基于蛋白质组学探讨刮痧干预冠心病痰浊瘀阻证的作用机制_金波.pdf

2023年2月第29卷第2期February.2023 Vol.29 No.2基于蛋白质组学探讨刮痧干预冠心病痰浊瘀阻证的作用机制*金波1，2，蒋谷芬2，朱诗林2，曾碧君2，何花2，高娟2，雷晓红2（1.湖南中医药大学，湖南长沙410208；2.湖南中医药大学第二附属医院，湖南长沙410005）摘要目的：基于非标记定量蛋白质组学技术探索刮痧治疗冠心病痰浊瘀阻证的生物学机制。方法：随机选取5例冠心病稳定型心绞痛痰浊瘀阻证患者，刮痧治疗4周，将治疗前、后的血清分别标记成Ctrl组、Test组，应用非标记定量蛋白质组学技术进行差异蛋白的分析和鉴定。结果：通过鉴定观察到蛋白总数为387，其中差异蛋白数有9个，包括上调的差异蛋白7个，下调的差异蛋白2个。上调的差异蛋白为APMAP、APOC1、APOM、SAA2-SAA4、RARRES2、P01714、P0DP04。下调的差异蛋白为CP、PROC。GO富集分析结果中所鉴定到的蛋白主要涉及生物过程（BP）、细胞组成（CC）、分子功能（MF）三方面。KEGG分析显示主要介导了ferroposis（铁死亡）、porphyrin metabolism（卟啉代谢）、complement and coagulation cascades（补体及凝血级联）等信号通路。结论：刮痧治疗冠心病痰浊瘀阻证患者的生物学机制主要是作用于APMAP等差异蛋白，影响患者动脉粥样硬化的进程和脂质代谢，同时在炎症调控、免疫调节中起到了积极的作用。刮痧可宏观上调控和影响脂蛋白的重塑、脂质代谢、芳香脂酶等活性，通过激活炎症调控、新陈代谢和免疫调节等信号通路，在整体上影响冠心病相关的病理变化。关键词冠心病；痰浊瘀阻证；刮痧；非标记定量蛋白质组学技术；差异蛋白；GO富集分析中图分类号R248文献标识码A文章编号1672-951X（2023）02-0111-06DOI：10.13862/43-1446/r.2023.02.023The Mechanism of Scraping in the Intervention of Coronary Heart Disease withPhlegm-Turbidity-Stasis Syndrome Based on ProteomicsJIN Bo1,2,JIANG Gufeng2,ZHU Shiling2,ZENG Bijun2,HE Hua2,GAO Juan2,LEI Xiaohong2(1.Hunan University of Chinese Medicine,Changsha Hunan 410208,China;2.The Second Affiliated Hospital of Hunan University of Chinese Medicine Changsha Hunan 410005,China)AbstractObjective:To explore the biological mechanism of scraping therapy in patients with coronaryheart disease with phlegm-turbid-stasis syndrome based on unlabeled quantitative proteomics technology.Methods:Totally 5 patients with stable angina with coronary heart disease were randomly selected and treated with scrappingfor 4 weeks.Serum before and after treatment were labeled as Ctrl group and Test group,respectively.And unlabeledquantitative proteomics technology was used to analyze and identify differential proteins.Results:The total numberof proteins was 387,among which there were 9 differential proteins,including 7 up-regulated proteins and2 down-regulated proteins.The upregulated differential proteins were APMAP,APOC1,APOM,SAA2-SAA4,RARRES2,P01714,and P0DP04.The down-regulated differential proteins were CP and PROC.The proteinsidentified in the GO enrichment analysis were mainly involved in biological process(BP),cell composition(CC)and molecular function(MF).KEGG analysis showed that ferroposis,porphyrin metabolism,complement andcoagulation cascades were mainly mediated.Conclusion:The biological mechanism of scraping in treating patientswith coronary heart disease of phlegm-turbidity-stasis syndrome is mainly acting on differential proteins such as引用：金波，蒋谷芬，朱诗林，曾碧君，何花，高娟，雷晓红.