大肠杆菌表达系统h7u.net魔天记1第一页，共三十六页。1.大肠杆菌表达体系的组成一个完整的大肠杆菌表达系统至少要有表达载体和宿主菌两局部构成。为了改善表达系统的性能和对各类外源基因的适应能力，表达系统有时还需要有特定功能基因的质粒或溶源化噬箘体参与。到目前为止已经成功开展了许多表达载体和相应的宿主菌。表达过程：包含启动子、目的基因编码序列和转录终止序列的载体进入受体细胞后，可以利用受体细胞的复制、转录和翻译体系表达产生目的蛋白。2第二页，共三十六页。1.1大肠杆菌表达载体1.1.1组成局部1>.启动子：最佳答案启动子具备的条件第一必须是强启动子，能够克隆基因的蛋白质产物的表达量占细胞总蛋白的10%-30%以上第二这个启动子应能呈现出一种低限的根底转录水平，因为在表达毒性蛋白质或是有损于寄主细胞生长的蛋白质的情况下，使用高度抑制型的启动子是一种极为重要的条件3第三页，共三十六页。2>.转录终止子启动子封堵作用：由一个上游启动子驱动的转录作用，当其通读过下游启动子时，便会使该启动子的功能受到抑制，将这种由一个启动子的功能活性抑制另一个启动子转录的现象，叫做启动子封堵作用。转录终止子还能增强mRNA分子的稳定性，从而提高蛋白质产物的水平。3>.核糖体结合位点能被核糖体识别的位点，转录成mRNA分子后，核糖体在这一位点上结合。4第四页，共三十六页。4>.转译起始序列5’-末端结构特征，决定mRNA的转译起始效率。5>.转译增强子显著的增加异源基因在大肠杆菌中的表达效率。6>.转译终止子mRNA转译终止必须存在终止密码子。大肠杆菌格外偏爱使用终止子UAA，尤其是在其后加上U形成UAAU四联核苷酸的情况下，转译终止的效率便会得到进一步的增强。5第五页，共三十六页。启动子核糖体结合位点转录终止子复制起点6第六页，共三十六页。常用的大肠杆菌表达载体1.Lac启动子的表达载体2.Trp启动子的表达载体3.PL启动子的表达载体7第七页，共三十六页。lac启动子：控制编码β-乳糖苷酶的lacZ基因转录的序列，可以被IPTG所诱导，所以参加诱导物后，可以诱导启动子下游的外源基因的表达。理论上，但凡具有包括控制区段在内的lac操纵子的质粒，都根本上具备了用作克隆基因表达载体的条件。这类表达载体的最突出的特点是，含有一条足够大的编码β-半乳糖苷酶的lacZ基因片断。因此，每当有一个克隆的外源DNA片断插入到这个启动子之后,仍保持着lacZ基因固有的读码结构时，这个重组质粒就会合成出一种由外源克隆基因编...
