2022年医学专题—Hela细胞的传代培养(1).ppt

HeLa细胞(xbo)的传代培养,第一页，共十八页。,教学(jio xu)目标,1.理解(lji)细胞传代培养的概念和原理2.能按照操作规程进行细胞传代培养的操作,第二页，共十八页。,细胞(xbo)传代培养的概念,概念：指细胞从一个培养瓶以1:2或其他比率转移，接种到另外的培养瓶中的培养，也叫做继代培养。HeLa细胞是一种贴壁生长(shngzhng)的细胞，在进行传代时通常是采用胰蛋白酶消化，把细胞分散成单细胞再传代。,第三页，共十八页。,培养细胞(xbo)一代生长过程,第四页，共十八页。,实验(shyn)前准备,1、材料(cilio)：HeLa细胞 2、试剂：0.25胰蛋白酶、1640培养基（含10 小牛血清）、PBS,第五页，共十八页。,实验(shyn)前准备,超净工作台,CO2培养箱,倒置(dozh)显微镜,3.仪器设备,第六页，共十八页。,离心机,恒温(hngwn)水浴锅,3.仪器设备,实验(shyn)前准备,第七页，共十八页。,培养(piyng)瓶，移液管，酒精灯，酒精棉球，试管架，记号笔等。,3.仪器设备,实验(shyn)前准备,第八页，共十八页。,（1）细胞培养用的器材和试剂(shj)灭菌；（2）超净工作台准备（75%酒精擦拭台面，紫外灯照射30min）；（3）试剂预热（37水浴锅）；（4）操作人员准备（75%酒精擦拭双手等）。,4.实验前准备(zhnbi)工作,实验(shyn)前准备,细胞生存环境：无菌、无毒,第九页，共十八页。,细胞(xbo)传代操作,1、倒去培养瓶中的旧培养液，加入2-3mL预热的PBS液，轻轻振荡漂洗细胞，以除去(ch q)悬浮在细胞表面的碎片。,吸除培养液,第十页，共十八页。,细胞传代(chun di)操作,2、胰蛋白酶(y dn bi mi)消化：加入适量0.25胰蛋白酶消化液，37消化，注意消化液的量以盖住细胞最好。,加消化液,第十一页，共十八页。,细胞传代(chun di)操作,3、盖紧瓶盖，放在倒置镜下观察细胞。随着时间的推移，原贴壁的细胞逐渐趋于圆形，在还未漂起时将消化液弃去，加入适量预热(y r)后的培养液终止消化。（一般消化时间约为2-3分钟）。,消化(xiohu)前细胞,消化后细胞（适度状态）,吸除消化液,第十二页，共十八页。,细胞(xbo)传代操作,4、用吸管将贴壁的细胞(xbo)吹打成悬液。,吹打(chud)成细胞悬液,第十三页，共十八页。,分装(fn zhun),细胞(xbo)传代操作,5、以1：2或1：3进行分装，补充新鲜培养基，并在培养瓶上做好标记，注明代号、日期，轻轻摇匀，置于37 CO2培养箱培养（如果瓶盖不带通气孔，则需将瓶盖旋开半圈）。24h后即可对细胞的生长情况(qngkung)进行观察记录。当细胞长成单层后即可用于接种或冻存。,第十四页，共十八页。,实验(shyn)操作注意事项,1.用电安全 2.操作仪器安全 3.及时规范(gufn)记录,第十五页，共十八页。,HeLa细胞传代培养实验(shyn)原理,细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种(zhn)实验的必经过程。贴壁细胞需经消化后才能分瓶。,第十六页，共十八页。,Thankyou,第十七页，共十八页。,内容(nirng)总结,HeLa细胞(xbo)的传代培养。概念：指细胞(xbo)从一个培养瓶以1:2或其他比率转移，接种到另外的培养瓶中的培养，也叫做继代培养。HeLa细胞(xbo)是一种贴壁生长的细胞(xbo)，在进行传代时通常是采用胰蛋白酶消化，把细胞(xbo)分散成单细胞(xbo)再传代。0.25胰蛋白酶、1640培养基（含10。（2）超净工作台准备（75%酒精擦拭台面，紫外灯照射30min）。（3）试剂预热（37水浴锅）。（4）操作人员准备（75%酒精擦拭双手等）,第十八页，共十八页。,