电针“梨状二穴”治疗腰椎间盘突出症大鼠的实验研究_刘正.pdf

基金项目：年云南省科学技术厅云南中医学院应用基础研究联合专项中医联合面上项目（）“梨状二穴”治疗腰椎间盘突出神经根压迫症状大鼠的实验研究作者简介：刘正（.），男，本科，主任医师，研究方向：针灸治疗腰腿痛，：.通信作者：潘峰（.），男，博士研究生在读，主治医师，研究方向：针灸治疗腰腿痛，：.电针“梨状二穴”治疗腰椎间盘突出症大鼠的实验研究刘 正 郑永仁 陈致宏 陈妍蓓 朱笑举 尹梅芳 潘 锋（云南省曲靖市中医医院，曲靖，；云南中医药大学，昆明，）摘要 目的：探讨电针“梨状二穴”对腰椎间盘突出症大鼠血清白细胞介素（）、一氧化氮（）、前列腺素（）、基质金属蛋白酶（）等炎症介质表达的影响。方法：将 只 大鼠随机分为空白组、模型组、电针 组、电针 组。除空白组外，其余 组均按照非压迫性腰椎间盘髓核突出模型的造模方法进行造模。电针 组、电针 组分别给予相应干预措施，在造模结束以及治疗后的第、天对大鼠后肢热刺激缩爪阈差值进行检测，治疗后的第 天用酶联免疫吸附试验（）测定血清标本中、的水平。结果：造模后第 天，与空白组比较，模型组、电针 组、电针 组大鼠的缩爪阈值明显下降（.）；治疗后第 天，模型组治疗前后缩爪阈值比较，差异无统计学意义（.）；电针 组、电针 组治疗前后比较，缩爪阈值明显升高，差异均有统计学意义（均 .）。治疗后电针 组、电针 组、水平明显低于模型组，差异均有统计学意义（均 .）。结论：电针“梨状二穴”降低了腰椎间盘突出症大鼠、的表达水平，从而起到抗炎镇痛的作用。关键词 电针；梨状二穴；腰椎间盘突出症；大鼠；白细胞介素；一氧化氮；前列腺素；基质金属蛋白酶 ，（，；，）：（），（），（），（）：，（）：，（.）（.）（.），（.）：，；中图分类号：文献标识码：腰椎间盘突出症（，）是针灸科的常见病、多发病，其临床表现为腰部疼痛伴一侧或双侧下肢放射性疼痛、麻木及活动受限，严重者可能出现大小便功能障碍，严重影响患者生活及工作。椎间盘突出好发于、个节段，青壮年男性发病率最高。该病属中医“腰痛”的范畴，发病多与劳伤疲乏或肝肾亏虚等因素有关。我们应用“梨状二穴”治疗该病症十余年，取得了很好疗效。本研究拟通过观察电针刺激“梨状二穴”对腰椎间盘突出神经根压迫症状大鼠的热刺激缩爪阈差值的影响，并测定血清白细胞介素（，）、一氧化氮（，）、，前列腺素（，）、基质金属蛋白酶（，）水平的变化，初步探索“梨状二穴”治疗腰椎间盘突出症的作用机制，为“梨状二穴”的临床应用提供科学依据。材料与方法.材料.动物清洁级健康成年斯泼累格多雷（，）大鼠 只，体质量（），由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供动物许可证号：（滇），经云南中医学院动物实验伦理审查委员会批准（伦理审批号：），将动物饲养于云南中医药大学中心实验室，动物房符合无特定病原体（，）屏障系统，温度 ，相对湿度，气压保持在适宜范围内。实验过程中，所有动物在同等条件下饲养，自由饮水和摄食。.药物 盐酸氯胺酮注射液（上海第一生化药业公司，批号：）；盐酸利多卡因注射液（山东华鲁制药有限公司，产品批号：）。.试剂与仪器试剂：试剂盒（杭州联科生物技术股份有限公司，货号：）；试剂盒（南京建成生物工程研究所，货号：）；试剂盒（杭州联科生物技术股份有限公司，货号：）；大鼠 试剂盒（江苏酶免实业有限公司，货号：）。仪器：华佗牌电针仪（苏州医疗用品有限公司，型号：）；热刺痛仪（上海玉研科学仪器有限公司，型号：）；针灸针（吴江市云龙医疗器械有限公司，型号：.）；低速离心机（安徽中科中佳科学仪器有限公司，型号：）；超低温冰箱（青岛海尔特种电器有限公司，型号：）；多功能酶标仪（美国美谷分子公司，美国，型号：）。.方法.分组与模型制备 将大鼠适应性喂养 周，自由饮水和摄食。将 只 大鼠，按体质量编号 号，采用随机数字表法随机分为空白组、模型组、电针 组及电针 组，每组 只。