儿童重症肺炎支原体肺炎中T...9和IFN-Ⅰ的变化及意义_燕江雪.pdf

20232023 年3 月第 54 卷第 3 期年3 月第 54 卷第 3 期177研究论著研究论著新医学 新医学 儿童重症肺炎支原体肺炎中 TLR7、TLR9 和 IFN-的变化及意义燕江雪 丁霞 焦琼杰 黄莉 曹囡囡 董信芳 倪倩【摘要】目的研究儿童重症肺炎支原体肺炎（SMPP）中 Toll 样受体 7（TLR7）、TLR9 和 型 IFN 的变化及意义。方法纳入 80 例肺炎支原体肺炎（MPP）患儿，分为非重症 MPP 组（MPP 组）和重症 MPP 组（SMPP 组）；选择同期于门诊体检的 26 名健康儿童为健康对照组。收集各组儿童血清，并收集 SMPP 组影像学检查仅表现为单侧肺实变、肺不张、肺脓肿或肺组织坏死的 26 例患儿患侧和对侧肺泡灌洗液（BALF），采用 ELISA 检测血清及 BALF 中TLR7、TLR9、髓样分化因子 88（MyD88）、IFN-、IFN-的含量。结果与健康对照组相比，SMPP 组和 MPP 组血清中 TLR7、TLR9、MyD88、IFN-、IFN-水平均升高，且 SMPP 组血清中各因子的水平均高于 MPP 组（P 均 0.05）。患侧 BALF 中 TLR7、TLR9、MyD88、IFN-、IFN-的水平均高于对侧（P 均 0.01）。TLR7 和 MyD88 水平预测SMPP的受试者操作特征曲线的曲线下面积分别为0.709、0.723。结论过度诱导和生成的TLR7、TLR9、IFN-和 IFN-可能是儿童 SMPP 发生及局部肺组织严重损伤的致病因素。TLR7、MyD88 可以作为 SMPP 的预测指标以指导临床治疗。【关键词】儿童；重症肺炎支原体肺炎；Toll 样受体 7；Toll 样受体 9；干扰素-；干扰素-Changes and significance of TLR7/9 and IFN-levels in children with severe mycoplasma pneumoniae pneumonia Yan Jiangxue，Ding Xia，Jiao Qiongjie，Huang Li，Cao Nannan，Dong Xinfang，Ni Qian.Pediatric Respiratory Department，Lanzhou University Second Hospital，Lanzhou 730030，ChinaCorresponding author，Ni Qian，E-mail:【Abstract】Objective ToinvestigatethechangesandsignificanceofToll-likereceptor7（TLR7），TLR9andtypeIinterferon（IFN-）inchildrenwithseveremycoplasmapneumoniaepneumonia（SMPP）.Methods 80childrenwithmycoplasmapneumoniaepneumonia（MPP）weredividedintothenon-severeMPP（MPPgroup）andSMPPgroups（SMPPgroup）.26healthychildrenwhounderwentoutpatientphysicalexaminationwerechosenasthecontrolgroup.Serumsamplesineachgroupwerecollected.IntheSMPPgroup，bronchoalveolarlavagefluid（BALF）ontheaffectedandcontralateralsidesof26childrenwithunilaterallungconsolidation，atelectasis，lungabscessorlungtissuenecrosisonimagingexaminationwerecollected.ThelevelsofTLR7，TLR9，myeloiddifferentiationfactor88（MyD88），interferon-（IFN-）andIFN-intheserumandBALFsamplesweredeterminedbyenzyme-linkedimmunosorbentassay（ELISA）.Results TheserumlevelsofTLR7，TLR9，MyD88，IFN-andIFN-intheSMPPandMPPgroupsweresignificantlyhigherthanthoseinthecontrolgroup，andthelevelsofallcytokinesintheSMPPgroupweresignificantlyhighercomparedwiththoseintheMPPgroup（allP 0.05）.ThelevelsofTLR7，TLR9，MyD88，IFN-andIFN-intheBALFontheaffectedsideweresignificantlyhigherthanthoseonthecontralateralside（allP 0.05），见表1。本研究获得医院伦理委员会批准（批件号：2020A-207），征得入组儿童监护人知情并签署知情同意书。二、诊断标准参考 儿童肺炎支原体肺炎诊治专家共识（2015 年版）及 诸福棠实用儿科学（2002 年）中的 MPP 诊断标准：具有肺炎的临床表现或影像学表现；确定肺炎支原体（MP）感染的病原学证据；青霉素、头孢类抗菌药物治疗无效。SMPP 诊断标准：除符合 MPP 的诊断标准外需满足以下任一标准：一般状况差，有拒食或脱水征；意识障碍；肺部浸润呈现多肺叶的受累或2/3的一侧肺；呼吸频率显著增快、发绀、呼吸困难甚至呼吸衰竭；胸腔积液、肺不张、肺脓肿、坏死性肺炎、肺栓塞等肺内并发症；脉搏血氧饱和度92%；心率明显增快，甚至心力衰竭；脓毒血症，甚至感染性休克。