电针对系统炎症诱导认知功能...137L及TREM2的影响_庞莉娜.pdf

引用:庞莉娜，兰艳艳，王福明，陈小梅，王志福.电针对系统炎症诱导认知功能障碍小鼠海马 CD137、CD137L 及 TEM2 的影响 J.湖南中医杂志，2023，39(4):179183.电针对系统炎症诱导认知功能障碍小鼠海马 CD137、CD137L 及 TEM2 的影响庞莉娜1，兰艳艳1，王福明1，陈小梅1，王志福2(1.福建中医药大学康复医学院，福建福州，350122;2.福建中医药大学附属康复医院，福建福州，350003)摘要 目的:探讨电针足三里对脂多糖引起的系统炎症诱导认知功能障碍小鼠海马白细胞分化抗原137(CD137)、CD137 配体(CD137L)和髓样细胞触发受体 2(TEM2)的影响。方法:将 24 只小鼠随机分为对照组、模型组和电针组，每组各 8 只，模型组、电针组腹腔注射脂多糖(1 mg/kg)进行造模，对照组给予同等容量 0.9%氯化钠注射液。电针组于造模后及造模后 24 h 给予 15 min 10 Hz、0.5 mA 的连续波电刺激足三里穴，对照组、模型组不做处理。干预后采用新物体识别实验检测小鼠新物体识别指数以评价小鼠学习记忆能力，采用酶联免疫吸附法检测小鼠海马 CD137、CD137L 和 TEM2 的含量。结果:与对照组比较，模型组小鼠新物体识别指数、TEM2 含量显著降低，CD137、CD137L 含量显著升高(均 P0.01);与模型组比较，电针组小鼠新物体识别指数、TEM2 含量显著升高，CD137、CD137L 含量显著降低(均 P0.01)。结论:电针足三里可改善系统炎症诱导的认知功能障碍，其作用机制可能与降低海马区 CD137、CD137L 含量及提高 TEM2 含量有关。关键词 认知功能障碍;电针;系统炎症;CD137;CD137L;TEM2 中图分类号 285.5 文献标识码 ADOI:1016808/jcnkiissn10037705202304039基金项目:国家自然科学基金面上项目(82274658);福建省自然科学基金项目(2022J01347)第一作者:庞莉娜，女，2020 级硕士研究生，研究方向:针刺镇痛临床与基础研究通信作者:王志福，男，教授，硕士研究生导师，研究方向:针刺镇痛临床与基础研究，Email:2007015 fjtcmeducnEffect of electroacupuncture on hippocampal cluster of differentiation 137，cluster ofdifferentiation 137 ligand，and triggering receptor expressed on myeloid cells 2in mice with cognitive impairment induced by systemic inflammationPANG Lina1，LAN Yanyan1，WANG Fuming1，CHEN Xiaomei1，WANG Zhifu2(1.School of ehabilitation Medicine，Fujian University of Traditional Chinese Medicine，Fuzhou 350122，Fujian，China;2.ehabilitation Hospital Affiliated to Fujian University of Traditional Chinese Medicine，Fuzhou 350003，Fujian，China)Abstract Objective:To investigate the effect of electroacupuncture at Zusanli on hippocampal cluster ofdifferentiation 137(CD137)，CD137 ligand(CD137L)，and triggering receptor expressed on myeloid cells 2(TEM2)in mice with cognitive impairment induced by systemic inflammation due to lipopolysaccharide.Methods:A total of 24 mice were randomly divided into control group，model group，and electroacupuncture group，with 8mice in each group.The mice in the model group and the electroacupuncture group were given intraperitoneal injec-tion of lipopolysaccharide(1 mg/kg)for modeling，and those in the control group were given an equal volume of971第 39 卷第 4 期2023 年 4 月HUNAN JOUNAL OF TADITIONAL CHINESE MEDICINEVol.39No.4Apr.20230.9%sodium chloride injection.Immediately and at 24 hours after modeling，the mice in the electroacupuncturegroup were given continuouswave electrical stimulation(10 Hz，0.5 mA)at Zusanli for 15 minutes，and those inthe control group and the model group were not given any treatment.After