基于胍类消毒剂与阳离子表面...抗冠状病毒的手用消毒剂研究_王立.pdf

2023年 第6期广东化工第50卷 总第488期1基于胍类消毒剂与阳离子表面活性剂基于胍类消毒剂与阳离子表面活性剂联合用于抗冠状病毒的手用消毒剂研究联合用于抗冠状病毒的手用消毒剂研究王立，张涛*，黄耀，伯远莉，刘玉兰(福安药业集团重庆礼邦药物开发有限公司，重庆401121)摘要目的：研究一种以葡萄糖酸氯已定和二癸基二氯化铵为有效成分的无醇手用消毒剂的相关抗菌、抗病毒效果。方法：采用悬液定量杀菌试验、悬液定量病毒灭活试验、急性经口毒性、多次完整皮肤刺激试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和理化测定方法，评估该消毒剂的性能。结果：本品37条件下保存90天后，主成分含量下降率均小于4%；原液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等细菌及人类冠状病毒的杀灭对数值均符合消毒技术规范(2002年版)的要求。本品无毒副作用，小鼠急性经口毒性LD505000 mg/kg。结论：本品对常见细菌杀菌效果较好，对人类冠状病毒有一定的杀灭效果，毒性低，稳定性好。是一种经济实用、市场前景良好的手用泡沫消毒剂。关键词葡萄糖酸氯已定；二癸基二氯化铵；杀菌效果；冠状病毒灭活效果；毒性中图分类号R166文献标识码B文章编号1007-1865(2023)06-0001-03Study on Hand Disinfectant Based on Guanidine Disinfectant Combined withCationic Surfactant for Anti-CoronavirusWang Li,Zhang Tao*,Huang Yao,Bo Yuanli,Liu Yulan(Fuanpharmaceutical Group Chongqing Lybon Pharm-Tech Co.,Ltd.,Chongqing 401121,China)Abstract:Objective:To study the Sterilization、Antiviral effect and other disinfection-related properties of an alcohol-free hand disinfectant with chlorhexidinegluconate and didecyldimethyl-ammonium chloride as active ingredients.Methods:The properties of the disinfectant was tested by using suspension quantitativesterilization test,suspension quantitative virus inactivation test,Acute oral toxicity,multiple complete skin irritation test,mouse bone marrow polychromatic erythrocytemicronucleus test and physicochemical assay.Results:when the disinfectant had stored for 90 days at 37,The decrease rates of main components less than 4%;Thelogarithmic killing values of the stock solution against Staphylococcus aureus,Escherichia coli and other bacteria and human coronavirus all meet the requirements ofthe“Disinfection Technical Specification”(2002 Edition).The original solution of the disinfectant has acute oral toxicity to mice with LD505000 mg/kg(bodyweight),which is practically non-toxic and side effects.Conclusion:This disinfectant has a excellent antibacterial effect on common bacteria,and has a certainkilling effect on HCoV,with low toxicity and good stability.It is an economical and practical hand foam disinfectant,with a wide range of applications andpromising market value.Keywords:chlorhexidine gluconate；didecyl dimethyl ammonium chloride；bactericidal effect；coronavirus inactivation effect；toxicity冠状病毒是一类会引起疾病的具有包膜的RNA病毒，患者最初表现为普通感冒，最后病程逐步发展到重症肺部感染，例如中东呼吸综合征(MERS)，严重急性呼吸综合征(SARS)，还有2019年底开始逐渐在全球蔓延开的新型冠状舆情(SARS-CoV-2)1-3。这个非常时期，如何有效做好裸露皮肤(尤其是手)的保护或消毒，阻断或降低接触传播风险、保护人民健康来说是一个很重要的问题。该研究将葡萄糖酸氯已定与阳离子表面活性剂二癸基二氯化铵联合使用，采用纯化水作为溶剂，配方中不添加刺激性较强的乙醇。配制的消毒剂样品通过细菌菌悬液定量杀菌试验，病毒悬液定量灭活试验、动物毒性试验、对手现场消毒试验来评价该消毒剂对细菌和病毒的杀灭作用和使用安全性，证明选定的消毒剂配方的有效性和安全性。