HPLC法评价不同产地柴胡药材的质量_赵利军.pdf

doi:1013819/jissn2096708X202302003引用本文格式:赵利军，魏娟，柳漫宇，等HPLC 法评价不同产地柴胡药材的质量 J 湖北医药学院学报，2023，42(2):127130HPLC 法评价不同产地柴胡药材的质量赵利军1，魏娟1，2，柳漫宇1，3，王姗姗1(1十堰市人民医院湖北医药学院附属人民医院药学部;2武当特色中药研究湖北省重点实验室;3兵兵宏康中药饮片(十堰)有限公司，湖北 十堰442000)摘要 目的:建立柴胡药材的 HPLC 检测方法以评价不同地区柴胡药材的质量。方法:采用 HPLC 法测定 10批不同产地柴胡中柴胡皂苷 a、d 的含量。色谱条件如下:色谱柱为日本岛津 inertsilODS3 色谱柱(5 m，46 mm250 mm)，流动相为乙腈水(45 55)等度洗脱，流速 10 minmL1，检测波长 203 nm，柱温 30。结果:柴胡皂苷 a 的标准曲线回归方程:Ya=412288X+10264(r2=09998)，柴胡皂苷 d 的标准曲线回归方程:Yd=443285X10770(r2=09998)，建立的 HPLC 测定方法简单易行，精准可靠。所测 10 批柴胡药材含量均符合药典要求，综合评分分析显示四川和西藏的柴胡饮片得分较高。结论:10 批柴胡药材整体质量良好，四川、西藏的自然环境和气候类型可能更适宜柴胡生长，柴胡皂苷含量更高。关键词 柴胡;柴胡皂苷 a;柴胡皂苷 d;HPLCQuality Evaluation of Bupleuri adix in Different Origins by HPLCZHAO Lijun1，WEI Juan1，2，LIU Manyu1，3，WANG Shanshan1(1Department of Pharmacy，enmin Hospital，Hubei University of Medicine;2Hubei Key Labo-ratory of Wudang Local Chinese Medicine esearch，Hubei University of Medicine;3Bingbing Hongkang Chinese HerbalPieces(Shiyan)Co Ltd，Shiyan，Hubei 442000，China)Abstract:Objective To establish an HPLC detection method for bupleuri radix to evaluate the quality of bupleurum radixfrom different regions Methods HPLC method was used to determine the content of saikosaponins a and d in 10 batches ofBupleurum from different origins The chromatographic conditions were as follows:the chromatographic column was JapanShimadzu inertsil ODS3 chromatographic column(5 m，46 mm250 mm)，the mobile phase was acetonitrile water(45 55)with equal elution，and the flow rate was 10 min mL1，detection wavelength 203 nm，column temperature 30 esults Standard curve regression equation for saikosaponin a was Ya=412288X+10264(r2=09998)，and standardcurve regression equation for saikosaponin d was Yd=443285X10770(r2=09998)The established HPLC determinationmethod is simple，feasible，accurate，and reliable The content of 10 batches of Bupleurum medicinal herbs tested met therequirements of the pharmacopoeia，and comprehensive score analysis showed that the scores of Bupleurum decoction piecesin Sichuan and Tibet were relatively high Conclusion The overall quality of the 10 batches of Bupleurum medicinal herbsis good，and the natural environment and climate types in Sichuan and Tibet may be more suitable for the growth of Bupleu-rum，with a higher content of saikosaponinsKey words:Bupleuri radix;Saikosaponin a;Saikosaponin d;HPLC 基金项目 十堰市科学技术研究与开发项目(18Y72)作者简介 赵利军(1978)，湖北武汉人，副主任药师，硕士，研究方向:药物质量控制研究。通信作者 王姗姗(1980)，湖北襄阳人，硕士，副主任药师，研究方向:药物新制剂的研究开发。Email:48964897qqcom柴胡作为一种传统中药，在临床上的运用十分普遍，具有和表解里、升发清阳、疏肝解郁的作用，为治疗少阳证的最佳要药1。