不同厂家鸡白痢抗原检测效果比较_武书杰.pdf

养禽与禽病防治2022 年第 10 期不同厂家鸡白痢抗原检测效果比较武书杰1，陈曦1，向斌1，杨亮宇1,*（云南农业大学动物医学院，昆明650201）摘要：鸡白痢是危害养禽业的的重要垂直传播疾病之一，目前尚无有效疫苗，主要依赖种群净化，有些种禽场主要通过平板凝集试验淘汰阳性鸡，进行鸡白痢的净化。为比较不同鸡白痢鸡伤寒多价染色抗原检测效果，本试验用 A、B 和 C 3 种不同厂家的染色抗原及其阴阳性血清对 2批来自 1 家种鸡公司共 288 份种鸡血清样品进行了检测。结果显示不同厂家的抗原与阴、阳性血清交叉使用可影响结果的稳定性；第一批试验组中血清样品的阳性检出率抗原 CAB，第二批试验组中血清样品的阳性检出率抗原 BAC，提示不同厂家鸡白痢抗原的检出率和抗原稳定性存在差异。关键词：鸡白痢抗原血清平板凝集鸡白痢是由鸡白痢沙门菌引起的可垂直传播的细菌性家禽传染病，主要引起雏鸡的死亡，产蛋下降及孵化率降低，严重制约养禽业的健康发展1,2。目前尚无有效的疫苗控制鸡白痢沙门菌的感染，主要依赖抗菌药，抗菌药虽能控制临床发病，但不能彻底杀灭宿主体内的病原菌；同时，频繁用药易产生耐药性3。因此，目前种鸡场主要通过全血或血清平板凝集试验不断检疫，淘汰阳性鸡，从而建立鸡白痢阴性鸡群。传统的玻片平板凝集试验具有成本低、反应快及可用于现场检测等优点，在鸡白痢的筛检中得到了广泛应用。然而，在实际应用中，平板凝集试验存在假阳性和检测结果不稳定的缺点。本研究将 3 种不同厂家的抗原进行检测对比，以筛选出灵敏度和稳定性较好的抗原用于种鸡场鸡白痢净化检测。1材料和方法1.1试验抗原鸡白痢、鸡伤寒多价染色平板凝集试验抗原 A、B、C 分别购自 A、B、C 3 家公司。A 公司抗原（生产批号：20210423），B 公司抗原（生产批号：010072003），C 公 司 抗 原（生 产 批 号：20210324）。1.2试验血清基金项目：云南省“万人计划”产业技术领军人才专项（YNWR-CYJS-2019-020）；国家蛋鸡产业技术体系(CARS-40-S25)study in the turkey embryo J.Am.Med.Assoc.Arc-h.Ophth.55:346-355.19 Adamstone，F.B.，and L.E.Card.1934.Theeffects of vitamin E deficie-ncy on the testis of themale fowl（gal-lus domesticus）J.J.Morphol.56:339-359.20 李青瑞，耿杰，赵银玲，等.鸡硒和维生素 E缺乏症的预防J.科学种养，2014:53-54.21 宗学东.鸡硒-维生素 E 缺乏症的防控措施J.中兽医学杂志，2015:20.22 王传学，唐式校，王义.维生素 E、K、C 对禽、兔营养水平的影响 J.现代畜牧科技，2016:46-47.23 李霞.鸡群常见维生素缺乏症的发生与诊治J.现代畜牧科技，2015:76-77.责任编辑：聂庆华中图分类号：S852.61 文献标志码：A 文章编号：1008-3847（2022）10-0030-0330-养禽与禽病防治2022 年第 10 期抗原阳性率相同的血清数量抗原阳性率相同的血清数量抗原阳性率相同的血清数量A19.35%（18/93）9.68%（9/93）A19.35%（18/93）8.60%（8/93）B7.69%（15/195）1.54%（3/195）B7.69%（15/195）C2.05%（4/195）C2.05%（4/195）第一批试验组 93 份种鸡血清，第二批试验组 195 份种鸡血清，试验血清来自于同一家种鸡公司，血清存放在抗凝管中并 4保存，经离心后取上清使用。2 批采样的种鸡均为 100 日龄。同时设置了阳性血清和阴性血清对照组，阴性血清、阳性血清分别购自 A、B、C 3 家公司。1.3试验方法试验前测得室温为 23，并保持在 2025。抗原和血清恢复至常温后开始检测，血清平板凝集试验的操作与结果判定参照各厂家说明书进行。凝集反应判定标准：100%凝集，“+”紫色凝集块大而明显，混合液混浊；75%凝集，“+”紫色凝集块较明显，但混合也有轻度混浊；50%凝集“+”出现明显的紫色凝集颗粒，但混合液较为清澈；25%凝集“+”仅出现少量细小颗粒；0%凝集“-”无凝集颗粒出现，混合液清澈。在 2 min 内，待检血清与抗原出现 50%凝集“+”以上凝集者为阳性，不发生凝集则为阴性，介于两者之间为可疑反应。将可疑鸡隔离 1 个月后再做检疫，若仍为可疑，按阳性反应判定。2结果与分析2.1不同厂家阴阳性血清比对结果A 抗原分别与 A、B 及 C 3 个公司的阴性、强阳性及弱阳性血清进行平板凝集试验，发现A 抗原与 A 强阳血清的凝集反应判定为“+”，而 A 抗原和 B、C 强阳血清凝集反应判定为“+”。用 B 抗原与 A、B、C 的阴性血清、强阳性血清、弱阳性血清进行平板凝集试验，发现 B 抗原与 B 强阳血清的凝集反应判定为“+”，而 B 抗原和 A、C 强阳血清凝集反应判定为“+”。用 C 抗原与 A、B、C 的阴性血清、强阳性血清、弱阳性血清进行平板凝集试验，发现 C 抗原与 C 强阳血清的凝集反应判定为“+”，而 C 抗原和 A、B 强阳血清凝集反应判定为“+”。3 种抗原分别与不同厂家的阴性血清进行凝集试验反应判定均为“-”。