗传物质全部来自有利用价值的动物提为使核移植动物的遗传物质全部来自有利用价值的动物提供的细胞。供的细胞。、用于核移植的供体细胞一般都选用传代、用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，为什代以内的细胞，为什么？么？10代以内的细胞保持一般保持正常二倍体的核型，未突变代以内的细胞保持一般保持正常二倍体的核型，未突变3、细胞核移植生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行了、细胞核移植生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？的复制吗？为什么？不是，克隆动物绝大局部不是，克隆动物绝大局部DNA来自供体细胞核，但核外还有少来自供体细胞核，但核外还有少局部局部DNA如线粒体如线粒体DNA来自受体卵母细胞来自受体卵母细胞第十八页，共三十页。克隆动物的研究意义克隆动物的研究意义1.克隆动物作为生物反响器，生产医用蛋白克隆动物作为生物反响器，生产医用蛋白2.改进动物品种改进动物品种 3.治疗人类疾病，作为供体治疗人类疾病，作为供体4.保护濒危动物保护濒危动物体细胞核移植技术存在的问题：体细胞核移植技术存在的问题：许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体型过大，异常肥胖，发育困难，脏器缺体型过大，异常肥胖，发育困难，脏器缺陷，免疫失调等陷，免疫失调等。第十九页，共三十页。第二十页，共三十页。如果将牛的细胞与植物细胞杂交，得到绿色的如果将牛的细胞与植物细胞杂交，得到绿色的小奶牛，那岂不是只要晒晒太阳就可以挤出牛小奶牛，那岂不是只要晒晒太阳就可以挤出牛奶啦！奶啦！动物细胞也能融合吗？动物细胞也能融合吗？第二十一页，共三十页。动物细胞融合1.定义：2.原理：3.融合方法：4.意义：5.应用：细胞膜具有流动性细胞膜具有流动性生产单克隆抗体生产单克隆抗体第二十二页，共三十页。1、动物细胞融合过程不同不同DNA的两个的两个细胞细胞灭活病毒诱导细胞灭活病毒诱导细胞融合融合融合后的细胞进行融合后的细胞进行有丝分裂有丝分裂第二十三页，共三十页。主要用于制备主要用于制备单克隆抗体单克隆抗体获得杂种植株获得杂种植株用途用途物理、化学方法物理、化学方法同左同左灭活的病毒灭活的病毒物理离心、振动、物理离心、振动、电刺激电刺激化学聚乙二醇化学聚乙二醇诱导方法诱导方法使细胞分散后诱使细胞分散后诱导细胞融合导细胞融合去除细胞壁后诱去除细胞壁后诱导原生质体融合导原生质体融合细胞融合的方法细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、植物细胞全能性植物细胞全能性原理原理动物细胞融合动物细胞融合植物体细胞杂交植物体细胞杂交比较工程比较工程植物、动物细胞融合的比较植物、动物细胞融合的比较第二十四页，共三十页。设计方案：设计方案：一个一个B B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？杂种细胞杂种细胞二、单克隆抗体二、单克隆抗体1.传统获取抗体方法：传统获取抗体方法：缺点：缺点：反复注射，血清中获取反复注射，血清中获取第二十五页，共三十页。动物细胞动物细胞融合技术融合技术B、BB、B瘤瘤、瘤瘤、瘤瘤、瘤、瘤只有杂交细只有杂交细胞才能活胞才能活动物细胞培养动物细胞培养单克隆抗体制备单克隆抗体制备过程过程获得产生相应抗获得产生相应抗体的体的B淋巴细胞淋巴细胞第二十六页，共三十页。2.制备过程：制备过程：获取效应获取效应B细胞，骨髓瘤细胞细胞，骨髓瘤细胞 通过什么方法获得效应通过什么方法获得效应B细胞？怎样能得到足细胞？怎样能得到足够多的骨髓瘤细胞？够多的骨髓瘤细胞？人工诱导融合：关键：人工诱导融合：关键：方法：方法：结果：结果：用特定的用特定的选择培养基选择培养基筛选筛选出杂交瘤细胞出杂交瘤细胞此细胞特点：此细胞特点：体外进行细胞培养体外进行细胞培养膜的融合膜的融合BB B B瘤瘤 瘤瘤瘤瘤 瘤瘤迅速大量增值迅速大量增值产生专一抗体产生专一抗体第二十七页，共三十页。克隆杂交细胞，克隆杂交细胞，再筛选，再筛选，目的：目的：体外或体内克隆体外或体内克隆 提取单克隆抗体提取单克隆抗体3.单克隆抗体优点：单克隆抗体优点：筛选出能产生所需抗体的杂交瘤筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞细胞特异性强特异性强灵敏度高灵敏度高可以大量制备可以大量制备第二十八页，共三十页。4.单克隆抗体的应用：在根底理论研究中具有重要意义在根底理论研究中具有重要意义 在疾病诊断、治疗和预防方面，具有在疾病诊断、治疗和预防方面，具有 特异性高、灵敏度高等优越性。特异性高、灵敏度高等优越性。生物导弹生物导弹第二十九页，共三十页。内容总结细胞工程。36.5+-0.5度,7.2-7.4。用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性。B原代培养传代培养细胞系细胞株。D原代培养细胞系传代培养细胞株。2、动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于。D 动物细胞能大量培养，而植物细