大肠菌群计数检验重点.pptx

大肠菌群计数检验,大肠菌群是指一群在37C培养24小时能分解乳糖产酸产气、需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。作为粪便污染指标，有广泛的卫生学意义食品中大肠菌群数系以每100g或mL检样内大肠菌群最可能数themostprobablenumber-简称MPN表示。,第一页，共十五页。,旧国家标准,第二页，共十五页。,第一法 大肠菌群MPN 计数法,第三页，共十五页。,第二法 大肠菌群平板计数法,第四页，共十五页。,第一天,第1、3、5、7小组：使用第一法附带做第二法中，两个平板接种，以自来水为样品。第2、4、6小组：使用第二法附带做第一法中，3个试管初发酵试验，以污水为样品。,第五页，共十五页。,第一法：检样稀释与初发酵试验,MPN：表示食品中大肠菌群数是以每100ML或克检样内大肠菌群最大可能数。一般采用9管法.一般样品25ML克+225ML生理盐水=1：10，从10-1取样1ML，接种到3管LST月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤中。从10-1取样1ML+9 ML生理盐水=1：100，从10-2取样1ML，接种到3管LST中。从10-2取样1ML+9 ML生理盐水=1：1000，从10-3取样1ML，接种到3管LST中。,第六页，共十五页。,第二法：检样稀释与平板计数,检样稀释：同上。平板计数：1、每个稀释度接种2个无菌平皿，每皿1mL稀释样品，另外一个平皿加1mL生理盐水作空白对照。2、及时将1520mLVRBA结晶紫中性红胆盐琼脂倾注每个平皿中。3、待琼脂凝固后，再加34mLVRBA覆盖表层。翻转平板培养。,第七页，共十五页。,第二天,第一法 复发酵试验 用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于煌绿乳糖胆盐肉汤BGLB管中，361培养48h2h，观察产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管。,第八页，共十五页。,第二法 平板菌落数的选择与证实试验平板菌落数的选择选取菌落数在15CFU150CFU 之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为0.5mm 或更大。证实试验从VRBA 平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于BGLB 肉汤管内，36 1 培养24 h48 h，观察产气情况。凡BGLB 肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性。,第九页，共十五页。,2原理溴甲酚紫，中性时呈蓝紫色，酸性时呈黄色，如果颜色不变呈蓝紫色，说明无产酸的大肠菌群；如果颜色变黄色，说明可能出现能分解乳糖产酸的大肠菌群。胆盐可以抑制其它细菌生长繁殖。分解乳糖产酸产气的大肠菌群，看小倒管中的气体。,第十页，共十五页。,1产气 2不产气,杜氏发酵管产气情况,第十一页，共十五页。,第十二页，共十五页。,第四天：大肠菌群计数报告,第一法：确证大肠菌群LST阳性管数，检索MPN表见附录，报告每gmL样品中大肠菌群的MPN值。,第十三页，共十五页。,第二法：经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以结晶紫中性红胆盐琼脂VRBA中计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为每gmL样品中大肠菌群数。例：10-4样品稀释液1mL，在VRBA平板上有100个典型和可疑菌落，挑取其中10个接种BGLB肉汤管，证实有6个阳性管，那么该样品的大肠菌群数为：1006/10104/gmL=6.0105CFU/gmL。,第十四页，共十五页。,内容总结,大肠菌群计数检验。MPN：表示食品中大肠菌群数是以每100ML或克检样内大肠菌群最大可能数。1、每个稀释度接种2个无菌平皿，每皿1mL稀释样品，另外一个平皿加1mL生理盐水作空白对照。3、待琼脂凝固后，再加34mLVRBA覆盖表层。溴甲酚紫，中性时呈蓝紫色，酸性时呈黄色，如果颜色不变呈蓝紫色，说明无产酸的大肠菌群。分解乳糖产酸产气的大肠菌群，看小倒管中的气体。第二法：,第十五页，共十五页。,