藏药翼首草乙醇提取物体外抗氧化活性研究_更桑.pdf

第 卷第 期学报.年 月 .，：藏药翼首草乙醇提取物体外抗氧化活性研究更 桑，李芳龙，旦知才让，桑吉卡，扎西卓玛，更藏卓么，支文秀，卓玛东智，谢红军，多杰仁青，才让南加（西藏藏医药大学附属医院，西藏 拉萨；西藏藏医药大学，西藏 拉萨；四川农业大学，四川 雅安；西藏大学 医学院，西藏 拉萨）摘 要：【目的】探究翼首草乙醇提取物的体外抗氧化活性。【方法】以翼首草的 乙醇提取物为样品，采、总还原能力 个指标来全面评估其体外抗氧化活性。【结果】翼首草醇提物对、清除率的 值分别为翼首草醇提物的 值分别为（）、（）、（）；的 值分别为（）、（）、（），可见虽然翼首草抗氧化活性略低于阳性对照，但仍具有一定的作用，并且对羟基自由基的消除能力优于。【结论】翼首草乙醇提取物具有一定的体外抗氧化活性，其效果低于，但对羟基自由基的抗氧化活性优于。关键词：翼首草；醇提物；总还原能力中图分类号：文献标志码：文章编号：（）收稿日期：基金项目：西藏藏医药大学 年博士点建设项目科研支撑计划项目（）作者简介：更桑（），男，藏族，青海尖扎人，北京中医药大学在读博士，主治医师，研究方向：藏药古籍与阿育吠陀药物对比。通信作者：才让南加（），男，藏族，青海循化人，西藏藏医药大学副教授，研究方向：藏医藏药学，：；多杰仁青（），男，藏族，青海循化人，西藏藏医药大学附属医院主治医师，研究方向：藏医临床，：。引言 年，美国人 率先提出了自由基损伤理论，认为耗氧细胞在进行细胞代谢的过程中会产生一些有毒害效应的超氧自由基，会导致衰老和细胞损伤。根据目前的研究，许多疾病是由于人体中各种外源性和内源性自由基在一定外界环境下与体内的许多物质如脂肪酸、蛋白质、等发生反应，夺取它们的氢原子，继而造成相关细胞的结构和功能的破坏，产生自由基过氧化物的累积所致。因此通过寻找外源性抗氧化剂，清除人体内的自由基，是治疗多种疾病及延衰老的有效手段。目前，在医疗和食品领域使用较多的是化学合成抗氧剂，而动物实验研究表明，如、等对生物体具有潜在的毒副作用。同时皂苷类、生物碱、多酚类等多种物质均表现出良好的抗氧化活性，但真正能商品化生产的天然抗氧化剂很少。因此迫切需要开发新的天然药物的抗氧化剂。藏药的基础研究起步虽晚，但是已有不少研究展现了藏药抗氧化的独特之处。研究表明，多种藏药提取物抗氧化活性较强，粗提取物的抗氧化活性优于已有的合成抗氧化剂，可有效抑制体内的过氧化损伤。可见，从藏药中寻找天然抗氧化剂切实可行。翼首草为川续断科翼首草花属植物匙叶翼首花 （）的全草，为藏族常用药材，藏语名为榜孜毒乌、榜子毒乌、榜孜夺吾等，在“南派藏医药”中，翼首草被喻为“七种仙草”之一，应用广泛。藏医认为，翼首草性寒、味苦、有小毒，具有清热解毒、祛风湿、止痛的作用。目前在对翼首草药理学研究中，大多数集中在抗炎、镇痛及抗类风湿关节炎等方面。而炎症可以引起氧化应激，氧化应激也可引起炎症，有关炎症的疾病，与身体的氧化应激密不可分。因此，研究翼首草的体外抗氧化活性对于相关的疾病也具有一定的意义。材料和方法 植物材料藏药 翼 首 草【（）】采自西藏日喀则，经西藏大学药学教师阿加尔布鉴定。