海珠喘息定片的特征图谱研究_黄雨婷.pdf

海珠喘息定片的特征图谱研究黄雨婷*，黄澜，陈莹，段营辉(厦门市食品药品质量检验研究院，福建厦门 361012)摘要:目的建立海珠喘息定片的特征图谱，为整体质量评价提供参考。方法采用高效液相色谱法，色谱柱为 YMC-Pack ODS-A(250 4.6mm，5 m)，以乙腈-0.05%磷酸为流动相，体积流量 1.0 mLmin1，梯度洗脱，柱温 30，检测波长 300 nm。结果建立了不同厂家的 15 批样品的 HPLC 特征图谱，确定 8 个特征峰，并对其分别归属于胡颓子叶、防风、甘草三味药材。结论该方法操作简便，重复性好，可有效控制该药品质量。关键词:海珠喘息定片;特征图谱;高效液相色谱法;质量评价中图分类号:927文献标识码:A文章编号:1006-3765(2023)-02-0039-03作者简介:黄雨婷，女(1992 )。硕士，从事药品质量标准研究。基金项目:厦门市市场监督管理局科技项目(XMSJ202115)Study on Characteristic Chromatogram of HaiZhu ChuanXiDing TabletHUANG Yu-ting*，HUANG Lan，CHEN Ying，DUAN Ying-hui(Xiamen Institution for Food and Drug QualityControl，Xiamen 361012，China)ABSTACT:OBJECTIVETo establish the characteristic chromatogram of HaiZhu ChuanXiDing tablets for the o-verall quality evaluation.METHODSHigh-performance liquid chromatography(HPLC)was performed on a YMC-Pack ODS-A(250 4.6 mm，5 m)column with acetonitrile(A)-0.05%phosphoric acid(B)as the mobile phase，with the flow rate of 1.0 mLmin1，gradient elution，column temperature of 30 and the UV detection wavelengthof 300 nm.ESULTSThe HPLC characteristic chromatogram of 15 batches of samples from different manufactur-ers was obtained，in which 8 characteristic peaks from Elaeagnus pungens leaves，liquorice and Saposhnikovia divari-cate.CONCLUSIONThe method is simple，reproducible and can be used for the quality control of the HaizhuChuanxiding tablets.KEY WODS:Haizhu Chuanxiding tablet;Characteristic chromatogram;HPLC;Quality evaluation海珠喘息定片为中药复方制剂，由珍珠层粉、胡颓子叶、天花粉、蝉蜕、防风、冰片、甘草、盐酸氯丙那林、盐酸去氯羟嗪组成。具有平喘、祛痰、镇静、止咳的功效，用于支气管哮喘，慢性气管炎等1，2。该品种收载于国家药品标准(标准号为WS3-B-1818-94-2020)，该标准包含性状、显微和薄层鉴别，检查项以及高效液相色谱法含量测定等。质控项目的设置针对性较强，但覆盖面有限。海珠喘息定片组方复杂，属于含有化学药成分的中成药，单一组分的含量测定无法从整体体现海珠喘息定片的质量差异，且胡颓子叶在组方中功效明确，用量较大，却无对其质量把控的手段3-5。中药特征图谱能够更宏观的体现海珠喘息定片中药材以及药品的质量差异，能从整体上体现不同企业样品间的差异，提升质量标准6-8。目前，尚无海珠喘息定片特征图谱的相关报道。本研究建立海珠喘息定片的特征图谱，确定共有峰的归属。一方面提升质控标准，更好地反映药品的真实内在质量;另一方面协助药品企业完善生产工艺，提升产品质量，强化产品市场竞争力。1仪器与试剂1.1仪器日本岛津 Shimadzu LC-20AD/Waters e2695/Agi-lent 1200 高效液相色谱仪，梅特勒托利多 XS-105 电子分析天平，超声波清洗器。1.2试剂5-O-甲基维斯阿米醇苷(批号:111523-200606，含量100.0%)、防风(批号:190101)、甘草(批号:CY20210605)，均由中国食品药品检定研究院提供。胡颓子叶(福建胡颓子 Elae-agnus oldhamii Maxim.)药材由厦门中药厂有限公司提供。海珠喘息定片来源于 8 个不同生产厂家的 15 批样品。磷酸、甲酸均为分析纯，甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱为 YMC-Pack ODS-A(250 4.6 mm，5 m)，流动相 A 为乙腈，流动相 B 为 0.05%磷酸溶液，按表1 进行梯度洗脱;流速 1.0 mLmin1;柱温 30;检测波长300 nm;进样 20 L。2.2溶液的配制2.2.1对照品溶液的制备:取 5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每 1 mL 含 20 g 的溶液，即得对照品溶液。93Strait Pharmaceutical Journal Vol.35 No.2 2023表 1梯度洗脱表时间(min)流动相 A(%)流动相 B(%)0 25138725 261320878026 40208040 652040806065 75406075 75.14013608775.1 8113872.2.2供试品溶液的制备:取海珠喘息定片 10 片，研细，取粉末约2.