2022年医学专题—大肠菌群检验重点(1).ppt

大肠菌群检测(jin c)(jin c)第一页，共二十四页。检检验验程程序序检检 样样25g(mL)样品样品(yngpn)+225mL稀释液，均稀释液，均质质10倍系列倍系列(xli)稀释稀释选择适宜选择适宜3个连续稀释度的样品个连续稀释度的样品(yngpn)匀液，接种至匀液，接种至月桂基硫酸盐胰蛋白胨（月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤管）肉汤管不产气不产气产气产气煌绿乳糖胆盐（煌绿乳糖胆盐（BGLB)肉肉汤汤不产气不产气产气产气大肠菌群阴性大肠菌群阴性大肠菌群阳性大肠菌群阳性查查MPN表表报告结果报告结果36148h2h36148h2h检检样样初初发发酵酵复复发发酵酵报报告告第二页，共二十四页。检检 样样固体固体(gt)样品：在电子天平上称取样品：在电子天平上称取25g +225mL0.85%灭菌生理灭菌生理 盐水盐水液体样品：直接取用液体样品：直接取用固体样品存放罐固体样品存放罐第三页，共二十四页。固体样品(yngpn)(yngpn)称量l l用镊子取酒精棉擦手，点燃用镊子取酒精棉擦手，点燃用镊子取酒精棉擦手，点燃用镊子取酒精棉擦手，点燃(din rn)(din rn)酒精灯；酒精灯；酒精灯；酒精灯；l l打开稀释瓶盖，放在天平上，等显示屏上的数字稳定后，按打开稀释瓶盖，放在天平上，等显示屏上的数字稳定后，按打开稀释瓶盖，放在天平上，等显示屏上的数字稳定后，按打开稀释瓶盖，放在天平上，等显示屏上的数字稳定后，按“去皮去皮去皮去皮”键，当显示屏上的数字显示为键，当显示屏上的数字显示为键，当显示屏上的数字显示为键，当显示屏上的数字显示为“0”“0”时，可开始称量。时，可开始称量。时，可开始称量。时，可开始称量。去去皮皮键键第四页，共二十四页。初初 发发 酵酵取（带上试管架）：取（带上试管架）：l l单料管单料管9支支l l装有装有0.85%灭菌生理盐水灭菌生理盐水(shnglynshu)(shnglynshu)的生理的生理盐水盐水(shnglynshu)(shnglynshu)灌灌1个个l l装有装有9mL 0.85%灭菌生理盐水的试管灭菌生理盐水的试管3支支第五页，共二十四页。操操 作作 步步 骤骤1.1.用酒精用酒精用酒精用酒精(jijng)(jijng)棉消毒操作台棉消毒操作台棉消毒操作台棉消毒操作台第六页，共二十四页。操操 作作 步步 骤骤2.用酒精用酒精(jijng)(jijng)棉消毒双手棉消毒双手第七页，共二十四页。操操 作作 步步 骤骤3.3.点燃点燃点燃点燃(din rn)(din rn)酒精灯酒精灯酒精灯酒精灯第八页，共二十四页。操操 作作 步步 骤骤4.为装有培养基的试管为装有培养基的试管(shgun)(shgun)编号编号第九页，共二十四页。为试管为试管(shgun)(shgun)编号编号编号原则：编号原则：编号原则：编号原则：l l固体样品：固体样品：固体样品：固体样品：1 1、0.10.1、0.010.01（表示（表示（表示（表示(biosh)(biosh)加入的固体样品为加入的固体样品为加入的固体样品为加入的固体样品为1g1g、0.1g0.1g、0.01g0.01g）l l液体样品：液体样品：液体样品：液体样品：1010、1 1、0.10.1（表示加入的液体样品为（表示加入的液体样品为（表示加入的液体样品为（表示加入的液体样品为10mL10mL、1mL1mL、0.1mL0.1mL）双双 料料单单 料料1110.10.10.10.01 0.01 0.011010101110.10.1 0.1第十页，共二十四页。