九香虫为蝽科昆虫九香虫Aspongopuschi-nensisDallas的干燥体[1]，其药用历史悠久，是一种药用价值较高、营养价值较高的昆虫类中草药和保健食品[2]，具有抗菌[3]、抗癌[4]、镇痛[5]、抗氧化[6]及改善生殖器官[7]的作用。已报道的九香虫化合物包括脂肪酸、蛋白质、氨基酸、臭气类、核苷类、多巴胺类化合物及其他营养成分。九香虫体内脂肪酸类化合物最多，包括油酸、亚油酸、软酸、软亚油酸、硬亚油酸等[8]。由此可见，九香虫脂肪油主要是不饱和脂肪酸，占70%以上。另外九香虫还富含维生素、微量元素、磷脂、蛋白质及氨基酸，维生素中含有的维生素A及维生素C的含量较高。市售九香虫常见的混伪品是小皱蝽，小皱蝽除略小于九香虫外，其他形态特征与其相似，小皱蝽常冒充小的九香虫进行销售，若两者进行掺杂，极难鉴别。黄秋强等[9]人借助生物显微镜及扫描电镜对九香虫、小皱蝽进行鉴别，发现两者的区别主要在腹背板。鞠康等[10]人对九香虫及其混淆品微性状鉴别研究，发现在头部、前胸背板、小盾片、腹侧缘、前翅、生殖节等方面均有较明显的区别。李莎等人[11,12]发现九香虫及其混伪品药材性状和显微鉴别可以通过腹背板进行鉴别；通过DNA条形码技术和九香虫的线粒体基因测序技术能够准确鉴定九香虫及其混伪品。传统鉴定方法可以通过性状、显微进行鉴定，但其无法对掺杂一定比例的九香虫药材准确鉴定掺杂基原。多重PCR技术是基于每个物种基因设计特异性引物，基于特异性引物扩增的产物碱基长基于DNA条形码、多重PCR、荧光定量PCR对九香虫及其混伪品进行鉴定王孟虎1,2，孙一帆3，左亚锋1，孟祥松1，栗进才1，俞浩1，许亮2，康廷国2（1.亳州学院，安徽亳州236800；2.辽宁中医药大学，辽宁大连116600；3.亳州职业技术学院，安徽亳州236800）收稿日期：2022-10-23通讯作者：许亮（1978-），男，辽宁沈阳人，博士，教授。研究方向：中药鉴定与品质评价。基金项目：辽宁省“百千万人才工程”资助项目；安徽高校自然科学研究项目（KJ2021A1143；KJ2020A0765）；亳州学院科研项目（BYZ2017C02；BYZXKTD202004；BYH202108）；高校学科（专业）拔尖人才（gxbjZD2020095）摘要：目的：基于DNA条形码、多重PCR、荧光定量PCR对市售九香虫、小皱蝽及其掺杂样品进行鉴定。方法：利用通用引物COI进行扩增并测序，构建NJ系统发育树、二级结构并计算种内种间遗传距离；基于COI序列设计九香虫、小皱蝽特异性引物并进行电泳，比较电泳条带；基于COI引物进行SBYR荧光定量PCR，观...
