不同饲喂条件下蜂王浆品质及抗氧化能力评价_乔栋.pdf

25 工艺技术 食品工业 2023 年第44卷第 4 期不同饲喂条件下蜂王浆品质及抗氧化能力评价乔栋1,2，黎洪霞2，刘肇龙2，宋梅2，庞杰1*，陈兰珍2*1.福建农林大学食品科学学院（福州 350002）；2.中国农业科学院蜜蜂研究所（北京 100093）摘要试验比较了工蜂采食天然蜜粉源、饲喂糖水和饲喂代花粉三种不同饲喂条件下所产蜂王浆的水溶性蛋白、总糖、总酚、葡萄糖氧化酶及体外抗氧化能力。结果表明:蜂王浆中水溶性蛋白含量和饲喂条件有关且存在极显著差异,饲喂代花粉生产的蜂王浆中水溶性蛋白含量最高,为59.48 mg/g;而不同饲喂条件下蜂王浆的总糖、总酚酸、葡萄糖氧化酶和羟基自由基清除率无显著性差异;饲喂代花粉生产的蜂王浆与采食天然蜜粉源生产的蜂王浆存在极显著差异。相关性分析表明蜂王浆葡萄糖氧化酶活性与总糖之间存在极显著负相关性,与羟自由基清除率和总抗氧化能力呈极显著正相关性,总酚酸与总糖呈极显著负相关。研究结果对蜂王浆生产具有一定的参考意义。关键词蜂王浆;水溶性蛋白;葡萄糖氧化酶;总酚酸;抗氧化Evaluation on Quality and Antioxidant Capacity of Royal Jelly by Different Feeding ConditionsQIAO Dong1,2,LI Hongxia2,LIU Zhaolong2,SONG Mei2,PANG Jie1*,CHEN Lanzhen2*1.College of Food Science,Fujian Agriculture and Forestry University(Fuzhou 350002);2.Institute of Apicultural Research,Chinese Academy of Agricultural Sciences(Beijing 100093)Abstract This study compared the water-soluble protein,total sugar,total phenol,glucose oxidase and antioxidant capacity in vitro of royal jelly produced by worker bees under three different feeding conditions of natural flower source,sugar water and pollen substitute.The results showed that the content of water-soluble protein in royal jelly was related to the feeding conditions and there was a significant difference.The content of water-soluble protein in royal jelly produced by feeding substitute pollen was the highest,reaching 59.48 mg/g.However,there was no significant difference in total sugar,total phenolic acid,glucose oxidase and hydroxyl radical scavenging rate of royal jelly under different feeding conditions.There was a significant difference between the royal jelly produced by feeding substitute pollen and the royal jelly produced by feeding natural honey powder.The correlation analysis showed that there was a very significant negative correlation between the glucose oxidase activity of royal jelly and total sugar,and a very significant positive correlation with the hydroxyl radical scavenging rate and total antioxidant capacity;Total phenolic acid and total sugar were significantly negatively correlated.The research results have certain reference significance for the production of royal jelly.Keywords royal jelly;water soluble protein;glucose oxidase;total phenolic acid;antioxidant*通信作者；基金项目：国家自然科学基金（32272402），国家农产品质量安全风险评估项目（GJFP20220305）蜂王浆是年轻工蜂出生后第5天至第14天之间由咽下腺和下颌腺分泌的黄白色酸性物质，用于喂养工蜂前三天的幼虫和蜂后的一生1。蜂王浆富含多种营养物质2，大量相关研究表明蜂王浆具有抗氧化活性3、胰岛素样作用、改善糖尿病、降血脂及免疫调节等功能特性。蜂王浆的内在组分决定了生物活性功能4，但是蜂王浆的生产质量受到多方面的影响，如蜂群群势、足够的食物供应（包括蜂蜜和花粉）、适宜的温度（2030），以及良好的自然环境（无农药或微量农药）等。已有研究表明，蜜粉源的差异会影响蜂王浆质量5-6。在外界蜜粉源缺乏时，为保证蜂王浆的持续性产出，蜂农会进行人工饲喂来补充蜂群生产必需的蛋白质和糖分，但是在生产中添加人工饲料是一个有争议的话题7。