三、纳入及排除标准MPP 组及 SMPP 组患儿的纳入标准：014岁，符合 MPP 及 SMPP 诊断标准；病程在 14 d以内；血培养和（或）痰培养阴性、无明确病毒感染证据者；入组前未使用过糖皮质激素和 IFN治疗。健康对照组的纳入标准：014 岁、入组前1 个月内无感染史的健康儿童。排除标准：既往有支气管哮喘和慢性肺病等病史的患儿；既往有血液系统疾病、严重先天性心脏病、严重肝肾功能不全、先天性支气管肺发育不良、遗传代谢性疾病、免疫缺陷疾病等具有严重基础疾病的患儿。收集 BALF 的 SMPP 患儿纳入标准：符合上述SMPP 纳入及排除标准，但是肺部 CT 仅存在单侧肺部影像学改变，如单侧肺不张、肺实变、肺脓肿、肺组织坏死等。四、研究方法1.标本采集1.标本采集患儿入院后次日清晨采集空腹静脉血 2 mL，对照组健康儿童清晨采集空腹静脉血2 mL，在4以 3000 转/分离心 10 min 后，分离血清于-80冰箱保存备检。2.BALF 采集2.BALF 采集按照文献 88技术要求，根据先对侧后患侧的原则行支气管肺泡灌洗，并收集BALF各5 mL；对侧选择右肺中叶或左上叶舌段，患侧选择病变段，总回收率30%，红细胞 20%，且无大气道分泌表 1 3 组的一般资料比较组 别例数性别/（男/女，例）年龄/岁MPP 组4524/215.313.04SMPP 组3518/175.942.40健康对照组2617/96.732.782/F 值1.3492.166P 值0.5090.12020232023 年3 月第 54 卷第 3 期年3 月第 54 卷第 3 期179新医学 新医学 物混入为合格标本；将新鲜 BALF 移取至 15 mL 锥形离心管中，在相同条件下离心后，分离上清液置于-80冰箱保存备检。3.标本检测3.标本检测采 用 ELISA 检 测 血 清 及 BALF 中 TLR7、TLR9、MyD88、IFN-、IFN-的含量，试剂盒购自上海酶联生物科技有限公司，具体操作步骤严格按试剂盒说明书进行，检测仪器为赛默飞世尔Mulltiskan FC 型酶标仪。五、统计学处理使用 SPSS 25.0 进行数据分析。计数资料用频数或百分比（%）表示，组间比较采用2检验。符合正态分布的计量资料以 表示。血清样本数据若方差齐，通过单因素方差分析进行多组间比较，组间两两比较采用 Tukey-Kramer 检验；若方差不齐，通过 Brown-Forsythe 检验进行多组间比较，组间两两比较采用 Tamhane s T2 检验。同一SMPP 患儿患侧及对侧 BALF 的样本数据比较采用配对 t 检验。采用 Pearson 相关分析检验血清中各因子之间的相关性。绘制受试者操作特征（ROC）曲线得到曲线下面积（AUC），分析血清中各因子水平在 SMPP 预测中的价值。P 0.05 为差异有统计学意义。结 果一、3 组血清 TLR7、TLR9、MyD88、IFN-、IFN-水平的比较与健康对照组相比，SMPP 组和 MPP 组血清TLR7、TLR9、MyD88、IFN-、IFN-的水平均有所升高（P 均 0.05），且 SMPP 组的上述指标水平均高于 MPP 组（P 均 0.05）。见表 2。二、3 组血清 TLR7、TLR9、MyD88、IFN-和 IFN-的相关性分析血清TLR7或TLR9与MyD88、IFN-、IFN-均呈正相关，MyD88与IFN-、IFN-也呈正相关（P 均 0.05）。见表 3。三、SMPP 组患儿患侧、对侧 BALF 中的各因子水平比较患侧BALF中的TLR7、TLR9、MyD88、IFN-、IFN-水平均高于对侧（P 均 0.700，对SMPP的辅助诊断具有一定表 2 3 组血清 TLR7、TLR9、MyD88、IFN-、IFN-水平的比较（xs）项 目MPP 组（45 例）SMPP 组（35 例）健康对照组（26 例）F 值P 值TLR7/（g/L）6.581.34a 7.501.20ab 5.810.9514.9130.001TLR9/（g/L）15.821.76a16.841.58ab14.981.0112.6380.001MyD88/（g/L）13.772.57a15.502.37ab12.650.7116.1000.001IFN-/（ng/L）27.072.24a28.561.99ab25.832.2514.0840.001IFN-/（ng/L）534.5267.74a588.8479.70ab483.9452.6817.6030.001注：与健康对照组比较，aP 0.05；与 MPP 组比较，bP 0.05。表 3 3 组血清 TLR7、TLR9、MyD88、IFN-、IFN-的相关性分析项 目TLR7TLR9MyD88MyD88IFN-IFN-MyD88IFN-IFN-IFN-IFN-r 值0.5940.4260.6700.2680.4930.3980.3320.661P 值0.0010.0010.0010.0060.0010.0010.0010.001表 4 SMPP 组 26 例患儿的患侧、对侧 BALF 中各因子水平比较项 目对侧患侧t 值P 值TLR7/（g/L）6.950.60 7.230.563.5810.001TLR9/（g/L）18.091.0918.861.394.5400.001MyD88/（g/L）14.491.2215.071.193.6470.001IFN-/（ng/L）26.222.1327.312.116.8850.001 IFN-/（ng/L）515.4648.14558.3058.155.846 0.700，对 SMPP 具有一定的预测价值，其中以MyD88 为诊断指标时的 AUC 最大、灵敏度较高。IFN-和IFN-的AUC分别为0.666、0.694，十分接近0.700，笔者推测在后续加大研究的样本量后，I