试验标准完全按照消毒技术规范1方法方法1.1理化性能测定1.1.1含量测定该抗新冠病毒手用消毒剂的主成分为葡萄糖酸氯已定和二癸基二氯化铵。分别使用HPLC及滴定法测定该两种主成分的含量测定方法。葡萄糖酸氯已定的高效液相色谱分析条件参照 消毒技术规范(2002年版)中醋酸氯己定HPLC含量测定方法4。在该色谱条件下，取消毒剂溶液经0.45 m微孔滤膜过滤后进样分析，根据峰面积计算出葡萄糖酸氯已定的含量。二癸基二氯化铵检测方法参照季铵盐类消毒剂卫生标准中氯型 季铵盐类消毒剂含量测定方法5。1.1.2稳定性试验采用90天加速试验，分装3份消毒液原液，贴标签，密封，放置于37恒温箱中，90 d。于第0天和第90天分别测定葡萄糖酸氯已定和二癸基二甲基氯化铵的含量。样品重复测2次，计算下降百分数。1.2消毒效果定性试验1.2.1菌悬液制备选取三种试验菌，金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)、大肠杆菌(8099)和白色念珠菌(ATC C10231)，参照WS/T 683-2020消毒试验用微生物要求复苏菌种6，传代培养至第4代，量取2.0 mL菌悬液(含量为11085108CFU/mL)加入2.0 mL的3%牛血清白蛋白溶液，混合均匀后制成含有机干扰物的菌悬液，待用。1.2.2中和剂鉴定试验选用3.9%D/E中和肉汤作为中和剂，参照根据消毒技术规范(2002年版)中的中和剂鉴定试验进行6个组别的分组，分批试验重复3次4。1.2.3悬液定量杀菌试验参照消毒技术规范(2002年版)4，进行悬液定量杀菌试验。1.3对手消毒现场试验受试者数量：随机30人次，试验环境温度：2122，相对湿度58%68%RH。按消毒技术规范(2002年版)中消毒剂对手现场消毒试验的相关规定4，进行分组编号、取样、细菌培养、统计平均菌落数的对数值，最后进行结果判定。1.4人类冠状病毒悬液定量病毒灭活试验试验与研究试验与研究收稿日期2022-09-20基金项目重庆市科学技术局新冠肺炎疫情应急科技攻关专项项目(cstc2020jscx-fyzx0180)作者简介王立(1980-)，男，四川广元人，硕士研究生，高级工程师，主要研究方向为药物制剂及新材料消毒剂。*为通讯作者：张涛(1965-)，男，四川资阳人，硕士研究生，正高级工程师，主要研究方向为药物制剂及新材料消毒剂。广东化工2023年 第6期第50卷 总第488期1.4.1悬液的制备将106TCID50/0.1 mL107TCID50/0.1 mL的HCoV-229E病毒悬液与有机干扰物(3%牛血清蛋白)进行对倍稀释，制成试验用病毒悬液，放置于201的恒温箱中。1.4.2中和剂鉴定试验具体操作参照 新型冠状病毒消毒效果实验室评价标准7，进行六个组别的病毒中和剂鉴别试验，分批试验重复3次。1.4.3病毒悬液灭活试验按具体操作参照新型冠状病毒消毒效果实验室评价标准7，进行三个组别(试验组、阳性组、阴性组)的病毒悬液灭活试验。1.5毒性试验1.5.1急性经口毒性试验采用一次最大限度试验，只设5000 mg/kg(体重)一个剂量组。供试样品制备：称取样品5.0 g，加纯水至10.0 mL混匀后，待用。使用浓度组试验：取SPF级KM小鼠20只(体重18.022.0 g)，雌雄各半，按小鼠体重10 mL/kg进行经口灌胃后，连续观察14 d，记录小鼠生存状态。1.5.2多次完整皮肤刺激试验取3只普通级新西兰健康白色家兔(体重1.802.20 kg)，试验前，剪掉家兔背部两侧的毛。在去毛左侧皮肤上涂抹0.5 mL消毒剂，右侧皮肤不作处理，涂抹4 h后，用温水擦去多余的消毒剂。每天进行一次，连续14 d，观察每日双侧皮肤状态，记录现象。最后进行评分。1.5.3小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验根据急性经口毒性的试验结果。设置三个样品剂量组：5000 mg/kg、2000 mg/kg、500 mg/kg。试验时称取样品5.0 g、2.0 g、0.5 g，加纯净水至10.0 mL混合均匀。取50只SPF级KM小鼠(体重2530 g)，随机分为5组，每组雌雄各5只。试验组：采用经口灌胃给予各组动物相应3个剂量的消毒剂，每间隔24 h，给药一次，共给药2次，每次按小鼠体重10 mL/kg灌胃。阳性对照组：环磷酰胺(浓度4.0 mg/mL)，共给药2次，间隔24 h，每次按小鼠体重40 mg/kg灌胃。阴性对照：蒸馏水。后处理：末次给样品后6 h处死小鼠，取出骨髓液，滴在有小牛血液清液滴的载玻片上，混合均匀，自然晾干，放入甲醇液中固定5 min，Giemsa染色15 min。立即用1/15 mol/L磷酸盐缓冲液冲洗，晾干。对含有微核的嗜多染红细胞数进行计数，并且计算嗜多染红细胞与成熟红细胞的比例(PCE/NCE)。2结果结果2.1理化性能试验结果该消毒剂受试物的含量测定和加速试验结果见下表1。该消毒液存于37，90天后，活性成分二癸基二氯化铵和葡萄糖酸氯己定平均下降率分别为3.4%和1.4%，下降率10%，符合相关要求。表表1主成分含量稳定性结果主成分含量稳定性结果Tab.1Stability results of principal components content测试序列号储存前活性物含量(%，w/w)37保存90天后活性物含量/(%，w/w)平均下降率/%二癸基二氯化铵1-10.1750.16803.41-20.1709葡萄糖酸氯己定1-10.05170.051241.41-20.050692.2中和剂鉴定试验结果细菌的中和剂鉴定试验结果见下表2，第1组和第6组平均生长菌落数为无菌生长，第2组平均生长菌落数为1.4102CFU/mL，第3、4、5组平均生长菌落数的结果相近，三组间误差率为7.58%。试验证明样品与中和剂的产物对试验菌生长无明显影响且中和剂可有效中和本消毒剂，适用于杀菌效果鉴别试验。表表2细菌中和剂鉴定试验结果细菌中和剂鉴定试验结果Tab.2Results of