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农药残留快速检测技术第一页，共三十四页。一、国内农残快速检测的现状及意义 二、常用的农药残留快速检测方法 三、农残快速检测方法的介绍 四、农残快速检测方法的本卷须知目录第二页，共三十四页。一现状一现状现状现状1 1：起步晚、意识淡薄、缺乏宣传。：起步晚、意识淡薄、缺乏宣传。现状现状2 2：投入少、检测力量薄弱、缺乏有效：投入少、检测力量薄弱、缺乏有效的数据信息监管。的数据信息监管。现状现状3 3：地区之间、部门之间、单位之间差异：地区之间、部门之间、单位之间差异极大极大一、国内农残快速检测的现状及意义一、国内农残快速检测的现状及意义第三页，共三十四页。二快速检测实施的必要性二快速检测实施的必要性农残超标的主要原因：农残超标的主要原因：一是生产者不严格按农药平安使用准那一是生产者不严格按农药平安使用准那么的要求进行生产么的要求进行生产,使用违禁农药或使用量和使用违禁农药或使用量和平安期掌握不好。平安期掌握不好。二是施药器具喷洒的均匀性欠佳二是施药器具喷洒的均匀性欠佳,易导致易导致局部给药超量所致。局部给药超量所致。由于高毒、高残留的有机磷农药如：对硫磷、由于高毒、高残留的有机磷农药如：对硫磷、甲基对硫磷、乐果、氧乐果、敌敌畏及甲胺磷等甲基对硫磷、乐果、氧乐果、敌敌畏及甲胺磷等占据了杀虫剂产量的占据了杀虫剂产量的70以上，并且其中以上，并且其中70以以上的中毒事故都是由有机磷农药引起的。上的中毒事故都是由有机磷农药引起的。一、国内农残快速检测的现状及意义一、国内农残快速检测的现状及意义第四页，共三十四页。二农药残留快速检测技术的意义二农药残留快速检测技术的意义 农药残留快速检测技术是保障农产品质量农药残留快速检测技术是保障农产品质量平安的重要技术支撑。平安的重要技术支撑。农药残留快速检测技术在鲜活农产品农药残留快速检测技术在鲜活农产品现场监测、市场准入、进入口岸贸易、现场监测、市场准入、进入口岸贸易、快速筛查等工作中发挥着越来越重要的快速筛查等工作中发挥着越来越重要的作用。作用。一、国内农残快速检测的现状及意义一、国内农残快速检测的现状及意义第五页，共三十四页。l生化检测生化检测l生物检测生物检测l化学比色化学比色酶抑制法酶抑制法免疫分析法免疫分析法发光菌检测法发光菌检测法敏感家蝇检测法敏感家蝇检测法速测卡速测卡速测仪速测仪 主要为酶免疫法主要为酶免疫法二、常用的农药残留快速检测方法二、常用的农药残留快速检测方法第六页，共三十四页。方法检测对象国内外对比化学检测技术有机磷灵敏度低酶抑制检测技术有机磷和氨基甲酸酯国内假阳性、假阴性率高，几十余家生产厂商，多种速测卡，速测仪，GB/T 5009.199-2003;NY/T 448-2001国外 测定样品和农药种类有限，欧美作为普查农药残留和田间实地检测的基本手段；AOAC官方方法 964.17免疫分析法有机磷、氨基甲酸酯、硫代氨基甲酸酯类、有机氯类、三嗪类、拟除虫菊酯类和酰酯类等几十种农药国内研究活跃，但未有整正推广使用的商品化产品国外技术成熟，灵敏度高，FAO推荐方法，美国USAD、EPA、AOAC制定了评定标准，但经认证的有限，经EPA认证的免疫试剂盒约有4个厂家的26种试剂盒；EPA方法4010、EPA方法 4015 EPA方法3030等生物传感器有机磷、氨基甲酸酯国内处于研究阶段 国外电导型生物传感器、光寻址电位型传感器、安培型传感器，处于研究和应用阶段，并未广泛推广使用第七页，共三十四页。lGB/T 5009.199-2003蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测lNY/T 448-2001蔬菜上有机磷和氨基甲酸酯类农药残毒快速检测方法二、我国的农药残留快速检测方法二、我国的农药残留快速检测方法第八页，共三十四页。小知识小知识 依据依据?中华人民共和国标准化法中华人民共和国标准化法?