海军军医大学学报2023年4月第44卷第4期http://xuebao.smmu.edu.cnAcademicJournalofNavalMedicalUniversity,Apr.2023,Vol.44,No.4·394··论著·［收稿日期］2022-12-13［接受日期］2023-03-07［基金项目］国家自然科学基金面上项目（8197032203）．SupportedbyGeneralProgramofNationalNaturalScienceFoundationofChina(8197032203).［作者简介］万洋，硕士生．E-mail:526403507@qq.com*通信作者（Correspondingauthor）.Tel:021-31161721,E-mail:gxfdoc@sina.com坏死性凋亡对肾小管上皮细胞晶体黏附的影响及聚乙二醇的干预作用万洋，彭泳涵，高小峰*海军军医大学（第二军医大学）第一附属医院泌尿外科，上海200433［摘要］目的考察坏死性凋亡抑制剂及分子量为4000的聚乙二醇（PEG-4000）对小鼠肾小管上皮细胞TCMK-1表面一水草酸钙（COM）晶体黏附沉积的影响。方法分别用400、800μg/mLCOM作用于TCMK-1细胞，或先用受体相互作用的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（RIPK）3抑制剂GSK-872预处理后再加入400、800μg/mLCOM处理TCMK-1细胞，37℃孵育12h后在倒置相差显微镜下观察细胞表面晶体黏附情况，用CCK-8法检测细胞增殖活性，2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酸酯（DCFH-DA）探针法检测细胞氧化应激水平，蛋白质印迹法检测坏死性凋亡相关蛋白RIPK1、RIPK3、磷酸化混合谱系激酶结构域样蛋白（p-MLKL）的表达，电感耦合等离子体发射光谱法（ICP）检测细胞表面晶体黏附量。将TCMK-1细胞分为3组，分别用800μg/mLCOM、先用PEG-4000溶液再加入800μg/mLCOM、先用800μg/mLCOM再加入PEG-4000溶液处理细胞，37℃孵育12h后在倒置相差显微镜下观察细胞表面晶体黏附情况，CCK-8法检测细胞增殖活性、DCFH-DA探针法检测细胞氧化应激水平，ICP检测细胞表面晶体黏附量。结果400μg/mLCOM作用时，与COM处理组相比，GSK-872预处理组中TCMK-1细胞晶体黏附量减少、细胞增殖活性增强（P＜0.05）、氧化应激水平降低（P＜0.05）；800μg/mLCOM作用时，与COM处理组相比，GSK-872预处理组中TCMK-1细胞晶体黏附量无明显变化、细胞增殖活性增强（P＜0.05）、氧化应激水平降低（P＜0.05）、RIPK3和p-MLKL表达减少（P＜0.05）。与COM处理组相比，PEG-4000预处理组TCMK-1细胞晶体黏附量明显减少、细胞增殖活性增强、氧化应激水平降低（P均＜0.05），而后加入PEG-4000组与COM处理组相比晶体黏附量、细胞增殖活性、氧化应激水平均无明显变化（P均＞0.05）。结论用GSK-872抑制坏死性凋亡可以一...
