大黄素通过调控Wnt_β-...轻缺血性脑卒中大鼠BCFB_不艾吉尔·艾力.pdf

脑与神经疾病杂志年第卷第期，：（），（）：，：，（）：，（）：，：，：张其联合在烦脑动静脉畸形诊断中的价值研究中国医疗器械信息，（）：，（）：，：，（）：，：，（）：（收稿日期：）论著大黄素通过调控信号通路减轻缺血性脑卒中大鼠不艾吉尔？艾力米尔古丽？艾麦特卡热也木？卡德尔阿布都扎依尔？买买提徐奕鹏【摘要】目的本研究旨在探讨大黄素对缺血性脑卒中（）后血脑脊液屏障（）的影响及其潜在机制。方法大鼠随机分为：假手术组、模型组、大黄素低剂量组（？）、大黄素高剂量组（？）以及阳性对照组（尼莫地平？）。构建大鼠大脑中动脉闭塞再灌注（）模型，通过腹腔注射不同药物进行治疗。对各组大鼠进行神经功能缺损评分；染色检测脑梗死体积；测定脑组织含水量；伊文思蓝（）染色检测通雜；明胶酶谱法评估的活性；）检测基质金属蛋白酶（？）、闭合蛋白（出）和 咬合蛋白（；出）和磷酸化糖原合成酶激酶（）、连环素（）蛋白的表达。结果与假手术组相比，模型组大鼠神经功能缺损评分明显增加，脑梗死体积和脑组织含水量均明显增加，脑组织含量明显增加，脑组织中、蛋白表达明显降低，酶活性和蛋白表达明显升高（）；与模型组相比，大黄素低、高剂量组和阳性对照组大鼠神经功能缺损评分明显降低，脑梗死体积和脑组织含水量均明显降低，脑组织含量明显降低，脑组织中、蛋白表达明显升高，酶活性和蛋白表达明显降低（）。结论大黄素可通过激活通路减轻 损伤，对具有神经保护作用。【关键词】大黄素；缺血性脑卒中；血脑脊液屏障；（信号通路；大鼠中图分类号：文献标识码：文章编号：（）基金项目：新疆 维吾尔族自治区自然科学基金（）作者单位：乌鲁木齐，新疆维吾尔自治区人民医院康复科（不 艾 吉尔？艾力、徐奕鹏），神经内科（米尔古丽？艾麦特），医务部（卡热 也木卡德尔），院前急救 站（阿布都扎依尔？买买提）通信作者：徐奕鹏，：脑与神经疾病杂志年第卷第期？，？，：，：（），（？），（？），（）（）（）（）（），（），（），（），；（；缺血性脑卒中（，）是由于大脑血液供应不足引起的流行性血管疾病。迄今为止，重组组织型纤溶酶原激活剂（，）是改善急性预后的最有效药物。然而，由于治疗时间窗相对狭窄，且存在严重的出血并发症风险，限制了其临床应用。此外，溶栓治疗恢复缺血区域的血流会引起脑损伤，包括增加血脑脊液屏障（，）通透性，脑水肿和出血性转化。用于限制脑实质和血流之间 的自由交换，从而维持脑内稳态。通过紧密连接（，）等结构形成了完整的生理性屏障，可以有效保护大脑免受外界刺激。已有研究表明脑缺血和再灌注可显著降低蛋白的表达，导致神经损伤和认知 障碍。因此，减轻 损伤的药物可能对具有神经保护作用。大黄素是从大黄的根和根茎中分离得到的一种天然蒽酿类化合物，具有抗肿瘤、抗菌和抗炎活性并且有研究发现大黄素在脑缺血再灌注神经损伤中起着重要作用。因此，为了阐 明大黄素对脑缺血再灌注损伤的保护作用机制，本研究将通过构建大脑中动脉闭塞再灌注（，）大鼠模型，观察大黄素对大鼠模型中功能障碍的影响及其相关分子机制。材料与方法试剂和仪器大黄素、尼莫地平购自上海和黄药业有限公司；伊文思蓝染色液购自北京索莱宝科技有限公司；，三苯基氯化四氮唑（）染色试剂购自北京百奥思科生物医学技术有限公司；增强化学发光检测试剂盒购自上海玉博生物科技有限公司；基质金属蛋白酶（，）、闭合蛋白（）、咬合蛋白（）、糖原合成 酶激酶（，卩）、憐酸化 糖原合成酶激酶（，）、（连脑与神经疾病杂志年第卷第期注：与假手术组比较，卞；与模型组比较，图大黄素对大鼠神经功能障碍的影响结果显示，与假手术组相比，模型组大鼠含水量（干重湿重）。？伊文思蓝（，）染色应用染 色检测 通透性。再灌注后，麻醉大鼠，大鼠静脉注射染色液。每只大鼠灌注生理盐水冲洗血液。然后处死大鼠，在冰上解剖并分离脑组织，并在三氯乙酸溶液中匀浆。离心后，收集上清液然，使用酶标仪测量在处的光吸收值。明胶酶谱分析使用含蛋白酶抑制剂的裂解缓冲液对脑组织进行勻浆，然后离心。根据说明书使用明胶酶谱试剂盒评估的活性。