综上所述，不同厂家的抗原和阴性血清、强阳性血清、弱阳性血清不宜交叉使用，否则会影响结果的稳定性。2.2不同抗原的阴、阳性检出率用 3 种抗原检测第一批试验组 100 日龄93 份血清，抗原 A 的阳性率是 19.35%，抗原 B的阳性率是 12.90%，抗原 C 的阳性 率是32.26%。其中 A 和 B 抗原检测结果相同的血清数量占总数量的 9.68%，A 和 C 抗原检测结果相同的血清数量占总数量的 8.60%，B 和 C 抗原检测结果相同的 血清数量占总数量的10.75%（表 1）。以上结果表明，第一批试验组中血清样品的阳性检出率抗原 CAB，不同厂家抗原检测结果差异较大。用 3 种抗原检测第二批试验组 100 日龄195 份血清，抗原 A 的阳性率是 2.56%，抗原 B的阳性率是 7.69%，抗原 C 的阳性率是 2.05%。其中 A 和 B 抗原检测结果相同的血清数量占总数量的 2.56%，A 和 C 抗原检测结果相同的血清数量占总数量的 0.51%，B 和 C 检测结果相同的血清数量占总数量的 1.54%（见表 2）。以上结果表明，第二批试验组中血清样品的阳性检出率抗原 BAC，不同厂家抗原检测结果表 1第一批血清中每两种抗原检测结果相同的血清数量31-养禽与禽病防治2022 年第 10 期抗原阳性率相同的血清数量抗原阳性率相同的血清数量抗原阳性率相同的血清数量A2.56%（5/195）2.56%（5/195）A2.56%（5/195）0.51%（1/195）B12.90%（12/93）10.75%（10/93）B12.90%（12/93）C32.26%（30/93）C32.26%（30/93）差异较大。3讨论传统的平板凝集试验可作为监测和净化鸡白痢的一种有效方法。其他检测方法如 PCR4、DNA 探针法5、ELISA 方法6和环介导等温扩增技术（LAMP）7由于操作的复杂性及成本等问题在净化实践方面相对少用。通过鸡白痢沙门菌人工感染 SPF 鸡制备的试验血清和阴性血清比较 3 不同厂家鸡白痢抗原稳定性，结果显示均较差9，与本研究结果类似。鸡白痢沙门菌的抗原型具有一定的不稳定性，包括指定标准型、变异型和中间型。属于 D血清型，含有 O1、O9 和 O12，其中 O12 中又存在 O121、O122 和 O123 3 种抗原类型。鸡白痢沙门菌的不同类型表达不同比例的体细胞抗原O122 和 O123 的量不同，在标准菌株中含有大量的 O123，只含有少量的 O122，而变异菌株的2 种抗原含量刚好相反8。商业凝集抗原结合了标准株和变异株。研究发现不同抗原对试验血清的阳性检出率不同，可能与不同厂家抗原菌种所含优势抗原类型不同有关。有条件的种鸡场建议从本场分离鸡白痢沙门菌并制备相应的抗原，用于平板凝集试验。同时，急需稳定性好及可操作性强的鸡白痢沙门菌的新型检测方法保障鸡白痢的净化工作。参考文献1Wang X,Wang H,Li T,et al.Characterization ofSalmonella spp.isolated from chickens in CentralChinaJ.BMC Vet Res,2020,16(1):299.2HL.S.Fowl typhoid and pullorum disease J.Rev Sci Tech,2000,19(2):405-424.3Barrow P A,Jones M A,Smith A L,et al.Thelong view:Salmonella-the last forty years J.A-vian pathology,2012,41(5):413-420.4Fratamico P M.Comparison of culture,poly-merase chain reaction(PCR),TaqMan Salmonella,and Transia Card Salmonella assays for detection ofSalmonella spp.in naturally-contaminated groundchicken,ground turkey,and ground beefJ.Molec-ular and Cellular Probes,2003,17(5):215-221.5Burkhalter P W,Muller C,Luthy J,et al.Detec-tion of Salmonella spp.in eggs:DNA analyses,cul-ture techniques,and serology J.J AOAC Int,1995,78(6):1531-1537.6 沈国顺,何昭阳,刘丽霞.3 种不同方法检测雏鸡白痢病血清抗体的比较J.中国兽医杂志,1995(07):17-18.7T Notomi H O H M.Loop-mediated isothermalamplification of DNAJ.Nucleic Acids Res,2000,28(12):E63.8张璐,张雪伟,袁宗辉,等.畜禽沙门氏菌病防制研究进展 J.中国畜牧兽医,2017,44(07):2103-2111.9刘洋,严专强,廖秋生,等.不同厂家鸡白痢抗原检测效果比较J.养禽与禽病防治,2018(12):7-8.责任编辑：曹伟胜表 2第二批血清中每两种抗原检测结果相同的血清数量32-