HeLa细胞(xìbāo)的传代培养第一页，共十八页。教学教学(jiāoxué)(jiāoxué)目标目标1.理解(lǐjiě)细胞传代培养的概念和原理2.能按照操作规程进行细胞传代培养的操作第二页，共十八页。细胞细胞(xìbāo)(xìbāo)传代培养的概念传代培养的概念概念：指细胞从一个培养瓶以1:2或其他比率转移，接种到另外的培养瓶中的培养，也叫做继代培养。HeLa细胞是一种贴壁生长(shēngzhǎng)的细胞，在进行传代时通常是采用胰蛋白酶消化，把细胞分散成单细胞再传代。第三页，共十八页。培养细胞培养细胞(xìbāo)(xìbāo)一代生长过程一代生长过程第四页，共十八页。实验实验(shíyàn)(shíyàn)前准备前准备1、材料(cáiliào)：HeLa细胞2、试剂：0.25％胰蛋白酶、1640培养基（含10％小牛血清）、PBS第五页，共十八页。实验实验(shíyàn)(shíyàn)前准备前准备超净工作台CO2培养箱倒置(dàozhì)显微镜3.仪器设备第六页，共十八页。离心机恒温(héngwēn)水浴锅3.仪器设备实验实验(shíyàn)(shíyàn)前准备前准备第七页，共十八页。培养(péiyǎng)瓶，移液管，酒精灯，酒精棉球，试管架，记号笔等。3.仪器设备实验实验(shíyàn)(shíyàn)前准备前准备第八页，共十八页。（1）细胞培养用的器材和试剂(shìjì)灭菌；（2）超净工作台准备（75%酒精擦拭台面，紫外灯照射30min）；（3）试剂预热（37℃水浴锅）；（4）操作人员准备（75%酒精擦拭双手等）。4.实验前准备(zhǔnbèi)工作实验实验(shíyàn)(shíyàn)前准备前准备细胞生存环境：无菌、无毒第九页，共十八页。细胞细胞(xìbāo)(xìbāo)传代操作传代操作1、倒去培养瓶中的旧培养液，加入2-3mL预热的PBS液，轻轻振荡漂洗细胞，以除去(chúqù)悬浮在细胞表面的碎片。吸除培养液第十页，共十八页。细胞传代细胞传代(chuándài)(chuándài)操作操作2、胰蛋白酶(yídànbáiméi)消化：加入适量0.25％胰蛋白酶消化液，37℃消化，注意消化液的量以盖住细胞最好。加消化液第十一页，共十八页。细胞传代细胞传代(chuándài)(chuándài)操作操作3、盖紧瓶盖，放在倒置镜下观察细胞。随着时间的推移，原贴壁的细胞逐渐趋于圆形，在还未漂起时将消化液弃去，加入适量预热(yùrè)后的培养液终止消化。（一般消化时间约为2-3分钟）。消化(xiāohuà)前细胞消化后细胞（适度状态）吸除消化液第十二页，共十八页。细胞细胞(xìbāo)(xìbāo)传代操作传代操作4、用吸管将贴壁的细胞(xìbāo)吹...
