枸杞多糖含量测定的方法比较_余永英.pdf

广东化工2023年 第6期第50卷 总第488期枸杞多糖含量测定的方法比较枸杞多糖含量测定的方法比较余永英1，刘建欣1，张伟1，王平1，高小林1，杨元元1，俱雪妮1，张丹2*(1汉中天然谷生物科技股份有限公司，陕西 汉中723001；2陕西理工大学 化学与环境科学学院，陕西 汉中723001)摘要目的：优化枸杞多糖含量测定的最佳方法，为枸杞提取物多糖含量测定方法标准化提供依据。本文采用三种测定方法分别测定枸杞提取物中多糖的含量并比较不同方法的差异。方法：参照中华药典采用紫外可见分光光度法测定、苯酚-硫酸分光光度法和以葡聚糖为参照的苯酚-硫酸分光光度法。结果：药典法测得的多糖含量为2.93%;苯酚-硫酸分光光度法测得的多糖含量为2.63%;以葡聚糖为参照的苯酚-硫酸分光光度法测得的多糖含量均值为1.29%。3种不同测定方法测定枸杞的多糖含量存在较大的差异。结论：苯酚硫酸法测得的结果为药典法的0.9倍，是葡聚糖分光光度法的2倍。通过比较3种方法的差异性，可根据实际样品及实际需求，选择最佳检测方法。关键词枸杞子；多糖；含量测定；分光光度法中图分类号TQ文献标识码A文章编号1007-1865(2023)06-0170-04Comparison of Methods for Determination of Lycium Barbarum PolysaccharideYuYongying1,Liu Jianxin1,Zhang Wei1,Wang Ping1,Gao Xiaolin1,YangYuanyuan1,Ju Xueni1,Zhang Dan2*(1.Hanzhong Tianrangu Biological Technology Group Limited Company,Hanzhong 723001；2.Shaanxi Key Laboratory of Catalysis,College of Chemistry and Environment Science,Shaanxi University of Technology,Hanzhong 723001,China)Abstract:Objective:The best method for determination of polysaccharide content in Lycium barbarum will be optimized to provide a basis for thestandardization of determination method for polysaccharide content in Lycium barbarum extract.In this paper,three determination methods were used to determinethe content of polysaccharides in Lycium barbarum extract and compare the differences.Methods:According to“Chinese Pharmacopoeia”,UV-visiblespectrophotometry,phenol-sulfuric acid spectrophotometry and phenol-sulfuric acid spectrophotometry with dextran as reference were used.Results:Thepolysaccharide content measured by pharmacopoeia method was 2.93%;the polysaccharide content measured by phenol-sulfuric acid spectrophotometry was 2.63%;the average polysaccharide content measured by phenol-sulfuric acid spectrophotometry with dextran as reference was 1.29%.There were great differences in thedetermination of polysaccharide content of Lycium barbarum by three different determination methods.Conclusion:The results obtained by the phenol-sulfuric acidmethod is 0.9 times that of the pharmacopoeia method and twice that of the dextran spectrophotometric method.By comparing the differences of the three methods,the best detection method can be selected according to the actual samples and actual needs.Keywords:Lycium；polysaccharides；content determination；Spectrophotometric methods枸杞子为茄科植物宁夏枸杞(Lycium barbarum L.)，呈椭圆形或圆柱形，两端略尖，表面呈暗红色或鲜红色，无光泽，有不规则的皱纹，质地较柔软，内含多数种子，味甘而酸，主要分布于我国西北部地区1。据本草纲目记载，枸杞主要具有滋补肝肾，益精明目的功效2，现代医学用于治疗腰膝酸痛、眩晕耳鸣、内热消渴等症状3。经文献查阅，枸杞包括多糖、类胡萝卜素、生物碱等多种有效成分4-6，其中枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharides LBP)是主要的有效成分。