除空白组以外，其余 组均参照非压迫性腰椎间盘髓核突出模型的造模方法。采用 氯胺酮 腹腔注射麻醉，麻醉生效后，用剃毛器剔除大鼠尾椎至腰椎毛发，局部进行消毒，铺无菌巾，距尾根部 处切断鼠尾并缝合伤口，切开尾部椎间盘，见髓核呈胶冻样，取 个髓核并加入 生理盐水，充分搅拌成混悬液备用。髓核混悬液制备完成后，将大鼠腰椎置于屈曲侧卧位，以 棘突间隙为穿刺点用 号腰椎穿刺针行硬膜外穿刺，成功后用微量注射器注射 大鼠自体髓核混悬液，接着将利多卡因 注射到硬膜外腔中，拔除穿刺针，将大鼠放入笼中进行观察。氯胺酮麻醉恢复后，若大鼠四肢活动自如，说明硬膜外穿刺和注射失败；双前肢活动自如，双后肢运动、感觉丧失或减退，后完全恢复，说明硬膜外穿刺注射成功。.干预方法 空白组及模型组不进行干预，但在其余 组治疗时，均抓取提拿出笼 次。造模后第 天，电针 组针刺“梨状二穴”，取穴方法参考大鼠穴位图谱及解剖学定位，“梨状肌”位于大鼠梨状肌近骶骨端，大鼠秩边穴直上 ；“梨状肌”位于梨状肌近股骨大转子端，大鼠环跳穴直上.；电针 组针刺选择环跳、秩边。组均采用以.云龙牌针灸针，针刺深度 ，针柄连接华佗牌 电针仪，选择连续波、频率、强度 进行干预，单次干预，每日干预 次，连续干预 。.检测指标与方法.后肢热刺激缩爪阈值检测各组分别在造模前以及造模后的、，对大鼠左后肢热刺激缩爪阈差值进行检测。于室温 左右将大鼠静置于痛觉测试仪玻璃板上并用配套透明塑料固定笼分隔，适应 安静后用辐射热光源（）对准足底中部外侧，记录大鼠出现疼痛反应即缩腿甚至舔足的时间，即痛阈潜伏期，测量 次取平均值，每次间隔 。若照射 仍无反应，则取出大鼠防止足底组织烫伤，按 计算。.、水平测定各组治疗结束后采用腹主动脉采血，取血 放入抗凝的试管中，采血后静置 ，用 ，离心半径，离心，取上清液，按试剂盒方法和步骤，用酶联免疫吸附试验（，）法检测血清中、的水平。.统计学方法采用 .统计软件对研究数据进行统计分析，计量资料采用均数 标准差（?）表示，进行正态分布检验及方差齐性检验。若组内服从正态分布，多组间比较采用单因素方差分析；若组内不服从正态分布，多组间比较采用非参数检验；组内干预前后比较采用 检验。以 .为差异有统计学意义。世界中医药 年 月第 卷第 期表 各组大鼠造模前、造模后及治疗后后肢热刺激缩爪阈值比较（?，）组别造模前造模后 造模后 造模后 造模后 造模后 空白组.模型组.电针 组.电针 组.注：与空白组比较，.；与本组造模后 （即干预前 ）比较，.结果.各组大鼠造模前、后后肢热刺激缩爪阈值比较 各组大鼠造模前、后后肢热刺激缩爪阈值趋势见图。造模前，各组大鼠阈值比较差异无统计学意义（.）。造模后 ，与空白组比较，模型组、电针 组、电针 组大鼠的阈值明显下降，差异有统计学意（均 .）。造模后，即干预结束后，电针 组、电针 组大鼠的阈值均较其造模后（即干预前 ）明显升高（.），模型组阈值无明显变化（.）。见表。图 各组后肢热刺激缩爪阈值趋势.各组大鼠、水平比较 与空白组比较，模型组大鼠血清、表达均明显上升，差异均有统计学意义（均 .）；与模型组比较，电针 组与电针 组血清、表达均明显下降，差异均有统计学意义（均 .）。见图 。图 各组 水平比较 注：与空白组比较，.；与模型组比较，.图 各组 水平比较 注：与空白组比较，.；与模型组比较，.图 各组 水平比较 注：与空白组比较，.；与模型组比较，.图 各组 水平比较 注：与空白组比较，.；与模型组比较，.讨论腰及下肢疼痛是腰椎间盘突出症患者的常见症状。目前普遍认为腰椎间盘突出是由于腰椎间盘纤维环破裂，随后突出对神经根的机械压迫而造成其结构性损害，同时诱发局部炎症反应，影响神经根周围组织的供血及营养，产生的代谢物堆积最终导致 ，神经根功能损伤，诱发疼痛等症状的产生。髓核基质里的部分蛋白作为抗原，不断刺激机体组织，从而引发无菌性炎症反应。这一过程包括了、等在内的多种炎症介质和化学因子的参与。