的规定，按照适用范围将的规定，按照适用范围将我国的标准划分为国家标准、行业标准、地方标准和企业标我国的标准划分为国家标准、行业标准、地方标准和企业标准准4个层次。个层次。二、我国的农药残留快速检测方法二、我国的农药残留快速检测方法第九页，共三十四页。国标和行标方法比较国标和行标方法比较国标方法国标方法行标方法行标方法标准编号标准编号 GB/T 5009.199-2003GB/T 5009.199-2003NY/T 448-2001NY/T 448-2001适用范围适用范围原理原理酶抑制原理酶抑制原理比色波长比色波长 412nm412nm4103nm4103nm取样方法取样方法 去掉泥土，剪成去掉泥土，剪成1cm1cm见方见方不锈钢管取样器叶片：不锈钢管取样器叶片：至少至少8-108-10片果菜：从表片果菜：从表皮至果肉皮至果肉1-1.5cm1-1.5cm处处取样量取样量1g1g叶菜类叶菜类2g2g非叶菜类非叶菜类4g4g有机磷和氨基甲酸酯类农药有机磷和氨基甲酸酯类农药全部全部局部局部第十页，共三十四页。国标和行标方法比较国标和行标方法比较国标方法国标方法行标方法行标方法缓冲液缓冲液pH8pH8磷酸缓冲液磷酸缓冲液5mL5mLpH8pH8磷酸缓冲液磷酸缓冲液20mL20mL酶酶乙酰胆碱酷酶乙酰胆碱酷酶0.1mL0.1mL丁酰胆碱醋酶丁酰胆碱醋酶50uL50uL显色剂显色剂二硫代二硝基苯甲酸和二硫代二硝基苯甲酸和碳酸氢钠碳酸氢钠0.1mL0.1mL二硫代二硝基苯甲酸二硫代二硝基苯甲酸50uL50uL底物底物硫代乙酰胆碱硫代乙酰胆碱0.1mL0.1mL碘化硫代丁酰胆碱碘化硫代丁酰胆碱50uL50uL第十一页，共三十四页。国标和行标方法比较国标和行标方法比较国标方法国标方法行标方法行标方法提取时间提取时间1-2min1-2min需提取液的量需提取液的量2.5mL2.5mL3mL3mL培养温度培养温度373737-3837-38培养时间培养时间至少至少15min15min30min30min结果判定结果判定抑制率抑制率50%50%为合格为合格抑制率抑制率70%70%为合格为合格第十二页，共三十四页。三、方法介绍三、方法介绍 本标准适用于本标准适用于蔬菜蔬菜中中有机磷有机磷和和氨基甲氨基甲酸酯酸酯类农药残留量的类农药残留量的快速快速筛选测定。筛选测定。一适用范围一适用范围以以GB/T5009.199-2003中酶抑制率法为例中酶抑制率法为例第十三页，共三十四页。有机磷或氨基甲酸酯类农药有机磷或氨基甲酸酯类农药乙酰胆碱乙酰胆碱显色剂显色剂黄色物质黄色物质温度、温度、pHpH、胆碱酯酶等、胆碱酯酶等一一定定条条件件胆碱胆碱乙酰乙酰+三、方法介绍以三、方法介绍以GB/T5009.199-2003中酶抑制率中酶抑制率法为例法为例水解水解412nm412nm测定一定时间内的吸光度测定一定时间内的吸光度二原理二原理第十四页，共三十四页。原理：在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用，抑制率与农药浓度成正相关关系。正常情况下，酶胆碱酯酶催化神经传导代谢产物乙酰胆碱水解，其水解产物与显色剂反响，产生黄色物质，用农药残毒速测仪于412nm处测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率，通过抑制率判断样品中是否存在有机磷或氨基甲酸酯类农药残留。三、方法介绍三、方法介绍第十五页，共三十四页。三、方法介绍三、方法介绍GDYN-308S农药残留速测仪提取瓶三仪器三仪器配套箱超声提取仪第十六页，共三十四页。移液器电子台秤不锈钢取样器三、方法介绍三、方法介绍搅拌棒比色瓶第十七页，共三十四页。结果判定结果判定样品测量样品测量样品处理样品处理空白测量空白测量 四实验流程以小天鹅四实验流程以小天鹅GDYN-308S农药残农药残留速测仪为例留速测仪为例试剂配制试剂配制样品处理样品处理空白测量空白测量样品处理样品处理空白测量空白测量样品处理样品处理空白测量空白测量样品测量样品测量样品处理样品处理空白测量空白测量样品测量样品测量样品处理样品处理空白测量空白测量空白测量空白测量空白测量空白测量空白测量空白测量样品处理样品处理空白测量空白测量样品处理样品处理空白测量空白测量样品处理样品处理样品测量样品测量空白测量空白测量样品处理样品处理样品测量样品测量空白测量空白测量样品处理样品处理三、方法介绍三、方法介绍第十八页，共三十四页。