超高效液相色谱-三重四极杆...测全血中常见安眠镇静类药物_方雅莉.pdf

2 0 2 3年河北大学学报(自然科学版)2 0 2 3第4 3卷 第2期J o u r n a l o f H e b e i U n i v e r s i t y(N a t u r a l S c i e n c e E d i t i o n)V o l.4 3 N o.2D O I:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 0 0 0 1 5 6 5.2 0 2 3.0 2.0 0 8超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法检测全血中常见安眠镇静类药物方雅莉1,马骥2(1.广东医科大学 科研平台服务管理中心,广东 东莞 5 2 3 0 0 0;2.东莞市公安局 物证鉴定中心,广东 东莞 5 2 3 0 0 0)摘 要:建立了超高效液相色谱-三重四极杆复合线性离子阱质谱快速筛查确证全血中4 9种安眠镇静类药物.样品前处理采用固相支撑液液萃取法.色谱条件:色谱柱为W a t e r s C 1 8(2.1 mm5 0 mm,1.7 m),以5 mm o l/L乙酸铵-(体积分数为0.1%)甲酸水溶液(A),甲醇(B)为流动相,进行梯度洗脱.在0.12 0 0.0 n g/m L内,4 9种常见药物展现出良好的线性关系(R20.9 9),最高检出限为0.1 n g/m L;最高定量限为0.5 n g/m L;全血基质中5 0、1 0 0、2 0 0 n g/m L 3个加标水平下回收率为6 5.9%1 0 9.0%,日内精密度为2.0%1 7.6%、日间精密度为2.0%1 6.3%.该方法可应用于生物检材中4 9种常见安眠镇静物质的检测.关键词:安眠镇静类药物;超高效液相色谱串联质谱;全血中图分类号:O 6 5 7.7 文献标志码:A 文章编号:1 0 0 0 1 5 6 5(2 0 2 3)0 2 0 1 6 3 0 8D e t e r m i n a t i o n o f c o mm o n h y p n o t i c a n d s e d u t i v e d r u g s i n w h o l e b l o o d b y U P L C-M S/M SF A N G Y a l i1,M A J i2(1.S c i e n t i f i c R e s e a r c h P l a t f o r m S e r v i c e M a n a g e m e n t C e n t e r,G u a n g d o n g M e d i c a l U n i v e r s i t y,D o n g g u a n 5 2 3 0 0 0,C h i n a;2.F o r e n s i c S c i e n c e C e n t e r,D o n g g u a n P u b l i c S e c u r i t y D e p a r t m e n t,D o n g g u a n 5 2 3 0 0 0,C h i n a)A b s t r a c t:A h i g h t h r o u g h p u t s c r e e n i n g m e t h o d b a s e d o n u l t r a p e r f o r m a n c e l i q u i d c h r o m a t o g r a m p h y-t r i p l e q u a d r u p o l e c o m p o s i t e l i n e a r i o n t r a p m a s s s p e c t r o m e t r y(U P L C-Q-T R A P/M S)w a s d e v e l o p e d f o r t h e s i m u l t a n e o u s a n d r a p i d c o n f i r m a t i o n o f 4 9 c o mm o n h y p n o t i c a n d s e d u t i v e d r u g s.T h e p r e-t r e a t m e n t m e t h o d w a s b a s e d o n s o l i d-s u p p o r t e d l i q u i d l i q u i d e x t r a c t i o n(S L E).W a t e r s C 1 8 c h r o m a t o g r a p h i c c o l u m n(2.1 mm5 0 mm,1.7 m)w a s s e l e c t e d,w i t h 0.1%(V/V)f o r m i c a c i d,5 mm o L/L a mm o n i u m a c e t a t e a q u e o u s s o l u t i o n a n d m e t h a n o l a s m o b i l e p h a s e s f o r g r a d i e n t e l u t i o n.T h e c a l i b r a t i o n c u r v e s s h o w e d g o o d l i n e a r i t y i n t h e r a n g e o f 0.12 0 0.0 n g/m L,w i t h c o r r e l a t i o n c o e f f i c i e n t s(R2)g r e a t e r t h a n 0.9 9 f o r a l l 4 9 a n a l y t e s.T h e l i m i t s o f h i g h e s t d e