使用软件进行光吸收值分析来定量活性。检测将各组大鼠大脑皮质组织用含有蛋白酶和磷酸酶抑 制 剂混合物的缓冲液在冰上勻浆提取蛋白质，用法检测蛋白质浓度。使用将蛋白质样品分离，进一步转移到聚偏二氟乙烯（）膜上。随后，脱脂牛奶封闭。然后，将膜与一抗在下孵育过夜，洗涤次后，将膜与偶联的二抗室温孵育。然后用增强化学发光检测试剂盒显色，并使用系统对蛋白条带进行可视化。（作为内部对照。？统计学方法所有数据均以表示。多组间的比较采用单因素方差（）使用软件分析数据。以为差异有统计学意义。结果大黄素对大鼠神经功能障碍的影响（图）环素（）抗体均购自美国 公司；明胶酶谱试剂盒购自上海信帆生物科技有限公司。多功能酶标仪购自美谷分子仪器（上海）有限公司；化学发光成像系统购自美国公司。？实验动物及分组级雄性大鼠（体质量，由新疆医科大学提供）饲养在昼夜循环的标准环境条件下，温度为。所有实验动物均可自由获得和食物。将大鼠随机分为组：假手术组、模型组、大黄素低剂量组（？）、大黄素高剂量组（？）、阳性对照组（尼莫地平？）。大黄素低、高剂量组和阳性对照组分别在造模前腹腔注射药物，假手术组和模型组腹腔注射等量的生理盐水。构建大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型大鼠腹腔注射戊巴比妥钠（）麻醉，将大鼠平卧位置于手术台上，对颈部进行备皮和碘伏消毒。通过颈部正中切口进而分离颈总动脉和颈外动脉，并对其进行并结扎。将单丝尼龙缝合线插入颈内动脉阻断大脑中动脉诱导缺血，然后取出尼龙单丝允许血液再灌注。假手术组大鼠除插人线栓，其它操作同上。术后，大鼠可自由获得食物和水，使用红外灯照射维持大鼠体温在丈。神经功能缺损评分对再灌注后的大鼠进行神经功能缺损评分。依据评分方法，使用分的量表：（无神经功能缺损），（尾巴提起时左侧前肢屈曲），（行走时向左侧转圈），（行走时向左侧倾倒），（不能自发行走，失去意识水平）。评分越髙，损伤程度越严重。染色使用染色检测脑梗死体积。简而言之，再灌注后，解剖大鼠脑组织置于预冷的生理盐水中，随后制成的冠状切片。将脑切片放入溶液中，于下孵育，然后转移到多聚甲醛中过夜，之后拍照分析。未染色的区域为梗死的脑组织区域。使用软件定量分析梗死体积。根据以下公式计算梗死体积：梗死体积（）（脑梗死面积全脑面积）。？脑组织含水量测定大鼠麻醉后，处死大鼠，立即解剖脑组织，进行称湿重，置于丈烘箱中烘干过夜。随后立即称脑组织干重。根据以下公式测定脑组织含水量：脑脑与神经疾病杂志年第卷第期冒：检测蛋表达：明胶 酶谱 分析活性：活性量化统计注：与假手术组比较，；与模型组比较，图大黄素对大鼠活性和蛋白表达的影响：表达量化统计注：与假手术组比较，；与模型组比较，图大黄素对大鼠紧密连接蛋白表达的影响结果显示，与假手术组相比，模型组大鼠脑组织中和 蛋白表达明显降低，差异有统计学意义（尸）；与模型组相比，大黄素低、髙剂量组和阳性对照组大鼠脑组织中和 蛋白表达均明显升高，差异有统计学意义（）。大黄素对大鼠酶活性和蛋白表达的影响（图）：枪测脑组织含水量注：与假手术组比较，；与模型组比较，图大黄素对大鼠脑梗死体积和脑组织含水量的影响结果显示，与假手术组相比，模型组大鼠脑梗死体积和脑组织含水量均明显增加，差异有统计学意义（）；与模型组相比，大黄素低、高剂量组和阳性对照组大鼠脑梗死体积和脑组织含水量均明显降低，差异有统计学意义（）。大黄素对大鼠 通透性的影响（图）大黄素假手术组模型组低剂童组髙剂量组限性对照组？：染色检测血脑屏 障通透性：含量量化统注：与假手术组比较，；与模型组比较，图大黄素对大鼠通透性的影响结果显示，与假手术组相比，模型组大鼠脑组织含量明显增加，差异有统计学意义（尸）；与模型组相比，大黄素低、高剂量组和阳性对照组大鼠脑组织中含量均明显降低，差异有统计学意义）。大黄素对大鼠紧密连接蛋白、表达的影响（图）神经功能 障碍评分明显增 加，差异 有统计学 意义（）；与模型组相比，大黄素低、高剂量组和阳性对照组大鼠神经功 能 障碍评分均明显降低，差异有统计学意义（触）。