NY∕T 537—2023 猪传染性胸膜肺炎诊断技术.pdf

ICS 11.220CCS B41NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 537-2023代替NYT537-2002猪传染性胸膜肺炎诊断技术Diagnostic techniques for porcine contagious pleuropneumonia2023-02-17发布2023-06-01实施中华人民共和国农业农村部发布NY/T537-2023前言本文件按照GB/T1.1-2020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件代替NY/T537-2002猪放线杆菌胸膜肺炎诊断技术。与NY/T537-2002相比，除结构调整和编辑性改动外，主要技术变化如下：a)增加了“缩略语”（见第4章）；b)增加了“临床诊断”（见第5章）；c)增加了“PCR检测”（见第8章）；d)增加了“实时荧光PCR检测方法”（见第9章）；e)增加了“综合结果判定说明”（见第12章）；f)增加了“胸膜肺炎放线杆菌形态图”（见附录B);g)删除了“补体结合试验”（见2002年版的第4章）；h)修改了“酶联免疫吸附试验”（见第11章，2002年版的第6章）。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担专利的责任。本文件由农业农村部畜牧兽医局提出。本文件由全国动物卫生标准化技术委员会(SAC/TC181)归口。本文件起草单位：中国动物卫生与流行病学中心、河南科技大学、江苏省农业科学院、广西壮族自治区动物疫病预防控制中心、山东畜牧兽医职业学院、青岛市即墨区畜牧业发展服务中心。本文件主要起草人：魏荣、张慧、周俊明、汪洋、盖文燕、徐天刚、刘丽蓉、孙翔翔、王岩、魏甜甜、董雅琴、刘爽、倪艳秀、吴发兴、何奇松、熊毅。本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为：2002年首次发布为NY/T537-2002;一本次为第一次修订。INY/T537-2023引言猪传染性胸膜肺炎(porcine pleuropneumonia)是由胸膜肺炎放线杆菌引起的一种猪的急性呼吸道传染病。发病猪以急性出血性纤维素性肺炎和慢性纤维素性坏死性胸膜炎为主要特征。急性病例病死率高，慢性病例能耐过，表现出消瘦和生长发育不良。目前，该病在世界上养猪国家广泛存在。胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)属于巴氏杆菌科放线杆菌属。根据对辅酶I(NAD)的依赖性，分为生物I型和生物型；根据荚膜多糖及脂多糖的抗原性差异，目前将本菌分为19个血清型。通常112、1519型为生物I型，生物需要依赖NAD,大多数13型和14型属于生物I型，生长不依赖NAD。不同血清型甚至同一血清型中不同菌株之间的毒力有差异，一般1型、5型、9型及11型毒力最强，2型、3型、6型、8型、12型及15型为中等毒力或低毒力。我国APP主要流行血清型为1型、2型、3型、4型、5型、7型。NY/T537-2023猪传染性胸膜肺炎诊断技术1范围本文件规定了猪传染性胸膜肺炎临床诊断、样品采集和运送、病原分离与鉴定、PCR检测、实时荧光PCR检测、琼脂扩散试验、酶联免疫吸附试验的技术要求和规范。本文件适用于猪传染性胸膜肺炎的诊断、检疫、检测、监测和流行病学调查等。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1卫星现satellite phenomenon挑取APP菌落接种于血琼脂表面，用金黄色葡萄球菌点种或垂直划线，在375%10%CO2条件下培养24h48h。越靠近金黄色葡萄球菌菌落生长的本菌菌落越大，越远的越小甚至不见菌落生长，即所谓“卫星现象”，也称V因子需要试验。3.2溶血hemolysis菌落周围形成完全透明的溶血环，红细胞完全溶解，称为溶血。相对的，在菌落周围形成不透明的草绿色溶血环，红细胞未溶解，血红蛋白变成绿色，称为a溶血。