基金项目:湛江市科技计划项目(2022B01089)作者简介:林燕明，男，1986－09生，硕士，主治医师，E-mail:mlzsac@163．com收稿日期:2022－10－11lncＲNAMEG8通过调控miＲ-363-3p/PAX6轴促进非小细胞肺癌的肿瘤进展林燕明，陈玉婷，林慕文，李姝君，王永存*(广东医科大学附属医院肺部肿瘤专科，湛江524000;*通讯作者，E-mail:wycdiyi@163．com)摘要:目的探讨长非编码ＲNA母系表达基因8(lncＲNAMEG8)通过调控miＲ-363-3p/人类配对盒基因6(PAX6)轴促进非小细胞肺癌(NSCLC)的肿瘤进展。方法选取116例经确诊为NSCLC患者的肿瘤组织与癌旁正常组织标本，常规培养人NSCLC细胞株A549、H1299，采用ＲT-qPCＲ法检测组织和细胞中lncＲNAMEG8、miＲ-363-3p和PAX6mＲNA的表达。将A549、H1299细胞分别分为对照组(control组，空白培养基处理)、pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-MEG8组(转染pcDNA-MEG8)、pcDNA-MEG8+miＲ-NC组(pcDNA-MEG8与miＲ-NC共转染)、pcDNA-MEG8+miＲ-363-3pmimic组(pcDNA-MEG8与miＲ-363-3pmimic共转染)。CCK-8法检测培养24，48，72h各组细胞增殖能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;流式细胞术检测细胞凋亡;采用Westernblot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3和PAX6蛋白的表达。双荧光素酶报告基因实验分别验证MEG8和miＲ-363-3p、miＲ-363-3p和PAX6的关系。ＲNA结合蛋白免疫沉淀(ＲIP)实验检测lncＲNAMEG8、miＲ-363-3p和PAX6之间的结合。结果与正常组织相比，肿瘤组织中lncＲNAMEG8、PAX6mＲNA高表达，miＲ-363-3p呈现低表达(均P＜0．05)。与control组和pcDNA组相比，pcDNA-MEG8组培养48，72hA549和H1299细胞增殖能力、细胞迁移率、PAX6、Bcl-2蛋白表达显著升高(P＜0．05)，细胞凋亡率和Bax、Caspase-3蛋白显著降低(P＜0．05)。与pcDNA-MEG8组和pcDNA-MEG8+miＲ-NC组相比，pcDNA-MEG8+miＲ-363-3mimic组培养48，72hA549和H1299细胞增殖能力、细胞迁移率、PAX6、Bcl-2蛋白表达显著降低(P＜0．05)，miＲ-363-3p表达、细胞凋亡率、Bax、Caspase-3蛋白表达显著升高(P＜0．05)。双荧光素酶报告基因实验结果显示，与miＲ-NC+MEG8-WT共转染组相比，miＲ-363-3pmimic+MEG8-WT共转染组荧光素酶活性显著降低(P＜0．05);与miＲ-NC+MEG8-MUT共转染组相比，miＲ-363-3pmimic+MEG8-MUT共转染组荧光素酶活性无显著差异(P＞0．05)。与miＲ-NC+PAX6-WT共转染组相比，miＲ-363-3pmimic+PAX6-WT共转染组荧光素酶活性显著降低(P＜0．05);与miＲ-NC+PAX6-MUT共转染组相...