l l用量筒用量筒用量筒用量筒(lingtng)(lingtng)量取量取量取量取225mL0.85%225mL0.85%灭菌生理盐水至灭菌生理盐水至灭菌生理盐水至灭菌生理盐水至稀释瓶中。（注意：稀释瓶、稀释瓶中。（注意：稀释瓶、稀释瓶中。（注意：稀释瓶、稀释瓶中。（注意：稀释瓶、带塞锥形瓶开盖前要过火，量带塞锥形瓶开盖前要过火，量带塞锥形瓶开盖前要过火，量带塞锥形瓶开盖前要过火，量筒、装有筒、装有筒、装有筒、装有0.85%0.85%灭菌生理盐水灭菌生理盐水灭菌生理盐水灭菌生理盐水的锥形瓶及其塞子应放在酒精灯的锥形瓶及其塞子应放在酒精灯的锥形瓶及其塞子应放在酒精灯的锥形瓶及其塞子应放在酒精灯周围周围周围周围15cm15cm的范围内）的范围内）的范围内）的范围内）固体样品固体样品(yngpn)称量后处称量后处理理第十一页，共二十四页。液液 体体样样 品品液体液体(yt)样品：直接吸取样品：直接吸取1mL样液至单料管中样液至单料管中1110.10.10.11mL1mL1mL注意注意(zh y)：加样加样液后不能液后不能振摇试管。振摇试管。第十二页，共二十四页。液体样品：液体样品：液体样品：液体样品：l l吸取吸取吸取吸取25mL25mL液体样品至稀释瓶中，加入液体样品至稀释瓶中，加入液体样品至稀释瓶中，加入液体样品至稀释瓶中，加入225mL0.85%225mL0.85%灭菌生理灭菌生理灭菌生理灭菌生理盐水，盖上盖子盐水，盖上盖子盐水，盖上盖子盐水，盖上盖子(gi zi)(gi zi)，混匀；，混匀；，混匀；，混匀；l l从稀释瓶中分别吸取从稀释瓶中分别吸取从稀释瓶中分别吸取从稀释瓶中分别吸取1mL1mL被稀释被稀释被稀释被稀释1010倍的饮用水至最后三支单倍的饮用水至最后三支单倍的饮用水至最后三支单倍的饮用水至最后三支单料管中。料管中。料管中。料管中。液液 体体样样 品品0.10.10.125mL1mL1mL1mL注意注意(zh y)：加样液后不能振摇试管。加样液后不能振摇试管。第十三页，共二十四页。固体样品：固体样品：固体样品：固体样品：l l从稀释瓶中吸取从稀释瓶中吸取从稀释瓶中吸取从稀释瓶中吸取1mL1mL样液至装有样液至装有样液至装有样液至装有9mL0.85%9mL0.85%灭菌灭菌灭菌灭菌(mi jn)(mi jn)生理盐水生理盐水生理盐水生理盐水的试管中，盖上盖子，混匀；的试管中，盖上盖子，混匀；的试管中，盖上盖子，混匀；的试管中，盖上盖子，混匀；l l从该试管中分别吸取从该试管中分别吸取从该试管中分别吸取从该试管中分别吸取1mL1mL样液至最后三支单料管中。样液至最后三支单料管中。样液至最后三支单料管中。样液至最后三支单料管中。0.010.010.011mL1mL1mL1mL注意注意(zh y)：将样液加入装有稀释液的试管后，振摇试管，将样液加入装有稀释液的试管后，振摇试管，混匀。混匀。样液加入培养基后不能振摇试管。样液加入培养基后不能振摇试管。第十四页，共二十四页。观察初发酵(f jio)(f jio)结果l l取回初发酵结果取回初发酵结果(ji gu)(ji gu)，观察。确定有几支初，观察。确定有几支初发酵管内的小倒管中有气泡产生。发酵管内的小倒管中有气泡产生。第十五页，共二十四页。l l根据对初发酵结果根据对初发酵结果(ji gu)(ji gu)的观察，有的观察，有几支几支小倒小倒管中有气泡，则取管中有气泡，则取几支几支煌绿乳糖胆盐复发酵煌绿乳糖胆盐复发酵管。