发酵豆粕对蛋雏鸡生长性能、...血液指标和盲肠微生物的影响_陈添晔.pdf

南京农业大学学报，（）：收稿日期：基金项目：江苏省农业科技自主创新项目（）；江苏省重点研发计划（现代农业）专项（）作者简介：陈添晔，硕士研究生。通信作者：郑卫江，副教授，主要从事肠道健康、饲料安全研究及氢分子生物学在畜禽生产中的应用研究，：。陈添晔，许晨远，敖蕊，等 发酵豆粕对蛋雏鸡生长性能、养分表观代谢率、血液指标和盲肠微生物的影响 南京农业大学学报，（）：，（）：发酵豆粕对蛋雏鸡生长性能、养分表观代谢率、血液指标和盲肠微生物的影响陈添晔，许晨远，敖蕊，朱崇淼，姚文，郑卫江（南京农业大学动物科技学院，江苏 南京；南京致润生物科技集团有限公司，江苏 南京）摘要：目目的的 本试验旨在研究发酵豆粕对蛋雏鸡生长性能、养分表观代谢率、血清生化指标、抗氧化性能和盲肠微生物的影响。方方法法 选取 只 日龄海兰褐蛋雏鸡，随机分成 组（每组 个重复，每个重复 只鸡），对照组饲喂基础饲粮，试验组分别饲喂含质量分数为、和 发酵豆粕的等能等蛋白替代基础饲粮中普通豆粕的试验饲粮，试验为期 。结结果果 不同比例发酵豆粕对蛋雏鸡各阶段生长性能均无显著影响（），对总能、干物质和钙的表观代谢率也无显著影响（），但 发酵豆粕组粗蛋白、粗灰分和总磷的表观代谢率显著高于对照组（）。和发酵豆粕组血清丙氨酸氨基转移酶活性显著低于 发酵豆粕组（），发酵豆粕组血清丙氨酸氨基转移酶活性显著低于对照组和 发酵豆粕组（）；发酵豆粕组血清总抗氧化能力和谷胱甘肽过氧化物酶活性显著高于对照组（）。与对照组相比，发酵豆粕组盲肠食糜中普氏菌属（）和 相对丰度显著升高（），螺杆菌属（）和副萨特氏菌属（）相对丰度显著降低（）。结结论论 发酵豆粕对部分养分表观代谢率和血清抗氧化指标具有积极作用，但随着发酵豆粕水平的增加，蛋雏鸡养分表观代谢率和血清抗氧化性能呈线性或二次曲线降低。此外，发酵豆粕提高了盲肠食糜有益菌（普氏菌属 和布劳特氏菌）的相对丰度，抑制了病原菌（螺杆菌属和副萨特氏菌属）的定殖。关键词：发酵豆粕；蛋雏鸡；养分表观代谢率；血清生化指标；抗氧化性能；盲肠微生物中图分类号：文献标志码：文章编号：（），（，；，）：，（，），（），（），（）（）（）南 京 农 业 大 学 学 报第 卷 （），（），（），（）（）：；豆粕是蛋鸡养殖中应用最为广泛的植物蛋白饲料原料，但由于含有多种抗营养因子（如胰蛋白酶抑制剂、脲酶、大豆抗原蛋白、植酸等），一定程度上限制其使用效率。近年来，国内豆粕产量与需求间的矛盾日益突出，而提高豆粕的利用效率和营养价值则是缓解这一供需矛盾的重要措施。陈庆达等对 日龄蛋鸡开展了为期 的研究，发现配合饲料中使用 的湿性发酵豆粕替代普通豆粕能提高蛋重、改善蛋品质，降低粪便中氮和磷的排放量。李彬等也发现用 湿基发酵豆粕等量替代普通豆粕饲喂 周龄罗曼粉壳蛋鸡 周，可提高合格蛋率并改善鸡蛋品质。