3.3胸膜肺炎放线杆菌含重复子毒素Actinobacillus pleuropneumoniae RTX,ApxAPP可产生4种毒素，分别为ApxI、Apx、Apx、Apx,均为重要的毒力因子，具有细胞毒性或溶血性，是一种穿孔毒素，属于含重复子毒素(repeats in toxin,RTX)家族。其中，Apx存在于所有血清型，且只在猪体内产生。4缩略语下列缩略语适用于本文件。APP:胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae)PBS:磷酸盐缓冲液(Phosphate-buffered saline buffer)TSB:胰蛋白大豆肉汤(Trypticase soy broth)NAD:烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，也称V因子(Nicotinamide adenine dinucleotide)CAMP:协同溶血试验(Christis-Atkins-Munch-peterson)Apx:胸膜肺炎放线杆菌含重复子毒素(Actinobacillus pleuropneumoniae RTX)PCR:聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction)DNA:脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleic acid)dNTP:脱氧核糖核苷三磷酸(Deoxy-ribonucleoside triphosphate)TE:Tris-EDTA缓液(Tris-EDTA buffer)1NY/T537-2023TAE:TAE缓冲液(Tris-acetic-EDTA buffer)ELISA:酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immune sorbent assay)HRP:辣根过氧化物酶(Horseradish peroxidase)TMB:3,3,5,5-四甲基联苯胺(3,3，5,5-Tetramethylbenzidine)IPTG:异丙基-D-硫代半乳糖苷(Isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside)5临床诊断5.1流行病学5.1.1易感动物对猪具有高度宿主特异性，各年龄猪均易感。5.1.2传染源带菌猪、病猪及其分泌物是本病的传染源。病菌主要存在于肺脏病变部位、扁桃体、支气管、鼻分泌物中。5.1.3传播途径主要传播途径是通过猪与猪的直接接触或短距离飞沫传播。5.1.4流行特点一年四季均可发生，秋末春初季节变化时多发。饲养环境突然改变、密集饲养、通风不良、气候突变及长途运输等诱因可引起本病。猪场或猪群之间的传播，多由引进或混人带菌猪、慢性感染猪所致，集约化猪场往往呈跳跃式急性暴发，死亡率高。5.2临床症状5.2.1最急性型本病临床症状因动物的年龄、免疫状态、疫病状态、环境因素及对病原的易感程度等不同而呈现差异。猪群中一头或几头猪只突然发病。体温升高达4142，并可出现短期呕吐。鼻、耳、眼及后躯皮肤常发绀，最后阶段出现严重呼吸困难，临死前常从口、鼻流出血性泡沫状分泌物。有时未见任何症状即突然死亡。5.2.2急性型病猪体温升高，可达40.541，精神委顿，喜卧少动，饮食不振。有咳嗽、喘气、呼吸困难等严重呼吸道症状。5.2.3亚急性型或慢性型病猪体温可能无明显变化，常呈现间歇性咳嗽，呼吸异常、食欲不振、增重减少。疾病暴发初期，母猪常出现流产（可能由发热引起）。个别猪只出现中耳炎。若混合感染猪流感病毒、巴氏杆菌、支原体等其他呼吸道病原时，病程恶化，病死率明显增加。5.3病理特征5.3.1剖检后的眼观变化主要是纤维素性肺炎，可呈单侧、双侧、大叶性、弥漫性或多灶性，肺炎区色深，有出血点或斑块状出血，中等硬度，略有弹性，急性、亚急性和慢性病例可见肺部纤维素性渗出物。5.3.2纤维素性胸膜炎明显，急性和慢性病例均可见胸腔含有带血色的液体，胸膜有粘连区，气管和支气管充满带血色的黏液性泡沫分泌物。5.3.3组织学变化以肺组织坏死、出血、中性粒细胞浸润、血管栓塞、广泛水肿和纤维素性渗出为特征，坏死区周围发生巨噬细胞浸润和纤维化。5.4结果判定易感动物出现5.2.1或5.2.2或5.2.3至少一项临床症状且符合5.1流行病学及5.3病理特征，判定为APP感染疑似病例。2