研究表明，枸杞多糖具有多种药理作用，例如增强免疫功能、降血脂、抗衰老、抗肿瘤、降血糖、保护肝脏等7。枸杞多糖的药理及临床研究表明它在医药方面具有特殊的实用价值，但枸杞多糖等提取物的方法并未载入中国药典，且目前尚未有枸杞多糖提取物含量测定方法的国家标准。市场上的枸杞提取物相关产品的多糖含量测定，主要是各企业根据中国药典或保健食品功效成分检测方法或其他需求制定的企业标准8。因此，枸杞提取物多糖含量测定的不同方法的差异性研究这对于食品领域、企业标准制定等很有必要。本文采用中国药典多糖含量测定方法、苯酚-硫酸分光光度测定法、以葡聚糖为对照的分光光度测定法分别对枸杞提取物多糖含量进行检测，通过比较不同方法的差异性，以得到最佳检测方法，为枸杞提取物多糖含量测定方法标准化提供依据。1仪器与试剂仪器与试剂1.1仪器水浴锅、离心机、分光光度计、电子天平。1.2试剂枸杞(宁夏枸杞)；葡聚糖标准品(31392-10G，USA)；浓硫酸(98%，AR)；苯酚(分析纯)；氢氧化钠(分析纯)；硫酸铜(分析纯)；乙醇(分析纯)。2方法与结果方法与结果2.1枸杞提取物的制备采用浸提法9-10。取枸杞原料50 g，随后加入10倍量纯水进行煎煮，时长1.5 h，过滤，滤渣继续加8倍量纯水煎煮1.5 h，过滤，弃去滤渣。合并两次滤液，浓缩至稠膏，真空干燥，即得枸杞提取物。分别提取3组，批号为GQ21041001(提取物重量：35.76 g；收率：71.15%)、GQ21041002(提取物重量：35.1 g；收率：70.2%)、GQ21041003(提取物重量：35.4 g；收率：69.96%)。2.2药典法测定枸杞提取物中多糖含量112.2.1对照品溶液的制备准确称量无水葡萄糖对照品100 mg，置于1000 mL容量瓶中，加适量蒸馏水溶解，稀释至刻度，摇匀。葡萄糖浓度为0.1 mg/mL。2.2.2标准曲线的绘制表表1标准曲线标准曲线Tab.1Standard curve序号葡聚糖体积V/mL葡聚糖重量m/mg吸光度a标准曲线10.20.0202720.104A=7.4684m-0.0408r2=0.999420.40.0405440.27130.60.0608160.41540.80.0810880.56151.00.101360.716备注：葡萄糖对照品溶液浓度：0.10136 mg/m收稿日期2022-09-10基金项目陕西省科学技术厅青年基金(2021JQ-756)；陕西省教育厅一般项目(22JK0323)作者简介余永英(1985-)，女，陕西汉中人，学士，中级工程师，主要研究方向为中草药活性成分及生物活性研究。*为通讯作者。2023年 第6期广东化工第50卷 总第488期171图图1药典法测定葡萄糖绘制的标准曲线药典法测定葡萄糖绘制的标准曲线Fig.1Standard curve for the determination ofglucose by pharmacopoeia使用移液枪准确量取上述对照品溶液200 L、400 L、600 L、800 L、1000 L，分别置于具塞试管中，加水至2.0 mL，继续分别向上述溶液中加入1.0 mL 5%苯酚溶液，摇匀，迅速加入硫酸5 mL，摇匀，放置10 min，置于40水浴中保温15 min，取出，迅速冷却至室温，以相应的试剂作为空白对照，根据紫外-可见分光光度法(通则0401)，在490 nm的波长处测定吸光度，以吸光度值为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标，绘制标准曲线(图1)。2.2.3供试品溶液的制备取枸杞提取物500 mg，置250 mL容量瓶中，加适量水溶解，置于40水浴中保温2.0 h，待冷却后稀释至刻度，摇匀过滤，弃去初滤液，收集余下滤液即为供试品溶液。2.2.4测定方法准确量取上述供试品溶液1.0 mL，置于具塞试管中，加蒸馏水1.0 mL，按照标准曲线及测量方法，测定溶液的吸光度值。根据标准曲线，计算出供试品溶液中葡萄糖的含量(mg)。检测结果见表2。计算公式：m=V 100%M多糖含量其中：m标曲上读的葡萄糖重量M称样量表表2枸杞提取物多糖含量检测结果枸杞提取物多糖含量检测结果Tab.2Results of polysaccharide content in extracts of Lycium barbarum批号VAM/mgM/mg含量/%平均含量/%21041001-A1000.4560.06652027221.693.002.9821041001-B1000.4330.06344063214.672.9621041002-A1000.4010.05915591203.472.912.8821041002-B1000.3740.05554068195.612.8421041003-A1000.4250.06236945214.312.912.9221041003-B1000.4180.06143217208.642.94从表2结果可知，药典法测得枸杞提取物多糖平均含量为(2.98%+2.88%+2.92%)/3=2.93%。2.3苯酚-硫酸分光光度法测定枸杞提取物中多糖含量122.3.1对照品溶液的制备准确量取无水葡萄糖对照品50 mg，置于500 mL量瓶中，加适量蒸馏水进行溶解，稀释至刻度，摇匀，此时葡萄糖浓度为0.1 mg/mL。2.3.2标准曲线的绘制使用移液枪精密量取上述对照品溶液200 L、400 L、600 L、800 L、1000 L，分别置于具塞试管中，稀释至2.0 mL，继续分别加入1.0 mL 5%苯酚溶液，摇匀，迅速加入浓硫酸10 mL，摇匀，置沸水浴中保温2 min，取出，冷却至室温，以相应的试剂作为空白对照，根据紫外-可见分光光度法(通则0401)，在485 nm的波长处测定吸光度，以吸光度值为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标，绘制标准曲线(图2)。表表3葡萄糖标准曲线葡萄糖标准