陈国营等用枯草芽胞杆菌发酵豆粕（添加量 和，质量分数）饲喂 周龄海兰褐蛋鸡 后发现，发酵豆粕提高了蛋鸡的生产性能、改善蛋品质；此外，还发现上述发酵豆粕能增加日粮中有益菌数量，改变肠道微生物组成。因此，我们推断发酵豆粕可改善畜禽肠道菌群组成和结构，促进肠道健康并提高肠道对营养物质吸收利用效率。育雏阶段不仅是蛋鸡骨骼、肌肉、内脏及各系统生长发育的关键时期，亦决定其性成熟时间和后续生产性能。此外，蛋雏鸡消化系统和免疫机能发育尚不完善，对饲粮中的抗营养因子尤为敏感。因此，明确发酵豆粕在蛋雏鸡中的应用效果和具体剂量尤为重要。前期的研究大多关注于发酵豆粕对产蛋期蛋鸡的生产性能以及蛋品质等的影响，对发酵豆粕在蛋雏鸡中的应用仍缺乏相关研究。基于此，本试验旨在探讨不同比例发酵豆粕对蛋雏鸡生长性能、养分表观代谢率、血清生化指标、抗氧化性能和盲肠微生物的影响，以期来提高蛋雏鸡质量，为发酵豆粕在蛋雏鸡饲料中的应用和推广提供试验依据。材料与方法 试验材料表 豆粕发酵前、后营养物质的比较 项目 发酵前 发酵后 水分 粗蛋白质 粗灰分 粗纤维 酸溶蛋白 水溶性蛋白 ：发酵豆粕（生产批号：）由南京致润生物科技有限公司提供，是以豆粕为原料，使用乳酸菌、酿酒酵母、枯草芽胞杆菌等益生菌发酵，经干燥后制成。表 为豆粕发酵前、后营养物质的差异比较。与普通豆粕相比，发酵豆粕的水分含量显著降低（），粗蛋白、粗灰分、粗纤维、酸溶蛋白和水溶性蛋白含量均显著增加（）。试验设计选取 羽 日龄的健康海兰褐蛋雏鸡，按照体重一致原则随机分为 组，每组 个重复，每个重复 羽。参照海兰褐商品代蛋鸡饲养管理手册和中国饲料成分及营养价值表（年第 版）中的饲养标准配制粉状配合饲料。对照组饲喂玉米豆粕型基础饲粮，试验组分别用质量分数为、和 发酵豆粕等能等蛋白替代部分普通豆粕和麦麸的试验日粮。本饲粮组成及营养水平见表。预饲期 ，正式试验期 。饲养管理及样品采集蛋雏鸡采用 层阶梯式笼养方式，每天光照 ，人工饲喂 次。试验期间自由采食和饮水，鸡舍温度 ，湿度，按常规程序进行免疫。在饲养试验结束前 收集粪便用于养分表观代 第 期陈添晔，等：发酵豆粕对蛋雏鸡生长性能、养分表观代谢率、血液指标和盲肠微生物的影响谢率的测定。饲养试验结束后，于第 天每个重复随机选取 只鸡进行屠宰；收集血液，分离血清，用于测定血清生化指标和抗氧化指标；采集盲肠食糜，用于后续微生物学分析。表 基础和试验饲粮组成及营养水平（风干基础）（）组成 发酵豆粕添加水平 （）原料组成 玉米 豆粕 麦麸 发酵豆粕 大豆油 鱼粉 磷酸氢钙 石粉 食盐 氯化胆碱 赖氨酸盐酸盐 蛋氨酸 二氧化钛 预混料）营养组成 ）总能 ）代谢能 ）粗蛋白 粗灰分 粗纤维 粗脂肪 钙 总磷 有效磷 赖氨酸 蛋氨酸 蛋氨酸半胱氨酸 苏氨酸 色氨酸 注：）：对照组。）预混料为每千克日粮提供：维生素 ，维生素 ，维生素 ，维生素 ，维生素 ，维生素 ，维生素 ，烟酸 ，泛酸 ，铁 ，铜 ，锌 ，锰 ，硒 。）总能为实测值，其余均为计算值。）总能和代谢能单位为 。