t e c t i o n a n d h i g h e s t q u a n t i f i c a t i o n o f t h e 4 9 c o m p o u n d s w e r e 0.1 n g/m L a n d 0.5 n g/m L,r e s p e c t i v e l y.A t s p i k e d l e v e l s o f 5 0、1 0 0、2 0 0 n g/m L,r e c o v e r i e s,i n t r a-d a y p r e c i s i o n s,a n d i n t e r-d a y p r e c i s i o n s o f t h e 4 9 c o m p o u n d s w e r e 6 5.9%1 0 9.0%,2.0%1 7.6%,a n d 2.0%1 6.3%,r e s p e c t i v e l y.T h e e s t a b l i s h e d m e t h o d i s s u i t a b l e f o r s c r e e n i n g a n d t e s t i n g t h e s e c o m p o u n d s i n b i o l o g i c a l s a m p l e s.收稿日期:2 0 2 2 0 6 1 1 基金 项 目:广 东 医 科 大 学 青 年 培 育 基 金 自 然 科 学 类 面 上 项 目(G DMUQ 2 0 2 1 0 5 0);广 东 省 公 安 厅 科 技 攻 关 项 目(2 0 2 2 G D S S G G 1 5;2 0 2 2 G D S S G G 1 6)第一作者:方雅莉(1 9 9 1),女,湖南岳阳人,广东医科大学实验师,主要从事化学分析和化学合成研究.E-m a i l:8 7 2 1 7 3 7 7 7q q.c o m K e y w o r d s:s l e e p i n g d r u g s;U P L C-M S/M S;w h o l e b l o o d从1 9世纪初至今,经过了漫长的发展,人们研究开发了苯二氮艹卓类、巴比妥类等各种安眠镇静类药物1.近年来,安眠镇静类药物常被犯罪分子使用在刑事案件中,例如麻醉抢劫、强奸等,同时每年也有大量服用安眠镇静类药物中毒事件,由于部分药物在体内代谢较快2,体液中保留的药物原型含量低,而且被害人报案往往具有迟滞性,针对个别案件,常规的检验方法容易造成漏检,因此,开发一种快速、准确、能够低浓度分析多种常见安眠镇静类药物及其代谢物的方法很有必要.目前,国内外报道中针对苯二氮艹卓类和非苯二氮艹卓类、吩噻嗪类等安眠镇静类药物常见的检测方法有气相色谱法(G C)、高效液相色谱法(H P L C)、液相色谱质谱法(L C-M S/M S)3-8和气相色谱质谱法(G C-M S)9-1 6.而使用固相支撑液液萃取作为前处理方法,三重四极杆复合线性离子阱质谱(Q-T R A P/M S)检测全血中多种安眠镇静类药物的研究则鲜有报道.U P L C-Q-T R A P/M S的可编程多反应监测-信息关联采集-增强子离子(S MRM-I D A-E P I)扫描方式在保证灵敏度的同时获得化合物的二级质谱,在对毒物筛查和定量分析方面具有优势,能够避免假阳性或假阴性结果的风险.针对以上情况,本文结合U P L C-Q-T R A P/M S技术,使用固相支撑液液萃取作为前处理方法,建立全血中常见4 9种安眠镇静类药物的检验方法,为全血中药物检验在法庭科学中的应用提供技术支持.1 材料与方法1.1 试剂与仪器液相使用U P L C仪器(日本S h i m a d z u公司),配备自动进样器、恒温柱室和脱气机,质谱系统采用A B-S C I E X QT R A P 4 5 0 0 质谱仪(美国A B公司);离心机(德国S I GMA公司);VO R T E X-5 涡旋混合器(海门其林贝尔公司);微量移液器(德国E P P E N D O R F公司);1 5 1 0超声仪(美国B r a n s o n公司).4 9种安眠镇静类对照品(表1)购自上海安普、德国S I GMA、源叶公司.甲醇、甲酸铵、醋酸铵、乙腈、甲酸(均为H P L C级,上海安普公司);去离子水(由 M I L L I-Q 去离子水系统制备,美国 M i l l i p o r e公司);血样(经过检测不含药物的人体空白血样).1.2 溶液配制分别称取上述4 9种对照品2.5 m g,置于2 5 0 m L容量瓶中,加入甲醇配制成质量浓度为1 0 g/m L 的混合标准溶液.1.3 样品前处理采用固相支撑液液萃取法进行前处理.用移液枪移取全血样品0.1 m L,加入0.5 m L p H为6的磷酸盐缓冲液,充分振荡1 m i n,超声3 m i n,1 2 0 0 0 r/m i n离心1 0 m i n,取上清液加入固相支撑液液萃取柱中,静置5 m i n,加入3 m L二氯甲烷洗脱,洗脱液氮吹浓缩至干,加入1 0 0 L甲醇定容,过0.2 2 m微孔滤膜,滤液待检.1.4 色谱及质谱条件色谱柱:W a t e r s C 1 8(2.1 mm5 0 mm,1.7 m);柱温:4 0;流速:0.3 m L/m i n;进样量:1 L;流动相A:5 mm o l/L乙酸铵-(体积分数0.1%)甲酸水溶液;流动相B:甲醇;洗脱程序:00.5 m i n,9 5%体积分数(下同)A;0.51.5 m i n,9 5%5 0%A;1.52.5 m i n,5 0%4 0%A;2.56 m i n,4 0%A;67 m i n,4 0%2 0%A;78 m i n,2 0%5%A;89 m i n,5%A;99.5 m i n,5%9 5%A;9.51 2 m i n,9 5%A.质谱条件,离子源:电喷雾离子源(E S I);气帘气(C UR):2 4 1.3 2 5 k P a;监测