化学试剂（，二苯基三硝基苯肼）（纯度）和（，联氮双乙基苯并噻唑啉磺酸）（纯度）购自（中国上海）。（二丁基羟基甲苯），购自南京建成科技有限公司。所有其他化学试剂均为分析纯，购自中国成都科隆化工有限公司。翼首草不同溶剂提取物制备将翼首草药材打粉，过 号筛备用。取药材粗粉 ，用 乙醇按 的料液比超声波助溶提取 ，过滤，滤渣重复上述提取过程 次，过滤，合并两次提取液。将提取液减压回收，冻干成粉 ，备用。抗氧化活性的测定 自由基消除能力测定实验方法参考文献，取样品提取物各，以及 ，用 乙醇定容至 容量瓶中制得母液。取 ，用 乙醇溶解并定容至 容量瓶中待用。将各样品液和对照液倍比稀释，得到一系列浓度溶液。向含有各浓度 样品液和对照液的 管中加入 溶液，摇匀后，于 水浴中反应，随后在 处测定吸光度。取 乙醇代替，其他与样品组同样，得到吸光度。取 乙醇代替样品液，加入 ，于 水浴中反应 ，在 处测定吸光度。自由基清除率（）（）。自由基消除能力测定实验方法参考文献，配置 溶液 ，溶液 。将 溶 液 和 溶液混合，在室温避光条件下静置过夜，将所得的溶液用无水乙醇稀释，使其在、波长下的吸光度为，即得到 工作液。取 工作液和 样品溶液摇匀混合，静置 ，在 处测得吸光度。取 乙醇溶液和 样品溶液摇匀混合，静置 ，在 处测得吸光度。取 工作液和 乙醇溶液摇匀混合后，静置 ，在 处测得吸光度。自由基清除率（）（）。羟基自由基消除能力测定验方法参考文献，取一系列浓度的样品液和对照液，随后配制 水杨酸溶液和 硫酸亚铁各 ，双氧水 。取 水杨酸溶液与 硫酸亚铁混匀后，加入 不同浓度的样品溶液，然后加入 双氧水摇匀，于室温避光，处测定吸光度。取 蒸馏水代替双氧水，其他与样品组相同，测定吸光度。自由基清除率（）（）。总还原能力测定实验方法参考文献，分别取待测液和对照液 ，依次加入 磷酸缓冲液（），的铁氰化钾溶液，混匀，在 水浴下作用 ，然后加入 的三氯乙酸，在 下离心，取 上清液和 的氯化铁水溶液混合，再加入 蒸馏水，摇匀后，然后在 波长下（以溶剂代替样品做空白）测定吸光度值，平行测定三次，计算吸光度平均值。结果与分析 清除率由图 可知，在研究的浓度范围内，清除率随翼首草醇提物质量浓度的增加而增加，并且在浓度 时，对 的清除率达 以上，说明翼首草的醇提物具有很好的 清楚效果，尽管效果略低于合成抗氧化剂，但仍然具有很好的进一步研究的前景。图 清除率 清除率从图 中，可以看出，在浓度低于 时，对 的清除率明显低于，但当浓度高于 时，翼首草醇提物的清除效果达到和 一样的效果，清除率高达，这也充分说明了翼首草醇提物具有很好的 自由基清除效果。图 清除率 清除率从图 可看出，在浓度较低时，的效果明显优于翼首草醇提物，但当浓度逐步升高，到 时，翼首草醇提物（）对 的清楚率明显高于 （），这充分说明，翼首草醇提物对 自由基有很好的清除效果。图 翼首草乙醇提取物的 清除率 总还原能力从图 中可以看出，虽然翼首草醇提物的总还原能力明显低于，但在实验测定范围 内，总还原能力随浓度升高而增强，还原能力与药物的浓度呈现很好的正相关作用，因此，翼首草醇提物依然可以认为具有一定的总还原能力。