1、试剂配制农残试剂配制方法农残试剂配制方法 农残试剂一：农残试剂一：取塑料方瓶，将一包固体取塑料方瓶，将一包固体+500mL+500mL蒸馏水。蒸馏水。农残试剂二：农残试剂二：一支真空玻璃瓶一支真空玻璃瓶5mL5mL转移至标有农残试剂二的塑料瓶中。转移至标有农残试剂二的塑料瓶中。农残试剂三：农残试剂三：一支塑料管试剂三参加到一支塑料管试剂三参加到25mL25mL农残试剂一，混匀。农残试剂一，混匀。农残试剂四：农残试剂四：一支塑料管试剂四参加到一支塑料管试剂四参加到25mL25mL蒸馏水，混匀。蒸馏水，混匀。实验用水：去离子水、蒸馏水或者纯洁水实验用水：去离子水、蒸馏水或者纯洁水三、方法介绍三、方法介绍第十九页，共三十四页。农残试剂二、三、四必须在冰箱0 4中避光保存，且从冰箱中取出后，其温度必须到达室温前方可使用。采用双重保护技术，酶试剂在04下保质期为1年，在室温下保质期为15天。三、方法介绍三、方法介绍第二十页，共三十四页。2、空白测量 比色瓶中+一1.00ml+二 50l+三50l，摇 匀，放入第一通道中，计时3分钟手动按向上键。参加试剂四50l，倒计时3分钟自动，仪器显示A值，空白测量完毕。要求A大于0.100。假设小于那么增加二用量或者增加显色时间。三、方法介绍三、方法介绍第二十一页，共三十四页。3、样品处理 样品提取瓶+2.0克待测样品+10.0ml一。超声提取3分钟，取出。三、方法介绍三、方法介绍第二十二页，共三十四页。1 1样品处理样品处理:选取有代表性的蔬菜样品，冲洗掉外表选取有代表性的蔬菜样品，冲洗掉外表泥土，对于叶菜如菠菜、油菜、白菜等泥土，对于叶菜如菠菜、油菜、白菜等样品，将叶片局部包括茎部切成样品，将叶片局部包括茎部切成1cm1cm左右左右见方碎片；对于果实蔬菜如黄瓜、豆角等见方碎片；对于果实蔬菜如黄瓜、豆角等样品，用水果刀顺皮削下一片，然后切成样品，用水果刀顺皮削下一片，然后切成1cm1cm左右见方碎片。左右见方碎片。三、方法介绍三、方法介绍第二十三页，共三十四页。辛辣样品的处理：辛辣样品的处理：选取有代表性的蔬菜样品，冲洗掉外表泥土，对于叶选取有代表性的蔬菜样品，冲洗掉外表泥土，对于叶菜如韭菜、韭黄、大葱等样品，将叶片局部切成菜如韭菜、韭黄、大葱等样品，将叶片局部切成2cm2cm左右长的小段；对于辣椒、生姜等样品，将可食局部切成左右长的小段；对于辣椒、生姜等样品，将可食局部切成1cm1cm左右见方碎片，对于大蒜，将蒜扒皮后整瓣提取。左右见方碎片，对于大蒜，将蒜扒皮后整瓣提取。三、方法介绍三、方法介绍第二十四页，共三十四页。2 2样品提取样品提取 用电子台秤称取用电子台秤称取2.0g2.0g样品于提取瓶中，用样品于提取瓶中，用移液器参加移液器参加10.0ml10.0ml农残试剂一，用搅拌棒将样农残试剂一，用搅拌棒将样品压入页面下。然后将提取瓶放入超声提取仪品压入页面下。然后将提取瓶放入超声提取仪中提取中提取3min3min在超声提取仪中预先参加在超声提取仪中预先参加500ml500ml蒸馏水。用移液器移取蒸馏水。用移液器移取1.00ml1.00ml样品提取液于样品提取液于比色瓶中，至于多功能固定架上备用。比色瓶中，至于多功能固定架上备用。三、方法介绍三、方法介绍第二十五页，共三十四页。辛辣样品的提取：辛辣样品的提取：用电子台秤称取用电子台秤称取2.0g2.0g样品大蒜取样品大蒜取2 2瓣于提取瓶中，用瓣于提取瓶中，用移液器参加移液器参加10.0ml10.0ml农残试剂一，再参加农残试剂一，再参加5050微升辛辣物质干扰专微升辛辣物质干扰专用消除试剂，用搅拌棒将样品压入页面下，将样品提取瓶置于用消除试剂，用搅拌棒将样品压入页面下，将样品提取瓶置于比色瓶固定架