藏药十六味杜鹃花浓缩丸提取...羟基红花黄色素A的含量测定_杨小兰.pdf

2023年2月第29卷第2期February.2023 Vol.29 No.2民族医药藏药十六味杜鹃花浓缩丸提取液中间体中总黄酮及羟基红花黄色素A的含量测定杨小兰1,2，尼玛次仁3，白玛旦增3，谢和兵1,2,3,4（1.安徽中医药大学药学院，安徽合肥230012；2.南通市海门长三角药物高等研究院，江苏南通226133；3.西藏神猴药业有限责任公司，西藏日喀则858300；4.南京归禾至康生物医药科技有限公司，江苏南京210003）摘要目的：建立十六味杜鹃花浓缩丸水提液中间体中总黄酮及羟基红花黄色素A的含量测定方法。方法：采用UV法，以芦丁为对照品，三氯化铝醋酸醋酸钠缓冲溶液（pH值=5.2）为显色剂，显色20 min，在420 nm波长下测定总黄酮含量；采用HPLC法，UItimate XB-C18为色谱柱，以甲醇-0.7%磷酸（三乙胺调节pH值=6.0）（2773）为流动相，体积流量为1.0mL/min，进样量为10 L，柱温为25，在403 nm波长下，测定羟基红花黄色素A的含量。结果：芦丁对照品在3.865038.6502g/mL范围内与吸光度值呈良好的线性关系，线性回归方程为Y=0.0353X+0.000 7，r=0.999 8，平均加样回收率为96.84%，RSD=0.89%（n=6）；羟基红花黄色素A对照品溶液在23.441 1195.342 4 g/mL范围内与峰面程良好的线性关系，Y=29.970 0X15.312 6，r=0.999 6，平均加样回收率为99.49%，RSD=0.67%（n=6）。结论：该方法操作简便，准确，具有良好的精密度、重复性和稳定性，适用于十六味杜鹃花浓缩丸水提液中间体的质量控制。关键词十六味杜鹃花浓缩丸；总黄酮；羟基红花黄色素A；高效液相色谱法；紫外可见分光光度法中图分类号R291.408文献标识码A文章编号1672-951X（2023）02-0063-05DOI：10.13862/43-1446/r.2023.02.013Content Determination of Total Flavonoids and Hydroxysafflor Yellow A in theIntermediates of Extracts of Shiliuwei Dujuanhua Nongsuowan(十六味杜鹃花浓缩丸)in TibetanYANG Xiaolan1,2,NIMA Ciren3,BAIMA Danzeng3,XIE Hebing1,2,3,4(1.College of Pharmacy,Anhui University of Traditional Chinese Medicine,Hefei Anhui 230012,China;2.Nantong Haimen Yangtze Delta Drug Advanced Research Institute,Nantong Jiangsu 226133,China;3.Tibet God Monkey Pharmaceutical Co.,Ltd.,Xigaze Tibet 858300,China;4.Nanjing Guihe Zhikang Biomedical Technology Co.,Ltd.,Nanjing Jiangsu 210003,China)AbstractObjective:To establish a method for the content determination of total flavonoids and hydroxysafflor yellow A in the intermediates of extracts of Shiliuwei Dujuanhua Nongsuowan.Methods:The totalflavonoids was determined at 420 nm by UV with rutin as the control and aluminum trichloride-acetic acid-sodium acetate buffer solution(pH5.2)as the chromogenic agent for 20 min.The content of hydroxysafflor yellowA was determined by HPLC with methanol-0.7%phosphoric acid(pH=6.0 adjusted by triethylamine)(27:73)asmobile phase,volume flow rate was 1.0 mL/min,injection volume was 10 L,column temperature was 25 andwavelength was 403 nm.Results:The rutin reference substance showed a good linear relationship with theabsorbance value in the range of 3.865 0-38.650 2 g/mL.The linear regression equation was Y=0.035 3X+0.000 7,r=0.999 8.The average recovery was 96.84%,RSD=0.89%(n=6).The linear range of hydroxysafflor yellow A was23.441 1-195.3424 g/mL,Y=29.9700X-15.3126,r=0.9996.The average recovery was 99.49%,RSD=0.67%(n=6).引用：杨小兰，尼玛次仁，白玛旦增，谢和兵.藏药十六味杜鹃花浓缩丸提取液中间体中总黄酮及羟基红花黄色素A的含量测定J.