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miR-186-5p通过抑...通路改善脊髓损伤后神经修复_蔡军.pdfVIP免费

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基金项目:新疆维吾尔自治区自然科学基金项目(2018D01C011)作者简介:蔡军,男,1985-09生,硕士,主治医师,E-mail:181106153@qq.com收稿日期:2022-11-18miR-186-5p通过抑制HMGB1信号通路改善脊髓损伤后神经修复蔡军,艾孜孜江·买买塔吾拉,张玉新*(新疆喀什地区第一人民医院脊柱外科,喀什844000;*通讯作者,E-mail:zhang_yx1992@163.com)摘要:目的探究miR-186-5p在脊髓损伤(SCI)中的变化及对神经修复的影响。方法①将小胶质细胞分为对照组(正常培养)、脂多糖(LPS)组(1μg/mlLPS刺激24h)、LPS+miR-186-5p-mimic组(转染miR-186-5p-mimic后1μg/mlLPS刺激24h)和LPS+miR-186-5p-inhibitor组(转染miR-186-5p-inhibitor后1μg/mlLPS刺激24h)。通过RT-PCR检测细胞中miR-186-5p水平,通过RT-PCR和Westernblot检测细胞中高迁移率族蛋白1(HMGB1)mRNA和蛋白表达水平,通过ELISA检测细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的水平。②将大鼠分为假手术组、SCI+LV-NC组和SCI+LV-miR-186-5p组,每组10只大鼠,假手术组大鼠仅行椎板切除术,其余组采用脊髓打击器建立SCI模型。建模后,假手术组大鼠正常饲养,SCI+LV-NC组和SCI+LV-miR-186-5组大鼠分别脊髓注射空载体慢病毒和过表达miR-186-5p的重组慢病毒。通过RT-PCR检测脊髓组织中miR-186-5p水平。通过Westernblot检测脊髓组织中HMGB1、Toll样受体4(TLR4)、p-p65、totalp65、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、血红素加氧酶-1(HO-1)、超氧化物歧化酶1(SOD-1)、Bax和Bcl-2的蛋白水平。ELISA检测脊髓组织中的TNF-α和IL-6的水平;免疫荧光检测脊髓组织中的离子钙结合接头蛋白分子1(IBA-1)、iNOS、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经丝蛋白-200(NF-200)的表达;通过BBB评分评价大鼠的运动功能;通过尼氏染色测定脊髓前角运动神经元数量。结果①与对照组相比,LPS组miR-186-5p表达降低(P<0.05),而HMGB1、iNOS、TNF-α和IL-6水平升高(P<0.05)。与LPS组相比,LPS+miR-186-5p-mimic组miR-186-5p表达升高(P<0.05),而HMGB1、iNOS、TNF-α和IL-6水平降低(P<0.05)。与LPS组相比,LPS+miR-186-5p-inhibitor组miR-186-5p水平降低(P<0.05),而HMGB1、iNOS、TNF-α和IL-6水平升高(P<0.05)。②与假手术组相比,SCI+LV-NC组大鼠脊髓出现明显损伤,iNOS/IBA-1比例升高(P<0.05),TNF-α和IL-6水平升高(P<0.05),Bax蛋白表达上调(P<0.05),Bcl-2、HO-1和SOD-1蛋白表达下调(P<0....

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