已有研究表明工蜂在不同采食下会影响蜂王浆产量，部分糖分发生变化，其次人工饲料可能会刺激下咽腺发育8-10。对于饲喂产生的蜂王浆质量仍没有明确定论。此次研究通过比较工蜂采食天然蜜粉源、饲喂糖水和饲喂代花粉三种不同饲喂条件下蜂王浆的品质差异，并通过体外抗氧化测定方法研究了不同蜂王浆的体外抗氧化活性差异，对不同饲喂条件下蜂王浆的质量变化差异提供数据支撑，为生产优质蜂王浆提供理论指导。1材料与方法蜂王浆样品均采集于湖北省钟祥市，根据蜂群不同采食情况对所产蜂王浆进行分类，即天然组和饲喂组，天然组指蜂王浆在生产过程中蜂群食物完全来自天然蜂蜜和蜂花粉，饲喂组指蜂王浆在生产过程食品工业 2023 年第44卷第 4 期 26 工艺技术中人为添加白糖水和代花粉饲喂蜂群。试验样品有采食天然花粉和花蜜生产的蜂王浆（TRWJ）、采食天然花粉并人工饲喂白糖水生产的蜂王浆（WTWJ）和采食天然蜂蜜并人工饲喂代花粉生产的蜂王浆（WFWJ），三种类别蜂王浆共计76个样品。样品信息见表1，样品采集完成后立即保存在-18 冰箱中备用直到检测。表1蜂王浆样品采集信息序号样品编号蜜蜂食源样品数量/个1TRWJ天然花粉、天然花花蜜392WTWJ天然花粉、糖水143WFWJ代花粉,天然花蜜23Biofuge离心机（美国Thermo Scientific公司）；KQ218超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；Vortex Mixer QL-866涡旋混合器（其林贝尔仪器制造有限公司）；PX124ZH电子天平奥豪斯仪器（常州）有限公司；Synergyneo2 Alpha酶标仪（美国伯腾仪器有限公司）；752紫外可见分光光度计（上海菁华科技有限公司）。牛血清白蛋白（北京索莱宝科技有限公司）；考马斯亮蓝G250、维生素C、2,2-联氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二铵盐、靛蓝胭脂红、乙酸钠（上海源叶生物科技有限公司）；磷酸、苯酚（上海吉至生化科技有限公司）；浓硫酸（国药集团化学试剂有限公司）；葡萄糖（上海阿拉丁生化科技股份有限公司）；没食子酸、水杨酸（河北百灵威超精细材料有限公司）；硫酸亚铁（西陇科学股份有限公司）；30%过氧化氢、过硫酸钾（福晨化学试剂有限公司）。1.1试验方法1.1.1水溶性蛋白含量测定参考文献11-12方法，并略作修改。称取0.1 g牛血清白蛋白溶解于纯水定容至100 mL，梯度为0，40，80，120，160，180和200 g/mL，各取0.2 mL不同质量浓度稀释液于1.5 mL试管中，加入1 mL考马斯亮蓝反应液，立即涡旋15 s，混匀后静置5 min，在波长595 nm处测定吸光度，以牛血清蛋白系列浓度为横坐标、吸光度为纵坐标绘制的标准曲线方程：y=3.449x+0.661，相关系数R2=0.999。称取0.5 g蜂王浆定容10 mL纯水中，涡旋2 min，4 下超声10 min，12 000 r/min下离心20 min，取上清液并将上清液进行稀释，取50 L加入950 L纯水涡旋混匀待测。按照制作标准曲线的操作方法对样品测定水溶性蛋白含量，将测定的吸光度代入标准曲线方程，计算其含量。1.1.2总糖含量测定参考方法13-14进行改进。称取50 mg葡萄糖溶于纯水并定容至50 mL，配制梯度浓度为0，80，160，240，320和400 g/mL葡萄糖标准溶液，配制80%苯酚作为储备液，使用前稀释成5%苯酚工作液，在具塞试管中依次加入0.2 mL不同浓度的葡萄糖标准溶液和0.2 mL 5%苯酚，再迅速加入1 mL浓硫酸，涡旋使其充分混匀，静置10 min，在波长490 nm处测定吸光度，以葡萄糖标准品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线方程：y=0.006x+0.063 6，相关系数R2=0.999。称取0.5 g蜂王浆定容于10 mL去离子水，涡旋混匀后超声10 min，12 000 r/min下离心20 min，取上清液稀释20倍，按照标准曲线操作方法对样品进行测定，将吸光度带入标准曲线方程计算含量。1.1.3葡萄糖氧化酶测定参考权淑静等15，采用褪色光度法，并略作改动。准确吸取0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0和1.2 mL过氧化氢工作液于具塞比色管，依次加入0.3 mL乙酸-乙酸钠缓冲溶液和0.26 mL靛蓝胭脂红溶液，补水至总体系为5 mL，混匀后置于100 沸水中加热13 min，取出后用冰水冷却35 min，终止反应，在波长612 nm处用蒸馏水做参比，测定其吸光度。以过氧化氢溶液浓度为横坐标、吸光度为纵坐标绘制标准曲线方程：y=-0.360 4x+0.847，相关系数R2=0.990。将蜂王浆样品上清液稀释为25 mg/mL，取0.4 mL于具塞试管中，在37 恒温培养箱中加热孵育30 min，取出后按照上述操作过程，依次加入工作液，计算产生过氧化氢的含量，计算葡萄糖氧化酶的活性。酶活力单位规定为：37 条件下，1 min内催化葡萄糖反应产生1 g过氧化氢所需的酶量为1 U。1.1.4总酚酸测定 参考Balkanska等16方法。称取50 mg没食子酸溶于乙醇中定容于50 mL容量瓶，配成1 000 g/mL没食子酸标准品储备液，将储备液用纯水稀释成0，10，20，40，60，80和100 g/mL质量浓度梯度，取0.2 mL不同质量浓度标准品于试管中，依次加入0.2 mL 1 mol/L福林酚显色液和1 mL 1 mol/L碳酸钠溶液，用水补至3 mL，混匀后静置避光反应30 min时，在波长760 nm处测定吸光度，标准曲线方程为y=0.006 8x+0.066 8，相关系数R2=0.998。配制100 mg/mL蜂王浆溶液样品并稀释成20 mg/mL，按照标准品的反应过程依次添加反应溶剂，反应后上机检测吸光度。1.