中医药导报,2023,29(2):63-67.通信作者：谢和兵，E-mail：632023年2月第29卷第2期February.2023 Vol.29 No.2藏药十六味杜鹃花浓缩丸由烈香杜鹃、石榴子、红花、豆蔻、荜茇、肉桂、石灰华、丁香、木香、肉豆蔻、沉香、广枣、葡萄干、螃蟹、力嘎都、甘草16味药材制成。目前市售的藏药十六味杜鹃花丸是原料药材生药粉直接入药制备的水泛丸，执行的现行标准为1995年版 中华人民共和国卫生部药品标准藏药：第一册（WS3-BC-0193-95）1。其质量标准中只有药品性状和烈香杜鹃药材的薄层定性鉴别，无成分的定量测定，且质量控制水平较低。本试验在对处方组成药味所含有的有效物质和主要成分、药材性质综合分析基础上，将一部分药材按照原粉碎工艺粉碎入药，另一部分药材（石榴子、红花、甘草、广枣、荜茇、力嘎都、葡萄干）进行提取入药，制备浓缩丸，并采用UV法和HPLC法建立了十六叶杜鹃花浓缩丸制备过程中的水提液中间体总黄酮和羟基红花黄色素A的含量测定方法，以期为十六味杜鹃花浓缩丸的质量控制及标准提升提供参考。1仪器与试剂1.1主要仪器Agilent Technologies Cary 8454 UV-Vis紫外分光光度计、Agilent 1100液相色谱仪（美国安捷伦公司）；色谱柱UItimate XB-C18（4.6 mm250 mm，5 m）月旭科技（上海）股份有限公司；色谱柱ShimNex CS C18（4.6 mm250 mm，5 m）岛津（上海）实验器材有限公司；XSR205DU/AC型梅特勒电子天平（上海微峰生物技术有限公司）；PHS-3C雷磁酸碱计（上海仪电科学仪器股份有限公司）；TGL-16B高速离心机（常州中捷实验仪器制造有限公司）。1.2药物与试剂红花（批号：20200301）、石榴子（批号：20200201）、葡萄干（批号：200401）、广枣（批号：20200301）、石灰华（批号：20200301）、螃蟹（批号：210801）、荜茇（批号：20200301）、力嘎都（批号：20200401）、肉桂（批号：20200301）、木香（批号：20200401）均购于西藏神猴药业有限责任公司；甘草（批号：210901）、烈香杜鹃（批号：211201）、豆蔻（批号：220228）、丁香（批号：220228）、肉豆蔻（批号：210501）、沉香（批号：210801）均购于安徽援康中药饮片股份有限公司。所有药材经江苏神猴医药研究有限公司质检均符合法定标准。芦丁对照品（批号：100080-202012，含量：92.2%）、羟基红花黄色素A对照品（批号：111637-202111，含量：96.8%）均购于中国食品药品检定研究院；甲醇（批号：6808CU13）为色谱纯，磷酸（批号：20210906）、三乙胺（批号：C13683716）、冰醋酸（批号：20201013）为优级纯，无水氯化铝（批号：20211020）、醋酸钠三水合物（批号：C12861708）为分析纯，均购于国药集团化学试剂有限公司；水为娃哈哈纯净水。2方法2.1提取液样品的制备按处方比例称取石榴子10 g，红花8 g，甘草5 g，广枣4 g，荜茇3 g，力嘎都5 g，葡萄干3 g，螃蟹3 g，石灰华7 g，以10倍量水，提取3次，每次1 h，合并滤液并用400目聚丙烯滤网过滤，即得。2.2羟基红花黄色素A含量测定2.2.1色谱条件色谱柱：UItimate XB-C18（4.6 mm250 mm，5 m）；流动相：甲醇-0.7%磷酸（三乙胺调节pH值=6.0）（2773）；体积流量为1.0 mL/min；检测波长为403 nm；柱温25；进样量为10 L。2.2.2溶液的制备2.2.2.1羟基红花黄色素A对照品溶液的制备精密称取羟基红花黄色素A对照品10.09 mg，置50 mL量瓶中，加25%甲醇溶解并稀释至刻度，配制成质量浓度为195.342 4 g/mL的对照品储备液；取2 mL对照品储备液，置10 mL量瓶中，用25%甲醇稀释至刻度，配制成质量浓度为39.068 5 g/mL的对照品溶液。2.2.2.2供试品溶液的制备取“2.1”项下提取液适量（批号：2022001），经5 000 r/min离心5 min，精密吸取上清液5 mL，置于10 mL的容量瓶中，加25%的甲醇定容，摇匀，用0.45 m微孔滤膜滤过，取续滤液即得供试品溶液。2.2.2.3阴性样品溶液的制备取缺红花药味的阴性提取液，同“2.2.3”项下供试品溶液的制备方法制得。2.2.3专属性考察精密量取“2.2.2.1”“2.2.2.2”“2.2.2.3”项下羟基红花黄色素A对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各10 L，按“2.2.1”项下的色谱条件进样，记录色谱图。结注：A.阴性对照品溶液；B.对照品溶液；C.供试品溶液图 1HPLC 专属性色谱图Conclusion:The method is simple,accurate,with good precision,repeatability and stability.It is suitable for thequality control of the water extract intermediate of Shiliuwei Dujuanhua Nongsuowan.KeywordsShiliuwei Dujuanhua Nongsuowan;total flavonoids;hydroxysafflor yellow A;high performanceliquid chromatography;UV-vis spectrophotometry642023年2月第29卷第2期February.2023 Vol.29 No.2果显示，供试品和对照品溶液的保留时间一致且峰形对称，阴性对照品在目标峰处无干扰，理论塔板数以羟基红花黄色素A计不低于8 000，表明该方法的专属性良好。（见图1）2.2.4