3期收稿日期：2022-06-22基金项目：国家自然科学基金项目（81560208；31960177）作者简介：范玉成（1993—），男，在读硕士研究生，研究方向：分子法医病理学。通信作者：景丽（1975—），女，教授，主要从事分子法医病理学研究。E－mail：1203220205@qq.com过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxi－someproliferator-activatedreceptorgamma，PPARγ）是核受体超家族中的重要一员[1-3]。噻唑烷酮类化合物以及布洛芬、芬布芬等非甾体抗炎药物是PPARγ重要的人工合成配体[4-5]。有研究[6-8]发现，糖尿病患者发生心肌代谢紊乱与PPARγ激活及表达增强有关。泛素连接酶肌肉环指状蛋白2（ubiquitinligasemuscleringfingerprotein2，MuRF2）是近年发现的心肌横纹肌特异性泛素连接酶[9]。在心肌组织中，MuRF2存在于心肌肌小节M线，与肌联蛋白、肌动蛋白和肌球蛋白协同完成心肌细胞收缩活动，参与并调控心脏发育和舒缩功能[10]。本课题组前期研究[11-12]发现，MuRF2通过泛素化方式修饰PPARγ1，其缺失可能导致严重的糖尿病心肌病，而糖尿病心肌病是目前糖尿病患者死亡的一种常见原因[13-15]。关于MuRF2通过泛素化方式修饰PPARγ1参与糖尿病心肌病发生的机制尚不清楚，仍需通过适当的载体进行相关研究。本文旨在构建PPARγ1、MuRF2和泛素（ubiquitin，Ub）的重组质粒，以HEK293T细胞为工具细胞进行共转染，检测PPARγ1、MuRF2和Ub蛋白的表达及泛素化修饰作用，以期为探讨PPARγ1和MuRF2泛素化修饰作用提供载体。1材料与方法1.1材料与试剂GV146载体和GV417载体购自上海吉凯基因化学技术有限公司；大肠杆菌感受态细胞DH5α由本实验室制作保存；HEK293T细胞由武汉普诺赛生命科技有限公司提供；GeneRuler1kbDNALadder购自ThermoScientific公司；NormalRunTM250bp-ⅡDNALadder购自GeneRay公司；RestrictionEndonuclease购自NEB公司；PrimeSTARRHSDNAPolymerase购自TaKaRa公司；TaqPlusDNApolymerase和ClonExpressTMⅡMuRF2、PPARγ1和Ub重组质粒的构建及鉴定范玉成1，4，徐方晶2，王锐1，何军2，3，景丽1（1.宁夏医科大学基础医学院，银川750004；2.宁夏医科大学临床医学院，银川750004；3.宁夏医科大学总医院，银川750004；4.宁夏医科大学附属石嘴山市第一人民医院病理科，石嘴山753000）摘要：目的构建过氧化物酶体增殖物激活受体γ亚型1（peroxisomeproliferator-activatedreceptorgammaisoform1，PPARγ1）、泛素连接酶肌肉环指状蛋白2（ubiquitinligasemuscle...