管。内有小倒管内有小倒管复复 发发 酵酵第十六页，共二十四页。在有气泡的初发酵管后的在有气泡的初发酵管后的相应相应(xingyng)位置位置放上复发酵放上复发酵管管 用接种环移取有气泡初发酵管中液体一环至相对用接种环移取有气泡初发酵管中液体一环至相对(xingdu)应的复发酵管中。（注意接种环的灼烧、冷却）应的复发酵管中。（注意接种环的灼烧、冷却）第十七页，共二十四页。l l将接种将接种(jizhng)(jizhng)好的初发酵管和复发酵管放入恒好的初发酵管和复发酵管放入恒温培养箱。温培养箱。l l注意选择设置为注意选择设置为361的培养箱。的培养箱。361 48h 2h 第十八页，共二十四页。l l观察复发酵结果，小倒管内有气泡观察复发酵结果，小倒管内有气泡(qpo)(qpo)为阳为阳性（性（+），无气泡），无气泡(qpo)(qpo)为阴性（为阴性（-）。）。+-+-+-注：初发酵管产气，复发酵结果注：初发酵管产气，复发酵结果(ji gu)可能产气，也可能可能产气，也可能不产气。不产气。第十九页，共二十四页。查查MPN表表 1 1 1 11第二十页，共二十四页。检验结果记录检验结果记录检样量检样量初发酵结果（管）初发酵结果（管）复发酵结果（管）复发酵结果（管）阳性管数阳性管数10mL1g（或（或mL）+-+-10.1g（或（或mL）+-+-10.01g（或（或mL）-+-+-10.001g（或（或mL）培养条件培养条件温度：温度：时间：时间：温度：温度：时间：时间：检验结果检验结果 MPN/g=1.1备注备注标准值：标准值：单项检验结论：符合（不符合）单项检验结论：符合（不符合）检验检验(jinyn)人：人：检验检验(jinyn)日期：日期：固体固体(gt)样样品品第二十一页，共二十四页。检验结果记录检验结果记录检样量检样量初发酵结果（管）初发酵结果（管）复发酵结果（管）复发酵结果（管）阳性管数阳性管数10mL+-+-11g（或（或mL）+-+-10.1g（或（或mL）-+-+-10.01g（或（或mL）0.001g（或（或mL）培养条件培养条件温度：温度：时间：时间：温度：温度：时间：时间：检验结果检验结果 MPN/mL=0.11备注备注标准值：标准值：单项检验结论：符合（不符合）单项检验结论：符合（不符合）检验检验(jinyn)人：人：检验检验(jinyn)日期：日期：液体液体(yt)样样品品第二十二页，共二十四页。小 结本次检验操作共取：本次检验操作共取：双料管3支，单料管6 6支，装有灭菌生理盐水(shnglynshu)(shnglynshu)的锥形瓶1个，装有个，装有9mL9mL灭菌生理盐水的试管灭菌生理盐水的试管1支（固体样品），复发酵管若干支（根据初发酵结果）本次检验操作共用：本次检验操作共用：固体样品：10mL吸量管1支，支，1mL1mL吸量管吸量管2支，接种环 液体样品：25mL移液管1 1支，10mL吸量管1 1支，1mL吸量管2 2支，接种环支，接种环第二十三页，共二十四页。内容(nirng)总结大肠菌群检测。检 样。361。装有0.85%灭菌生理盐水的生理盐水灌1个。（注意：稀释瓶、带塞锥形瓶开盖前要过火，量筒、装有0.85%灭菌生理盐水的锥形瓶及其塞子应放在酒精灯周围15cm的范围内）。吸取25mL液体样品至稀释瓶中，加入225mL0.85%灭菌生理盐水，盖上盖子(gi zi)，混匀。从稀释瓶中分别吸取1mL被稀释10倍的饮用水至最后三支单料管中。将样液加入装有稀释液的试管后，振摇试管，混匀。复 发 酵第二十四页，共二十四页。