免疫细胞功能检测技术第一页，共四十三页。一淋巴细胞的功能检测淋巴细胞功能测定可分为体内实验和体外实验。体内实验主要是间接了解淋巴细胞对抗原、半抗原或有丝分裂原的应答反响；体外实验主要包括淋巴细胞对抗原或有丝分裂原刺激后的增殖反响、细胞毒性试验及淋巴细胞分泌产物的测定第二页，共四十三页。淋巴细胞T细胞〔负责细胞免疫功能〕B细胞〔执行体液免疫功能〕NK细胞〔非特异性免疫作用〕第三页，共四十三页。一、T细胞功能的检测T细胞增殖试验T细胞分泌功能测定T细胞介导的细胞毒试验体内试验第四页，共四十三页。〔一〕T淋巴细胞增殖试验1.原理：淋巴细胞DNA合成分化母细胞刺激物细胞变大细胞浆扩大空泡核仁明显核染色质疏松第五页，共四十三页。未转化和转化淋巴细胞的形态特征转化的淋巴细胞未转化的淋巴细胞淋巴母细胞过渡型细胞大小(直径μm)12～2012～166～8核大小、染色质增大、疏松增大、疏松不增大、密集核仁清晰、1～4个有或无无有丝分裂有或无无无胞质、着色增多、嗜碱增多、嗜碱极少、天青色浆内空泡有或无有或无无伪足有或无有或无无第六页，共四十三页。2.淋巴细胞转化的刺激物非特异性刺激物：PHA------T细胞ConA-------T细胞PWM-------T、B细胞LPS-------B细胞特异性刺激物：异种抗原同种组织抗原第七页，共四十三页。3.检测方法形态法：刺激物淋巴细胞〔4-6天〕母细胞化同位素法：PHA淋巴细胞〔54h〕DNA合成期+3HTdR掺入收集细胞检测β射线测定细胞内的3H－TdR第八页，共四十三页。〔1〕形态学检查法%100胞数转化和未转化的淋巴细转化的淋巴细胞数转化率第九页，共四十三页。方法学评价：优点：形态学方法简便易行，普通光学显微镜便能观察结果，适于基层实验室应用。缺点：是依靠肉眼观察形态学变化，判断结果易受主观因素影响，重复性和准确性较差。第十页，共四十三页。培养液3H-TdRPHA淋巴细胞全血分层液离心过滤测量放射性〔2〕3H-TdR掺入法第十一页，共四十三页。优点：3H-TdR掺入法敏感性高，客观性强，重复性好。缺点：但需一定设备条件，同时还存在放射性核素污染问题。均值A对照孔均值A试验孔570nm570nmSI第十二页，共四十三页。培养液3H-TdRPHA淋巴细胞全血分层液离心过滤测量放射性MTT测吸光度(3)MTT比色法第十三页，共四十三页。(二)T细胞分泌功能测定体外培养的T细胞经各种丝裂原或抗原刺激后,分泌各种细胞因子,可借助免疫学、细胞生物学及分子生物学技术分别检测细胞因子...