：）：）：，），）测定指标与方法 生长性能测定 根据日采食量、初重、第 和第 周体重，计算平均体重（，）、平均日增重（，）、平均日采食量（，）、料重比（，）。表观代谢率饲粮和粪便中总能（，）、干物质（，）、粗蛋白质（，）、粗灰分（，）、粗纤维（，）、粗脂肪（，）、钙（，）和总磷（，）含量测定参照文献。饲粮养分表观代谢率采用二氧化钛（）为外源指示剂测定，试验饲粮和粪便中二氧化钛（）含量采用分光光度法测定。养分表观代谢率计算公式：养分表观代谢率（饲料中 含量 粪便中 含量）（粪便中该养分含量 饲料中该养分含量）。血清生化指标和抗氧化性能 血清丙氨酸氨基转移酶（，）、天门冬氨酸氨基转移酶（，）、谷氨酰转移酶（，）活性，以及总蛋白（，）、白蛋白（，）、球蛋白（，）、总胆红素（，南 京 农 业 大 学 学 报第 卷）含量均使用试剂盒用全自动生化分析仪（，日立公司）测定。试剂盒均购自美康生物科技股份有限公司。血清总抗氧化能力（，）、过氧化氢酶（，）、总超氧化物歧化酶（，）、谷胱甘肽过氧化物酶（，）活性，以及丙二醛（，）含量均采用试剂盒进行测定，试剂盒购自南京建成生物科技有限公司。盲肠食糜微生物 的提取及 的测序 基于不同发酵豆粕组对蛋雏鸡养分表观代谢率的影响，我们选取对照组、发酵豆粕组各 个样本进行微生物学分析。无菌称取 左右的食糜样品于破碎管中，使用 提取食糜菌群，使用 分光光度计（，美国）测定 浓度。扩增和测序均由苏州帕诺米克生物医药科技有限公司完成。具体操作如下：以提取的 样本为模板，使用引物（）（）对 区域进行扩增。扩增产物使用 琼脂糖凝胶进行电泳检测，对合格的 产物进行纯化。使用 构建文库，经 和 定量分析，合格的使用 进行测序。测序得到的原始数据经过拼接、过滤得到后续分析所需的目标序列，序列通过（）进行可操作分类单元（，）聚类，再进行物种注释及丰度分析，以便后续进行 多样性和 多样性分析。利用联川生物云平台（：）对两组间门和属水平的微生物进行线性判别分析效应大小（，）分析，进行进一步差异显著性检验。以线性判别分析（，）为标准，筛选差异菌属。采用（）软件对样本中的微生物进行功能预测。数据统计与分析数据在 进行整理，表观代谢率、血清生化和抗氧化指标采用 进行单因素方差分析（），有显著差异时，采用 法进行多重比较。采用正交多项式对比法分析发酵豆粕水平的一次线性（）效应和二次曲线（）效应。数据均以平均值标准误（?）表示。采用独立样本 检验对对照组和 发酵豆粕组的多样性，门、属水平的相对丰度以及菌群功能预测进行分析，数据以平均值标准误（?）表示。使用 进行 相关性分析。结果与分析 发酵豆粕对蛋雏鸡生长性能和养分表观代谢率的影响试验结果表明，饲粮添加不同比例发酵豆粕对蛋雏鸡各阶段的平均体重、均无显著差异（）。由表 可知：不同水平发酵豆粕对蛋雏鸡总能、干物质和钙的表观代谢率均无影响（）。发酵豆粕组粗蛋白质、粗灰分和总磷的表观代谢率均显著高于其他 组（），且后 组间上述指标均没有显著差异（）；随着发酵豆粕含量添加，总磷的表观代谢率呈二次曲线降低（）。