野生柴胡品种多，生长在中国的柴胡品种共有 42 类，有 17 个变种、7 种形态2。药典规定柴胡正品为伞形科植物柴胡(Bup-leurum chinense DC)或狭叶柴胡(Bupleurum scor-zonerifolium Willd)干燥根3。柴胡的主要生产地区为辽宁、河北、山西、河南、甘肃等地，常用于治疗寒热、疟疾、肝郁气滞、胸闷肋痛、脱肛、月经不调、子宫脱垂和直肠前突等疾病4。近年来柴胡与其他中药材一样，野生资源急剧下降，为了能够有效地保护721赵利军，等HPLC 法评价不同产地柴胡药材的质量柴胡野生资源，科学开发新的柴胡药用资源、发展规范化种植(GAP)等，有学者建议可以扩大柴胡药材基源的种类，对不同地区柴胡药材的质量开展分析研究。目前我国有部分省区已经进行了柴胡的人工种植，但是因为种植环境不同，柴胡的有效成分含量存在差异5。柴胡皂苷是一种齐墩果烷衍生物，一般为糖苷类物质，研究证明柴胡皂苷具有多种药理活性，包括镇定、抗痉挛、解热止痛、抗病毒、提高身体抵抗力、抗炎、抗肿瘤等。皂苷类物质是柴胡临床应用时最主要的活性成分6，柴胡皂苷中的皂苷 a、d 含量最高，化学性质最为活泼，药理作用最佳7。药典规定柴胡药材的质量标准，要求含量测定柴胡皂苷 a(C42H68O13)与柴胡皂苷 d(C42H68O13)的比例总和不能低于 030%，因此研究采用高效液相色谱法对来自不同地区的柴胡药材进行分析，测定各地药材柴胡皂苷 a、d 的含量，通过综合评分对药材进行质量评定，确定更适宜柴胡药材生长的环境，为柴胡资源开发和利用提供科学依据。1仪器与试药11仪器高效液相色谱仪(LC20AT，岛津公司);电子分析天平(CP214，奥豪斯仪器有限公司);微量台式高速离心机(H1650W，湖南湘仪实验仪器开发有限公司);超声波清洗机(CH03BM，苏州创音唯能超声设备有限公司);旋转蒸发器(E52AA，上海亚荣生化有限公司);药筛等。12试剂与药材柴胡 皂 苷 a、柴 胡 皂 苷 d 对 照 品(批 号:wkq19030607、wkq19012905，四川省维克奇生物科技有限公司，纯度98%)，甲醇为分析纯和色谱纯，乙腈为色谱纯(天津市天力化学试剂有限公司)，浓氨水，水为双重蒸馏水。10 批不同产地柴胡饮片来源信息见表 1，经过十堰市人民医院张晓燕教授鉴定均为正品。2方法与结果21色谱条件色谱柱:岛津 Inertsil ODS 3 液相色谱柱(5m，46 mm250 mm);等度洗脱，流动相为乙腈水(45 55);流速:10 minmL1;柱温:30;检测波长:203 nm。22对照品溶液的制备取柴胡皂苷 a、柴胡皂苷 d 对照品适量，精密称量，加甲醇，使每 1 mL 对照品混标溶液分别含有柴胡皂苷 a 对照品 04 mg，柴胡皂苷 d 对照品 05 mg，经摇匀，低温避光保存备用。表 110 批不同产地柴胡来源及编号编号产地来源批号S1西藏天马国药科技有限公司190202S2湖北神农本草中药饮片公司20190301S3山西亳州中强中药饮片公司1901012S4山西湖北长江源制药有限公司20181201S5甘肃江西宏洁中药饮片公司P2019060909S6山西湖北强康中药饮片公司190201S7甘肃安徽国奥中药饮片公司17090121S8四川福建千草有限公司190403S9湖北十堰宏康医药有限公司20190701S10山西运城安徽援康中药饮片公司19010223供试品溶液的制备将柴胡中药饮片进行粉碎，过四号药筛，取样品细粉约 05 g，精确称量，置于具塞锥形瓶中，精确加入含 5%浓氨试液的甲醇 25 mL，密塞瓶口，30 min超声处理(功率 200 W，频率 40 kHz，水温 30)，过滤后两次加入 20 mL 的甲醇，对药品残渣以及容器进行洗涤，合并滤液和洗涤液，旋转蒸发器设置60，加热溶剂回收至干后，甲醇溶液溶解残渣，转至 5 mL 容量瓶中，加甲醇至刻度，定容，摇匀，再次过滤，取滤液，作为进样溶液3。24方法学考察241专属性试验取柴胡样品按照“23”项制成供试品溶液，按“21”项色谱条件进样分析，得到样品的 HPLC 色谱图。参照 2 个对照品的色谱行为在样品色谱图上对其峰进行指认，标定了 2 个成分，分别是图 1 中柴胡皂苷 a 和柴胡皂苷 d。242线性关系考察分别精密吸取柴胡皂苷 a 和柴胡皂苷 d 对照品溶液 5、10、15、20、25 L 进行测定。以进样量(g)为横坐标，峰面积(A)为纵坐标进行线性回归，各成分回归方程分析参数见表 2。结果表明柴胡皂苷 a、柴胡皂苷 d 分别在 20100g、25125 g 范围内与峰面积线性关系良好。821湖北医药学院学报(JHBUM)网址:http:/yyyxcbptcnkinet2023 年 4 月，42(2)注:A:2 种成分混合对照品;B:柴胡样品;1:柴胡皂苷a;2:柴胡皂苷 d图 1HPLC 色谱图表 22 种成分线性关系考察试验数据测定成分回归方程相关系数 线性范围/g柴胡皂苷 aY=412288x+102640999820100柴胡皂苷 dY=443285x107700999825125243精密度试验精密吸取对照品溶液10 L 进样，连续检测 6 次，记录峰面积。结果表明柴胡皂苷 a 和柴胡皂苷 d 峰面积的 SD 分别为 18%和1.9%，表明仪器精密度良好。244稳定性试验制备 S6 供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、24 h 依照液相色谱条件，进样 5 L 分别测定柴胡皂苷 a、d 的峰面积，结果表明柴胡皂苷 a和柴胡皂苷 d 峰面积的 SD 值分别为 1 6%和0.8%，表明在常温下保存 24 h，供试品溶液化学性质仍然比较稳定，可以用于样品的测定。245重复性试验制备 S4 供试品溶液 6 份，分别精密吸取 5 L 进样并记录峰面积。计算得柴胡皂苷 a 和柴胡皂苷 d 峰面积的 SD