intervention，the novel object recognitiontest was used to measure novel object recognition index to evaluate learning and memory abilities，and ELISA wasused to measure the content of CD137，CD137L，and TEM2 in the hippocampus.esults:Compared with the con-trol group，the model group had significant reductions in novel object recognition index and the content of TEM2and significant increases in the content of CD137 and CD137L(all P0.01)，and compared with the model group，the electroacupuncture group had significant increases in novel object recognition index and the content of TEM2and significant reductions in the content of CD137 and CD137L(all P0.01).Conclusion:Electroacupuncture atZusanli can improve cognitive impairment induced by systemic inflammation，possibly by reducing the content ofCD137 and CD137L and increasing the content of TEM2 in the hippocampus.Keywords cognitive impairment;electroacupuncture;systemic inflammation;cluster of differentiation 137;cluster of differentiation 137 ligand;triggering receptor expressed on myeloid cells 2大量内毒素进入内环境，可引起炎症介质释放，从而导致全身炎症反应。脂多糖(LPS)是一种由革兰氏阴性菌产生的内毒素，作为炎症反应的强效激活剂，可诱导系统性炎症，导致认知功能障碍14。神经炎症是出现认知功能障碍的关键驱动因素56，早期干预抑制系统性炎症，阻止炎症风暴发生，减轻神经炎症，可改善其诱导的认知功能障碍78。近年来众多研究表明，电针足三里具有明显的抗炎作用，电针还可以改善 LPS 诱导的认知功能障碍913，其作用机制值得深入探讨。因此本研究通过建立系统炎症诱导认知功能障碍模型，电刺激足三里穴，检测小鼠新物体识别指数以及海马白细胞分化抗原 137(CD137)、CD137 配体(CD137L)和髓样细胞触发受体 2(TEM2)含量的变化，拟探讨电针足三里改善系统炎症诱导认知功能障碍的作用机制。1实验材料1.1动物SPF 级雄性 8 周龄 C57BL/6 小鼠24 只，体质量 1822 g，购于上海斯莱克实验动物责任有限公司，由福建中医药大学实验中心饲养，动物实验设备许可证编号:SYXK(闽)20200002，于自然昼夜交替和 2225 室温下饲养，自由进食食物和水。1.2主要仪器与试剂新物体识别测试系统(上海欣软信息科技有限公司);0.5 寸针灸针(苏州医疗用品厂有限公司);HANS200E 穴位神经刺激仪(南京济生医疗科技有限公司);LPS(货号:L2630，美国 Sigma 公司);CD137 酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒(货号:MM98908M2，江苏酶免实业有限公司)、CD137L ELISA 试剂盒(货号:MM98907M2，江苏酶免实业有限公司)、TEM2 ELISA 试剂盒(货号:65342M1，江苏酶免实业有限公司)。2实验方法2.1分组与造模将 24 只小鼠随机分为对照组、模型组、电针组，每组各 8 只。按照本团队的前期研究方法4，10 进行造模:模型组和电针组腹腔注射LPS(1 mg/kg)制备系统炎症诱导认知功能障碍模型，对照组给予同等容量 0.9%氯化钠注射液。模型成功标准:注射 LPS 后小鼠新物体识别指数均明显下降，出现认知功能障碍14。2.2干预措施电针组选取足三里穴进行电刺激。1)穴位定位:参考实验针灸学15 中小鼠的定位方法，足三里位于小鼠膝关节后外侧，在腓骨小头下约 0.5 cm 处;2)电针方法:参考本团队前期研究方法11，将两对无菌针灸针刺入双侧足三里，通过连接 HANS 200E 穴位神经刺激仪，给予10 Hz、0.5 mA 的连续波电刺激 15 min，于 LPS 注射后及注射后 24 h 进行电针干预 2 次。对照组、模型组不做处理。2.3检测指标及方法2.3.1新物体识别实验根据啮齿类动物具备对新的物体有探索的偏好本能，故在电针后对小鼠进行新物体识别实验，以反映小鼠的学习记忆能力。实验分为适应期、训练期和测试期。1)适应0812023 年第 39 卷第 4 期(总第 290 期)期:造模前 1 d 将小鼠置于 1 个 60 cm60 cm40 cm的测试箱中自由探索 5 min，探索完毕后将小鼠取出，放回笼中。每次更换动物前应清理测试箱中小鼠的粪尿，并用 75%乙醇喷洒、擦拭以消除气味。2)训练期:造模前将 2 个完全相同的圆柱体 A 和 B 放置在测试箱的左下角和右下角，将小鼠背对两个物体放入测试箱中，让小鼠在测试箱内自由探索 5 min。3)测试期:造模第二天将左下角的物体 A 取