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 25 mL 甲醇，称定重量，超声处理(功率 600 W，频率 50 kHz)40 min，取出，放冷，用甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。2.3方法学考察2.3.1精密度试验:精密吸取同一供试品溶液 20 L，注入液相色谱仪，连续进样 6 次，测定各主要色谱峰相对保留时间的 SD 小于 0.1%，表明仪器精密度良好。2.3.2重复性试验:取同一批海珠喘息定片样品 6 份，照2.2.2 项下的方法制备成供试品溶液，分别注入液相色谱仪，测得供试品溶液各主要色谱峰相对保留时间的 SD 小于0.1%，表明方法重复性良好。2.3.3稳定性试验:精密吸取同一供试品溶液，分别在 0、2、4、8、12、24 h 进样 20 L，测得供试品溶液各主要色谱峰保留时间的 SD 小于 0.1%，表明样品溶液在 24 h 内稳定。2.3.4耐用性试验:精密吸取同一供试品溶液，分别采用不同品牌仪器(Shimadzu LC-20AD/Waters e2695/Agilent 1200)和不同厂牌的同类型色谱柱(YMC/Waters/DiKMA，ODS C18，规格 250 4.6 mm，5 m)进样。结果表明，不同品牌高效液相色谱仪，不同厂牌的同类型色谱柱对结果的测定均无显著影响。2.4样品的 HPLC 特征图谱建立分别对所收集的 15 批海珠喘息定片样品进行测定，结合重复性、稳定性和耐用性试验的考察结果，删除 15 批样品色谱图中相对保留时间 SD 大于 5%，峰分离度较差以及峰形不佳的色谱峰，最终筛选出 8个特征峰，以 5-O-甲基维斯阿米醇苷峰为参照物峰(S 峰)，计算各特征峰与 S 峰的相对保留时间。经比较分析后得到本品的典型特征图谱(见图 1 2)。以 5-O-甲基维斯阿米醇苷峰为参照物峰(S 峰)，其余特征峰的相对保留时间应在规定值的 5%范围之内。规定值为:1.31(峰 2)、1.36(峰 3)、1.50(峰 4)、1.54(峰 5)、1.69(峰 6)、1.86(峰 7)、2.02(峰 8)。利用中药指纹图谱相似度分析软件(2009 年版)计算各厂家不同批次样品间的相似度，5 家生产企业所收集的 15 批样品间相似度值均在 0.90 以上(见表 2)。2.5特征峰归属2.5.1单味药材、阴性供试品溶液的制备:单味药材供试品溶液的制备 分别称取胡颓子叶 1 g、防风1 g 和甘草1 g，各加入甲醇 15 mL、25 mL 和 25 mL，按“2.2.2”项下供试品溶液制备方法制备。阴性供试品溶液的制备 根据海珠喘息定片的质量标准收载的制法，按“2.2.2”项下供试品溶液制备方法，分别制备缺失胡颓子叶、防风、甘草三味药材的阴性供试品溶液。图 1海珠喘息定片典型特征图谱图 215 批海珠喘息定片特征图谱表 2不同生产企业批间相似度统计分析生产企业批数编号相似度江西南昌桑海制药有限公司3S10.977S20.991S30.948江西汪氏药业有限公司3S40.973S50.976S60.999洛阳天生药业有限公司3S70.974S80.937S90.925厦门中药厂有限公司3S100.967S110.967S120.967沈阳红药集团股份有限公司3S130.968S140.986S150.981经过上述单味药材、阴性样品与海珠喘息定片的特征图谱进行比较，确定特征峰的归属。结果表明，胡颓子叶、防风和甘草 3 味药材有明显归属的色谱峰，其中 1、4、6 号峰来源于防风，2、3 号峰来源于甘草，5、8 号峰来源于胡颓子叶，7 号峰为防风和甘草共有(见图 3 5)。04海峡药学2023 年第 35 卷 第 2 期图 3胡颓子叶对比图a.海珠喘息定片;b.胡颓子叶药材;c.缺胡颓子叶阴性图 4防风对比图a.海珠喘息定片;b.防风药材;c.缺防风阴性图 5甘草对比图a.海珠喘息定片;b.甘草药材;c.缺甘草阴性3讨论3.1本研究选择共有特征峰中峰面积较高，相对保留时间稳定，紫外吸收较强，为防风药材中指标性成分，且有法定的对照品供应的 5-O-甲基维斯阿米醇苷峰为参照物峰，分别考察了样品的提取时间、提取溶剂以及提取方式，以甲醇超声处理40 min 的测定值最高，因此选择甲醇超声 40 min 作为样品提取方法。3.2色谱条件和检测波长优化采用不同流动相比例的甲醇、乙腈-水、乙腈-0.1%甲酸水溶液、乙腈-0.05%磷酸水溶液等进行比较，结果发现乙腈-0.05%磷酸水溶液作为流动相，待测组分分离效果较好且与其他色谱峰无干扰。根据紫外全波长(200 400 nm)扫描结果，5-O-甲基维斯阿米醇苷峰在294 nm 处有最大吸收，盐酸氯丙那林、盐酸去氯羟嗪色谱峰分别在 264 nm、257 nm 处有最大吸收。在这三个检测波长下，盐酸氯丙那林和盐酸去氯羟嗪色谱峰对其他色谱峰的影响较大，且得到的色谱峰十分繁杂。选择 300 nm 处测定，在此波长下盐酸氯丙那林和盐酸去氯羟嗪基本已无紫外吸收，其他成分均有较好的紫外吸收，得到的图谱峰信息较多，分离度较好。3.3根据特征图谱的考察结果，海珠喘息定片的特征峰相对保留时间较为稳定，但不同生产厂家样品特征峰的峰面积差异较大，同一厂家的批间差异较小。峰面积的差异，可能由于药材本身产地及采收的不同，以及生产过程中工艺参数的控制，运输及储存条件的差异导致9-11。利用中药指纹图谱相似度分析软件(2009 年版)进行数据处理，避免了特征图谱的直观分析对结果的判定产生偏差12。15 批海珠喘息定的相似度均在 0.90 以上，说明上述企业自身原料药材来源相对稳定，工艺流程、参数控制较为一致，基本能保证企业生产的海珠喘息定片药品质量的稳定性及均一性。参考文献1 李毅，秦逸辉，金雨青，等.海珠喘息定治疗慢性喘息性支气管炎43 例 J.现代中西医