大黄素对大鼠脑梗死和脑水肿的影响（图）假纖讓低臓高細？圓：染色检测脑梗死体积：脑梗死体积量化统十 检测和蛋白表达：表达量化统计脑与神经疾病杂志年第卷第期结果显示，与假手术组相比，模型组大鼠脑组织中酶活性以及蛋白表达明显升高，差异有统计学意义（）；与模型组相比，大黄素低、高剂量组和阳性对照组大鼠脑组织中酶活性以及蛋白表达明显降低，差异有统计学意义）。大黄素对大鼠信号通路蛋白的影响（图）（：检测、蛋白表达：表达量化统计：表达量化统 计注：与假手术组比较，；与模型组比较，图大黄素对大鼠信号通路蛋白的影响结果显示，与假手术组相比，模型组大鼠脑组织中（、蛋白水平均明显降低，差异有统计学意义（）；与模型组相比，大黄素低、高剂量组和阳性对照组大鼠脑组织中（、（蛋白水平均明显升高，差异有统计学意义（）。讨论是由于血液供应异常，如缺血或出血而导致的长期神经损伤，其中以居多。然而，的发病机制仍在很大程度上是未知的。近年来的研究表明，损伤 是的重要病理过程是大脑稳态的关键调节因子，也是神经保护的主要靶点。主要由周细胞、神经元末端、星形胶质细胞足突和微血管内皮细胞组成，任何一种成分破坏都可能 导致损伤和功能障碍。缺血性脑损伤后，由于大脑微血管内皮细胞通透性升高，的完整性受损，大量有害物质和液体进人脑实质，最终导致脑水肿和神经功能缺损。是一种常见的诱导动物模型，用于模拟大鼠脑缺血再灌注损伤。本研究通过构建大鼠模型研究大黄素的作用，结果显示大黄素对大鼠神经功能评分、脑梗死、脑水肿以及 损伤均具有一定的改善作用，支持了该药物的神经保护作用，与之前的研究一致。越来越多的研究表明，模型中 的紧密连接蛋白（，）发生了改变。此外，是多种蛋白质成分的动态复合物。作为蛋白的重要成员，和在的完整性和渗透性中起着至关重要的作用。是第一个被发现形成内皮细胞的完整膜蛋白。通过与相邻内皮细胞的分子结合，在细胞外环形成二聚体，从而形成的骨架。当基因被敲除时，小分子会通过渗漏并导致死亡。在本研究中，结果表明大黄素增加了大鼠大脑皮质中和的表达。基质金属蛋白酶是一组锌离子依赖性内肽酶，其在低氧条件下被激活并特异性降解细胞外基质（，）。另外，是唯一被批准用于急性的药物，也可能激活并破坏的完整性。目前，与脑缺血后 损伤的关系最为密切。已有研究表明沉默基因可上调紧密连接蛋白 的表达，降低的通透性。本研究通过明胶酶谱法测定和 实验结果显示大黄素可以显著降低酶活性和蛋白的表达。以上结果表明大黄素可通过增加表达和降低水平来改善 的完整性。最近的研究发现，通路在功 能的保护作用中发挥关键作用。蛋白是一种能改善后神经功能的糖脂蛋白。研究表明，信号通路被阻断后，大鼠神经祖细胞的增殖和分化受到抑制。是通路的关键调节因子，在控制靶基因表达中起着中枢调节因子的作用。在信号缺失的情况下，被（磷酸化并在细胞质中降解。研究表明，信号通路的功能障碍导致 损伤，与的破坏有关。本研究证实了损伤导致磷酸化和水平表达降低。大黄素显著增强磷酸化和（水平。脑与神经疾病杂志年第卷第期综上所述，大黄素可通过调控通路改善 损伤，从而减轻脑缺血再灌注损伤，表明大黄素具有一定的神经保护作用。该研究结果齡大黄素在治疗中可能輔良好的临床潜力。利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突作者贡献声明不艾吉尔？艾力、米尔古丽？艾麦特、卡热也木？卡德尔、阿布都扎依尔？买买提：资料收集、论文撰写；徐奕鹏：论文审阅和指导参考文献，：，：，（）：，（）：，（）：，（），（）：，：，：，（）：，（）：，：，：，：，（）：，（）：，（）：，（）：，：，（），（）：李蕊 蕊，林园凯，张格，等米诺环素对缺血性脑卒中血脑屏障重塑的影响及其机制广东医学，（），：，：，（）：，（）：，（）：，脑与神经疾病杂志年第卷第期，：，：，：（收稿日期：）？论著阿替普酶静脉溶栓联合丁苯酞对急性脑梗死患者出血性转化的影响及神经保护作用机制吕洲朱海生刘青蕊【摘要】目的探讨阿替普酶静脉溶栓联合丁苯酞对急性脑梗死（）患者出血