基于蛋白质组学探讨刮痧干预冠心病痰浊瘀阻证的作用机制J.中医药导报,2023,29(2):111-116.*基金项目：湖南省中医药计划科研计划重点项目（202014，C2022031)通信作者：蒋谷芬，E-mail：1112023年2月第29卷第2期February.2023 Vol.29 No.2国家医院质量检测系统（HQMS）调查发现，2020年有高达9 940 178例心血管病患者，而其中冠心病患者占53.4%，冠心病已然变成威胁人民健康和生命的主要疾病之一1-2。冠心病患者主要是因动脉粥样硬化等微循环病变导致一系列临床症状。巢元方提出“百病皆由痰作祟”，在冠心病的各类证型中痰浊瘀阻证的研究普遍引起各学者的重视3-4。外感邪气或情志及饮食失调，导致机体气机运行不畅而内生痰浊，进而引起全身血液运行不畅，不通则痛，发为胸痹5。中医特色技术之一刮痧被广泛应用于冠心病的治疗中6-7，其通过刮拭局部腧穴、经络，从而达到祛邪于外、活血通络和防治疾病的目的8。已有研究证实刮痧作为经典的中医外治技术，在干预冠心病中有确切的临床疗效，能有效改善患者的中医证候积分、舒适度量表评分、炎症因子、血液流变学指标9-10。但有关刮痧疗法的生物学作用机制、基础研究方面的研究仍然较为薄弱。蛋白质组学作为一门新兴学科，主要研究细胞、体液、组织中表达的基因组总蛋白11，旨在探究各类疾病的病理机制，发现疾病的特异性生物蛋白标志物并进行分析研究。其具有整体性和可动态性的生物学特点，与中医整体观、恒动观等科学理念相契合12-13。因此，本研究利用液质串联质谱的非标记定量蛋白质组学技术对5例冠心病（稳定型心绞痛）痰浊瘀阻证患者经刮痧干预前后的血浆样本进行蛋白质组学的研究，进一步探讨刮痧的作用机制。1资料与方法1.1诊断标准1.1.1西医诊断标准冠心病稳定型心绞痛：病程1个月且稳定的心绞痛。因运动或其他因素使心肌需氧量增加的情况所诱发的短暂胸痛发作，立刻停止活动休息或舌下含服硝酸甘油后，疼痛常可迅速减轻或消失14。1.1.2中医诊断标准参照 中药新药临床研究指导原则（试行）15拟定，诊断为胸痹痰浊瘀阻证。主症：胸闷，或胸闷如窒；胸痛，甚者痛引肩背，气短喘促。次症：心悸心烦，形体肥胖，大便黏腻不爽，或便秘。舌象、脉象：舌淡或胖或紫暗，或有瘀斑瘀点，苔浊腻或滑，脉弦或弦滑。患者具备上述3项主症或主症、次症各2项以上，参照舌脉，即可诊断。1.2纳入标准（1）符合上述诊断标准；（2）年龄1880岁；（3）患者知晓本研究具体研究内容和实施方案以及利害关系，签署知情同意书，同意本研究的实施。1.3排除标准（1）短时间（1个月）内有过大型手术或有感染、创伤等病史者；（2）严重心肌病及心脏瓣膜病，或合并严重心、肺、肝、肾功能不全等的患者；（3）精神病或恶性肿瘤患者；（4）妊娠期或哺乳期妇女；（5）患有传染性疾病的患者；（6）参加其他研究者。1.4终止标准（1）患者主动提出要求退出研究；（2）在研究治疗期间，患者出现不宜继续试验的过敏反应、并发症或其他特殊情况等。1.5研究对象2021年112月在湖南中医药大学第二附属医院心血管门诊患者中随机抽取5例符合冠心病稳定型心绞痛痰浊瘀阻证标准的患者。其中女3例，男2例；年龄（64.8711.23）岁；病程610（7.152.64）年；3例患者合并原发性高血压，2例患者合并2型糖尿病。本研究通过湖南中医药大学第二附属医院伦理委员会审查，伦理审查编号：2020-KY-003。1.6干预方法受试者在常规护理指导的基础上，予以铜砭刮痧。1.6.1刮痧器具刮痧器具为虎符铜砭。1.6.2刮痧顺序铜砭刮痧包括头部刮痧、背部刮痧、胸部刮痧及四肢刮痧，操作时统一先进行头部刮痧，其次进行背部刮痧，再进行胸部刮痧，最后进行四肢刮痧。刮痧方案参照刮痧疗法16、全息经络刮痧法17制定，具体操作方法如下：（1）头部刮痧：刮拭头部额中带，额旁1带（双侧）。（2）背部刮痧：点法或按法点按心俞、厥阴俞，刮拭左上背部心脏体表投影区，循督脉由大椎穴刮至至阳穴，刮拭足太阳膀胱经（从下往上刮）第1侧线大杼穴至膀胱穴。（3）胸部刮痧：刮拭左胸部心脏体表投影区，循任脉从天突穴刮至膻中、巨阙。（4）双上肢：泻刮手厥阴心包经、曲泽至劳宫的循经线、手少阴心经、少海至少府的循经线，以皮肤微红为度，点刮第二掌骨桡侧心穴。（5）双下肢：先点刮血海、丰隆，再刮拭全足底部，重点刮拭心区（心的足底投影区）。1.6.3铜砭刮痧要点先涂抹刮痧油，用铜砭以4590角倾斜，每次刮痧23 cm，每部位2030次，每一个部位刮拭35 min，沿着一定的方向进行刮拭，手法“徐而和”，用力均匀，直到肌肤发红充血，呈现成点、成块或成片的红色、暗红色或紫青红色斑点（即为痧点）。治疗时肌肤表面可有发热感，对于一些不出痧或者出痧少的患者，不强求出痧，在原部位刮拭20次，以皮肤出现微红为度。在刮痧的过程中，要严密观察患者有无不适，并根据患者反应及时调整刮拭的手法和节奏。1.6.4干预时间刮痧时间每次12 h，7 d治疗1次，4次为1个疗程，共治疗1个疗程。1.7标本采集受试者分别在刮痧干预前、干预4周后，取空APMAP,affecting the progression of atherosclerosis and lipid metabolism in patients,and playing a positive rolein inflammation regulation and immune regulation.Scraping can macro-regulate and affect the remodeling oflipoprotein,lipid metabolism,aromatase and other activities.By activating the signaling pathways of inflammationregulation,metabolis