ISSN1006－7167CN31－1707/TＲESEAＲCHANDEXPLOＲATIONINLABOＲATOＲY第42卷第1期Vol．42No．12023年1月Jan．2023DOI:10．19927/j．cnki．syyt．2023．01．044基于过程优化探索蛋白印迹技术的实验教学设计葛家祥a，尚佳琪a，刘江a，邓仕婧a，林牒a，杨琳b(天津中医药大学a．中西医结合学院;b．医学技术学院，天津301617)摘要:为了提高蛋白印迹实验的成功率及缩短蛋白印迹实验的周期，探索符合实验教学的过程方案，以蛋白印迹法实验操作为模板，以β-actin(48kDa)为目的蛋白，以GAPDH(36kDa)为标准蛋白，通过改变实验条件，计算β-actin与GAPDH显影后灰度值的比值，进行实验过程的优化。并对优化前后实验过程中在制胶、加样、电泳、转膜、封闭以及孵育等环节的成功率、离散度、所用时间等方面进行比较。结果表明，优化后的免疫印迹法能有效地提高成功率、降低离散度、缩短实验时间，β-actin与GAPDH显影后灰度值比值更接近1，达到实验教学的要求。关键词:蛋白印迹;过程优化;方法改进;实验教学中图分类号:G642;N33;N45文献标志码:A文章编号:1006－7167(2023)01－0223－06ExperimentalTeachingDesignofWesternBlottingBasedonProcessOptimizationGEJiaxianga，SHANGJiaqia，LIUJianga，DENGShijinga，LINDiea，YANGLinb(a．CollegeofIntegratedChineseandWesternMedicine;b．CollegeofMedicalTechnology，TianjinUniversityofTraditionalChineseMedicine，Tianjin301617，China)Abstract:InordertoimprovethesuccessrateofWesternblotexperimentandshortenthecycleofWesternblotexperiment，thispaperexplorestheprocessschemeinlinewithexperimentalteachingTheWesternblotisusedasthetemplate，β-actin(48kDa)asthetargetproteinandGAPDH(36kDa)asthestandardprotein．Theratioofβ-actintoGAPDHisusedtooptimizetheexperimentalprocess．Comparingbeforeandaftertheoptimizationoftheexperimentalprocess，wecanseethatthesuccessrateishigh，thedispersionislowandthetimeisshortenedaftertheoptimizationinthelinksofgluepreparation，sampleaddition，electrophoresis，membranetransfer，sealingandincubation．Weconcludethattheimprovedimmunoblottingmethodcaneffectivelyimprovethesuccessrate，shortentheexperimentaltimeandshortentheexperimentaltime．Theratioofβ-actintoGAPDHiscloserto1，whichmeetstherequirementsofexperimenta...