、和 发酵豆粕组粗脂肪表观代谢率显著低于对照组和 发酵豆粕组（），且粗脂肪的表观代谢率随着发酵豆粕含量增加呈线性降低（）。在粗纤维的表观代谢率上，发酵豆粕组显著低于其他 组，且 和 发酵豆粕组还显著低于对照组和 发酵豆粕组（），随着发酵豆粕添加水平的增加，粗纤维的表观代谢率呈二次和线性降低（）。发酵豆粕对蛋雏鸡血清生化指标的影响由表 可知：随着发酵豆粕添加水平的增加，血清 活性呈二次曲线增加（）；发酵豆粕组血清 活性显著低于对照组和 发酵豆粕组（）；发酵豆粕组血清 活性也显著高于、和 发酵豆粕组（）。饲粮添加不同比例发酵豆粕对血清、活性和、含量均无显著影响（）。发酵豆粕对蛋雏鸡血清抗氧化性能的影响由表 可知：发酵豆粕组 水平显著高于其他 组（）；而且这 组间差异不显著（）；发酵豆粕二次曲线降低了血清 水平（）。发酵豆粕组 活性显著高 第 期陈添晔，等：发酵豆粕对蛋雏鸡生长性能、养分表观代谢率、血液指标和盲肠微生物的影响于对照组（），与其他 组间没有显著差异（）。发酵豆粕组 含量显著高于对照组和 发酵豆粕组（），与其余 组间差异不显著（）；随着发酵豆粕含量的增加，血清 含量呈线性增加（）。此外，各组间 和 活性无显著差异（）。表 发酵豆粕（）对蛋雏鸡养分表观代谢率的影响 （）项目发酵豆粕添加量 值）总能（）干物质含量 粗蛋白质含量 粗灰分含量 粗纤维含量 粗脂肪含量 钙含量 总磷含量 注：）对、和 分别进行单因素方差分析（）、一次线性效应和二次曲线效应的正交多项式对比分析，、和 分别表示单因素方差分析、一次线性效应和二次曲线效应的 值；）同行数据肩标不同字母表示差异显著（）。下同。：），），（）表 发酵豆粕对蛋雏鸡血清生化指标的影响 项目发酵豆粕添加量 值 丙氨酸氨基转移酶活性（）（）天门冬氨酸氨基转移酶活性（）（）总蛋白含量（）（）白蛋白含量（）（）球蛋白含量（）（）总胆红素含量（）（）谷氨酰转移酶活性（）（）表 发酵豆粕对蛋雏鸡血清抗氧化功能的影响 项目发酵豆粕添加量 值 总抗氧化能力（）（）过氧化氢酶活性（）（）谷胱甘肽过氧化物酶活性（）（）总超氧化物歧化酶活性（）（）丙二醛含量（）（）发酵豆粕对蛋雏鸡盲肠微生物丰富度和多样性的影响图 是 发酵豆粕对蛋雏鸡盲肠微生物 多样性和 多样性的影响。由图 可知，对照组和发酵豆粕组间、指数均没有显著差异（）。主坐标分析（图）结果显示对照组和 发酵豆粕组各样本有分离的趋势（）。南 京 农 业 大 学 学 报第 卷图 发酵豆粕（）对蛋雏鸡盲肠微生物 多样性（）和 多样性（）的影响.（）（）（）图 发酵豆粕对蛋雏鸡盲肠食糜微生物组成和相对丰度的影响.基于 的韦恩图 ；门水平微生物组成柱形图（相对丰度）（）；属水平微生物组成柱形图（相对丰度）（）；属水平微生物相对丰度盒状图（相对丰度）（）发酵豆粕对蛋雏鸡盲肠微生物组成和相对丰度的影响由 图（图）可知，对照组和 发酵豆粕组共有 个，对照组特有 个，发酵