茶树精油联合云南白药治疗实...性口腔溃疡的疗效及机制研究_吴子湘.pdf

北京口腔医学 2023年第31卷第1期 Beijing Journal of Stomatology February 2023，Vol.31，No.135口腔溃疡的病因及发病机理尚不明确，可能是多种因素的综合结果，尤其是免疫学因素在致病机理中起关键作用1，而肿瘤坏死因子-(tumor necrosis factor-,TNF-)在口腔溃疡致病机理方面占有重要地位，因为 TNF-的增加可引起白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)和 CD4+、CD8+等细胞因子发生数量与功能上的变化2。有研究表明，茶树精油(tea tree essential oil,TTO)具有降低机体TNF-的作用，但目前还没有关于 TTO 治疗口腔溃疡方面的相关研究，同时发现，云南白药可抑制 TNF-、IL-6 等细胞因子的表达，对控制炎症的发展起到一定的作用。目前口腔溃疡的治疗主要以局部治疗为主，治疗该病的药物虽多，但都无法起到根治作用3。本实验将 TTO 在治疗实验性口腔溃疡时是否会使血清中 TNF-、IL-6、IL-2 和 CD4+、CD8+的水平发生改变进行探究，以分析 TTO 联合云南白药对口腔溃疡的愈合具有的协同作用，为口腔溃疡的临床治疗提供一定的实验性依据。茶树精油联合云南白药治疗实验性口腔溃疡的疗效及机制研究吴子湘 张炜鹏 杨昊 卢丽洁 湛晶蕾 梅梓楠 黄杰 谭健【摘要】目的 探究茶树精油联合云南白药治疗治疗实验性口腔溃疡的疗效及机制,为口腔溃疡的临床治疗提供一定的理论依据。方法 将 48 只 SD 大鼠，随机分成四组，每组 12 只，分别命名为空白对照组、模型对照组、云南白药组、联合组，采用化学灼烧法建立大鼠口腔溃疡模型，游标卡尺测量创面直径，酶联免疫吸附试验（ELISA)检测各组大鼠血清炎症因子 TNF-、IL-6、IL-2 水平，流式细胞术检测各组大鼠外周血 T 细胞亚群 CD4+、CD8+水平。结果 茶树精油联合云南白药可以显著缩小大鼠口腔溃疡直径（P 0.05），对模型大鼠口腔溃疡有一定的免疫调节作用，茶树精油和云南白药都能使升高的炎症因子 TNF-、IL-6、IL-2 得到降低，使降低的 T 细胞 CD4+、CD4+/CD8+得到回升，升高的 CD8+降低，但与单一云南白药治疗相比，茶树精油联合云南白药的免疫调节作用差异显著（P 0.05）。结论 茶树精油联合云南白药治疗实验性口腔溃疡可增强疗效，减小溃疡直径，抑制炎症反应，改善免疫调节功能，其治疗机制可能与降低 TNF-、IL-6、IL-2 水平和调节 CD4+、CD8+T 细胞失衡有关。【关键词】口腔溃疡；云南白药；茶树精油；免疫调节【中图号】R781.51【文献标识码】A 【DOI】10.20049/j.bjkqyx.1006-673X.2023.01.007Efficacy and mechanism of tea tree essential oil combined with Yunnan Baiyao in the treatment of experimental oral ulcer WU Zi-xiang,ZHANG Wei-peng,YANG Hao,LU Li-jie,ZHAN Jing-lei,MEI Zi-nan,HUANG Jie,TAN Jian.School of Stomatology,Changsha Medical University,Changsha 410219,China【Abstract】Objective To investigate the effect and mechanism of tea tree essential oil combined with Yunnan Baiyao in the treatment of experimentally oral ulcer.Methods A total of 48 SD rats were randomly divided into four groups of 12,blank control group,model control group,Yunnan baiyao group,combined group.Chemical burning method was adopted to establish the rats oral ulcer model.The levels of serum inflammatory cytokines TNF-,IL-6 and IL-2 were detected by enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA),and the levels of CD4+and CD8+in peripheral blood T cell subsets were examined by flow cytometry.Results Tea tree essential oil combined with Yunnan baiyao significantly reduced rats oral ulcer diameter(P0.05).Tea tree essential oil and Yunnan baiyao could lower the level of inflammatory factor TNF-,IL-6,IL-2 and raise the level of CD4+T cells and CD4+/CD8+.Conclusions Tea tree essential oil combined with Yunnan Baiyao in the treatment of experiment oral ulcer can enhance the curative effect,reduce ulcer diameter and inhibit the inflammatory response.