图 翼首草乙醇提取物的总还原能力结论与讨论藏药有着悠久的使用历史，丰富的临床应用足以证明其疗效。其中，翼首草已在与氧化机制有关的疾病中被长期应用，表现出较好的效果。本实验采用了四种体外抗氧化评价活性方法探究了翼首草乙醇提取物的体外抗氧化活性，结果表明，尽管翼首草醇提物的综合抗氧化能力低于合成抗氧化剂，但在较高浓度时也可以达到好的自由基消除和还原效果。原因可能是乙醇提取物含有大量成分，而主要抗氧化成分含量较低。同时翼首草醇提物具有一定的抗氧化效果，这可能与翼首草成分中的三萜皂苷类化合物、环烯醚萜、黄酮有关。从成分来看，现代研究发现，翼首草的神经保护作用来自于双环烯醚萜类成分对多巴胺神经元的抗氧化作用，三萜皂苷被证明有很强的 自由基清除活性，总黄酮可以通过提高细胞内 和 等的活性和调节 和 等氧化、抗氧化因子的含量来保护氧化损伤细胞。目前关于翼首草抗氧化作用的研究与应用报道尚不够全面，本研究初步证明了其醇提物的体外抗氧化活性，为寻找其抗氧化活性部位提供了思路，关于其更深层次的抗氧化机制和微观细胞机理有待进一步研究。参考文献：，（）：刘晓瑞，俞仲毅 从自由基理论解释吸烟危害 中国老年学杂志，（）：林宝玉 浅谈自由基对人体的危害及清除方法 中国西部科技，（）：胡大林，廖建坤，吴校连，等 自由基与 的氧化损伤 国外医学（卫生学分册），（）：牛文民，李忠仁 缺血性脑血管病自由基损伤病原学及抗氧化治疗研究进展 上海针灸杂志，（）：郑瑞生，封辉，戴聪杰，等 植物中抗氧化活性成分研究进展 中国农学通报，（）：许本善 藏药甘肃蚤缀提取物的抗氧化活性评价与筛选研究 中国药学会 第十二届全国青年药学工作者最新科研成果交流会论文集 北京：中国药学会，：张娜，周树娅，尹艳清，等 藏药革叶兔耳草粗提物的抗氧化活性研究 云南民族大学学报（自然科学版），（）：方清茂，张浩，曹毓 藏药波棱瓜子提取物对肝损伤大鼠的抗氧化作用 华西药学杂志，（）：青海省药品检验所，青海省藏医药研究所中国藏药：第一卷上海：上海科技出版社，庞伟藏药翼首草的研究与应用中国民族医药杂志，（）：郭晨旭，朱国福藏药翼首草化学成分及药理作用研究进展世界中医药，（）：余兰彬，徐国良，谭志伟，等 法对 种抗衰老中药抗氧化活性的研究 江西中医药，（）：，：，：，（）：吴刚，韩勇 种中药抗氧化活性筛选研究 中国药物经济学，（）：刘巧晓 杜松不同部位化学成分及其抗氧化活性研究 杨凌：西北农林科技大学，（），（）：王蓓蓓，段玉峰，邵红军，等 红托竹荪多糖抗氧化活性的研究 天然产物研究与开发，（）：，（），（）：张隽荣，井宇星，赵佳文，等 藏药匙叶翼首草化学成分研究 医药导报，（）：李公权，盛东来 翼首草化学成分及其神经保护活性 中成药，（）：李琼，叶勇，刘华鼐 诃子皂苷的提取分离及其抗自由基活性的研究 时珍国医国药，（）：蔡帆，张彦，臧林泉 马齿苋总黄酮对 致 细胞氧化应激损伤的保护作用 中药药理与临床，（）：（下转第 页），（，）：，：；【责任编辑：杨睿彤】（上接第 页）（），（，；，；，；，）：（）（），（），（），（），（）；（），（），（）（），（），：（）；【责任编辑：杨睿彤】