抑制炎症介质的表达是改善临床症状、抑制病情发展的关键点之一。中医学中并无腰椎间盘突出症的名称及明确记载，但按照其临床表现可归为“腰痛”的范畴。素问刺腰痛论载：“足太阳脉令人腰痛，引项脊尻背如重状少阳令人腰痛，如似针刺其皮中，循循然不可以俯仰，不可以顾阳明令人腰痛，不可以顾，顾如有见者，善悲”其所述症状与腰椎间盘突出症临床症状相符。环跳穴、秩边穴为治疗腰痛的常用穴位。针灸甲乙经云：“腰胁相引痛急髀，筋瘈胜痛，不可屈伸，痹不仁，环跳主之。腰痛骶寒，俯仰急难，阴痛下重，不得小便，秩边主之。”“梨状二穴”为刘正主任医师根据临床经验自拟创立，包括“梨状肌”穴和“梨状肌”穴。梨状肌 穴位于秩边穴直上 寸，与秩边同属足太阳膀胱经；梨状肌 穴位于环跳穴直上.寸，与环跳同属足少阳胆经。“梨状二穴”与秩边、环跳相邻且同经，故其功效主治亦相似。从解剖位置上看，二穴均在梨状肌肌腹上，深层走行的是从坐骨大孔穿出的坐骨神经。临床治疗发现，针刺此二穴的刺激作用较秩边、环跳更强，治疗时使针力直达梨状肌肌腹，疗效显著。本研究发现，腰椎间盘突出症模型大鼠与正常大鼠比较，后肢热刺激缩爪阈值下降，血清、水平升高。干预 次后，电针 组及电针 组大鼠与模型组大鼠比较，后肢热刺激缩爪阈值上升，血清、水平下降，“梨状二穴”的疗效与秩边、环跳的疗效相当。结果表明，电针“梨状二穴”能提高腰椎间盘突出症模型大鼠下肢疼痛阈值，降低机体的炎症反应，这应该是电针“梨状二穴”改善腰椎间盘突出疼痛症状的重要机制之一。利益冲突声明：无。参考文献陈佳 腰椎间盘退变和先天性脊柱侧凸相关基因关联分析和致病性研究 北京：北京协和医学院，中华医学会骨科学分会脊柱外科学组，中华医学会骨科学分会骨科康复学组 腰椎间盘突出症诊疗指南 中华骨科杂志，（）：中华医学会疼痛学分会脊柱源性疼痛学组 腰椎间盘突出症诊疗中国疼痛专家共识 中国疼痛医学杂志，（）：，：，（）：努尔比亚阿布拉 腰椎间孔狭窄症临床与影像特征及中药用药规律研究 北京：北京中医药大学，刘正，那毅，尹梅芳 自拟梨状二穴为主治疗腰椎间盘突出症 例 云南中医中药杂志，（）：刘正，陈加林 针刺“梨状二穴”为主治疗梨状肌综合征 例疗效观察 中国民族民间医药，（）：武晓飞，马迅，冯皓宇，等 炎症因子对腰椎间盘退变影响的研究 实用医技杂志，（）：戴志鹏 止痛通痹液治疗腰椎间盘突出症的效果及对患者血清炎症因子、水平的影响 医学信息，（）：林菲菲，叶亚云，王朋 血清疼痛介质及炎症因子在腰椎间盘突出症急性期患者康复治疗前后的变化 中国现代医生，（）：侯桂红，李倩，谢燕 椎间盘组织中炎症因子水平、表达与腰椎间盘突出症的关系研究 中国实验诊断学，（）：陆志东，金群华，陈志荣 大鼠非压迫性髓核突出模型的建立 中国矫形外科杂志，（）：任士飞，张林吉，汪鹏旭，等 大鼠 神经性疼痛模型的建立 实验动物科学，（）：华兴邦，周浩良 大鼠穴位图谱的研制 实验动物与动物实验，（）：虞思聪，吴林峰，李晓瑶 鞘内注射 受体拮抗剂对腰椎间盘突出症大鼠疼痛及脊髓炎症因子的影响 江苏医药，（）：唐朝辉，曹亮，丁岗，等 腰痹通胶囊对大鼠腰椎神经根压迫致腰椎间盘突出模型药效及炎性因子的影响 中国实验方剂学杂志，（）：赵继荣，杨正汉，马俊飞，等 中医药干预基质金属蛋白酶表达治疗椎间盘退变研究进展 中国实验方剂学杂志，（）：魏春，徐杰 腰椎间盘突出症患者外周血白细胞介素、前列腺素 及基质金属蛋白酶 水平变化 新乡医学院学报，（）：韩磊，李艺，赵平 腰椎关节手法对背根神经节伤害性疼痛大鼠疼痛行为学及一氧化氮含量的影响 北京中医药，（）：赵志明，王玉召，钟浩，等 脊柱微创通道镜系统辅助下椎间孔腰椎椎体间融合术对腰椎退行性疾病患者血清氧化应激指标、疼痛介质及脊髓功能的影响 中国临床医生杂志，（）：宋甲威，刘芝静 针刺联合运动疗法对腰椎间盘突出症患者镇痛作用、腰椎功能及炎性细胞因子的影响 上海针灸杂志，（）：（收稿 本文编辑：杨觉雄）世界中医药 年 月第 卷第 期