【Key words】Oral ulcer;Yunnan baiyao;Tea tree essential oil;Immune regulation基金项目：国家级大学生创新创业训练计划项目-教高司函2019（s201910823023）作者单位：410219 长沙 长沙医学院口腔医学院通信作者：谭健，E-mail:，电话：13618465067北京口腔医学 2023年第31卷第1期 Beijing Journal of Stomatology February 2023，Vol.31，No.136材料和方法1.材料SD 大鼠 48 只，体重为(20010)g，雌雄各 24只，购自长沙市天勤生物有限公司，动物许可证号：SCXK(湘)2019-0014。本次研究获得长沙医学院口腔医学院伦理委员会批准通过。将大鼠于动物房喂食硬质鼠料，自由饮水，动物饲养环境安静，室温25 左右，湿度 55%左右，适应性饲养 1 周后进行实验。2.试剂及仪器 NaOH 晶体（双辽蒙东化工公司）；水合氯醛原料（质量分数 99.7%，陕西正一药用辅料公司）；TTO（纯度 98%，江西康盛堂药业公司）；云南白药粉剂（4 g/瓶，国药准字 Z53020798，云南白药集团股份公司）；TNF-、IL-6、IL-2 酶联免疫吸附试验试剂盒(武汉纯度生物公司)；CD4+、CD8+免疫组化试剂盒（武汉博士德生物工程公司）；PBS 缓冲液，高速离心机(赛默飞世尔科技公司，美国)；全自动酶标仪（Thermo 公司，美国）；BDFACSCalibur 型全自动分析流式细胞仪(山东莱索科技有限公司)。3.动物模型的建立采用化学灼烧法建立实验性口腔溃疡4。实验大鼠采用自配 4%水合氯醛麻醉，无菌棉球干燥大鼠右侧颊部黏膜，取 3 mm3 mm NaOH 晶体置于右侧颊部靠口角黏膜处烧灼 1 min，用生理盐水冲洗创口，24 h 后可观察到口腔黏膜灼烧面形成直径约0.5 cm 的近似圆形创面(图 1)。为保证创面大小、深度一致，建立大鼠模型均由同一人完成。4.实验动物分组及给药将 48 只大鼠，随机分成四组，每组 12 只，分别命名为空白对照组：不做处理，正常饲养；模型对照组：生理盐水涂敷大鼠口腔溃疡创面3 min，不作给药处理，连续给药14 d；云南白药组：先使用生理盐水冲洗创面，再用消毒棉签蘸云南白药粉末均匀外敷在创面上，每天 2 次,给药后 1 h不予进食，连续给药 14 d；联合组：用消毒棉签蘸 TTO 涂敷持续 3 min，涂敷 TTO 30 min 后，用消毒棉签蘸云南白药粉末均匀外敷在创面上，每天 2次,给药后 1 h 不予进食，连续给药 14 d。5.观察指标治疗 14 d 后用电子游标卡尺测量各组大鼠直径，并记录大鼠口腔溃疡愈合例数，计算愈合率，愈合标准：溃疡直径 1 mm 为愈合，溃疡 1 mm为不愈合。直径测量结束后，各组大鼠尾静脉取血 5 ml,室温静置 60 min，采用 3000 r/min 离心机，离心 20 min 后收集上层血清,采用 ELISA 测定血清炎症指标 TNF-、IL-6、IL-2 水平，采用流式细胞术测定外周血 T 细胞亚群 CD4+、CD8+水平（具体操作按试剂说明书）。6.统计学分析数据采用 SPSS20.0 统计分析软件进行处理。计量资料数据以均数 标准差表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用 LSD-t检验，计数资料组间比较采用 2检验，P 0.05 表示差异具有统计学意义。结 果1.口腔溃疡大小和愈合情况各组大鼠治疗 14 d 后口腔溃疡直径和愈合情况见表 1 和图 2。各组大鼠溃疡直径、愈合只数和愈合率差异均有统计学意义（P 0.05）；与模型对照组比较，云南白药组和联合组溃疡直径明显缩小，联合组与云南白药组比较，差异有统计学意义（P0.05）；联合组愈合例数与模型对照和云南图 1 实验性口腔溃疡动物模型建立表 1 各组大鼠治疗后口腔溃疡直径情况（xs，mm）组别例数溃疡直径愈合例数愈合率(%)空白对照组12-模型对照组122.500.90216.7云南白药组121.200.51*7*58.3*联合组120.700.16#12#100#F 值28.365P 值0.0010.0010.001注：*：与模型对照组比较,P0.05；#：与云南白药组比较，P0.05北京口腔医学 2023年第31卷第1期 Beijing Journal of Stomatology February 2023，Vol.31，No.137白药组比较，差异具有统计学意义（P0.05）；云南白药组和联合组溃疡愈合率显著高于模型对照组（P0.05），云南白药组与联合组愈合率比较，差异具有统计学意义（P0.05）。2.ELISA 测定血清炎症指标水平的变化各组大鼠治疗14 d后血清炎症因子水平变化情况见表 2。各组大鼠血清炎症因子 TNF-、IL-6、IL-2 水平差异均有统计学意义（P0.05)；与空白对照组比较，模型对照组 TNF-、IL-6、IL-2 水平显著升高，差异均具有统计学意义（P 0.05）；云南白药组和联合组 TNF-、IL-6、IL-2 水平均明显低于模型对照组，差异均具有统计学意义（P 0.05）；联合组 TNF-、IL-6、IL-2 水平均显著低于云南白药组，差异具有统计学意义（P 0.05）。3.流式细胞术测定外周血 T 细胞亚群水平各组大鼠治疗 14 d 后外周血 T 细胞亚群水平变化情况见表 3。各组大鼠 T 细胞亚群水平差异均有统计学意义（P 0.05）；与空白对照组比较，模型对照组 CD4+、CD4+/CD8+水平显著降低，CD8+水平显著升高，差异均具有统计学意义（P 0.05）；云南白药组和联合组 CD4+、CD4+/CD8+水平均高于模型对照组，CD8+水平均低于模