ATRX、P53表达的相关...合多因素对胶质瘤预后的意义_许儒.pdf

DOI:103969/j issn1672-7770 2023 02007胶质瘤基础ATRX、P53 表达的相关性及联合多因素对胶质瘤预后的意义许儒，阴鲁鑫，华磊，陈洋，朱天霸，赵光，王星淇，高文昌【摘要】目的探讨脑胶质瘤患者中 ATRX 失表达与 P53 过表达的相关性，并分析二者与临床多因素在胶质瘤诊断及预后中的意义。方法收集 2014 年 1 月2020 年 12 月徐州医科大学附属医院神经外科收治的术后病理诊断为胶质瘤的患者 92 例，其中包括星形细胞瘤(WHO、级)30 例、少突胶质细胞瘤(WHO、级)50 例、胶质母细胞瘤(WHO 级)12 例，并使用免疫组织化学染色法检测 ATRX 与 P53 表达情况，并统计不同年龄、性别与二者间的关系;2检验分析 ATRX 失表达、P53 过表达与不同病理类型脑胶质瘤的关系且二者表达之间的关系用 Spearman 等级相关分析法检验;Kaplan-Meier 生存曲线分析二者对胶质瘤患者预后的影响，其他临床因素纳入多因素 Cox 回归分析。结果ATRX 与 P53 表达与胶质瘤病理类型相关(P 005);相关性分析显示，胶质瘤中 ATRX 与 P53 表达呈负相关(r=0580，P 001);多因素分析表明，胶质瘤患者的年龄60 岁、病理分级 WHO 级、术前 KPS 评分 60 分、术后无放化疗、肿瘤直径5 cm、肿瘤非全切、ATRX 失表达、P53 过表达是预后不良的独立危险因素(P 0 05)。结论在人脑胶质瘤患者中，ATRX失表达与 P53 过表达密切相关，与临床其他多因素联合可更好地对胶质瘤患者的预后进行评估。【关键词】脑胶质瘤;ATRX;肿瘤抑制蛋白质 P53;免疫组化;预后【中图分类号】R739 41【文献标志码】A【文章编号】1672-7770(2023)02-0153-06Correlation of ATRX and P53 expression and prognostic significance of combination ofmultiple factors in glioma XU Ru，YIN Lu-xin，HUA Lei，et al Department of Neurosurgery，Affiliated Hospital of Xuzhou Medical University，Xuzhou 221000，ChinaCorresponding author:GAO Wen-changAbstract:ObjectiveTo explore the correlation between the loss of expression of alphathalassemia with mental retardation syndrome gene(ATRX)and over expression of P53 in patients withglioma and to analyze the clinical significance of the two gene expression and multi-factors in thediagnosis and prognosis of glioma MethodThe clinical data of 92 patients were collected，including 30patients with astrocytoma of grade/(WHO)，50 with oligodendroglioma of grade/(WHO)and 12with glioblastoma of grade(WHO)The Chi-square test was applied to analyze the relationshipbetween the two gene expression and different pathological types of glioma The Spearmans rankcorrelation analysis was used to analyze the correlation between their different expression Kaplan-Meiersurvival curve was designed to investigate the clinical value of their different expression in prognosis ofpatients with glioma The other contributing factors were analyzed in the multivariate Cox regressionanalysis ResultsThere was a correlation between the different expression of ATRX and P53 and thepathological types of glioma(P 0 05)The correlation analysis showed that the loss of expression ofATRX and over expression of P53 in glioma were negative correlated(r=0 426，P 0 01)Themultivariate analysis showed that the age over 60 years old，grade/(WHO)，preoperative KPSscores below 60 points，lack of postoperative radiotherapy and chemotherapy，and lost expression of theATRX were independently risk factors for poor prognosis ConclusionIn patients with glioma，the lossof expression of ATRX and over expression of P53 were closely related to one another，and they togetherwith other clinical factors can better evaluate the prognosis of glioma patientsKey words:glioma;ATRX;tumor suppressor protein P53;immunohistochemistry;prognosis基金项目:江苏省自然科学基金面上项目(BK20181152)作者单位:221000 徐州，徐州医科大学附属医院神经外科通信作者:高文昌351临床神经外科杂志 2023 年第 20 卷第 2 期脑胶质瘤是颅内最常见的恶性肿瘤，占颅内原发肿瘤的 40%60%1。根据肿瘤的恶性程度分为 WHO 低级别胶质瘤，级高级别胶质瘤。高级别肿瘤与低级别相比，一般患者生存期更短，预后较差。现在更多基因和染色体被发现与人脑胶质瘤的发生、发展及预后有着高度的联系2，有学者发现，胶质瘤患者的预后状况与细胞的凋亡有关，而细胞的凋亡又与基因或蛋白的调控相关联3。自 2016 年 WHO 发布了胶质瘤的第四版本的诊断标准，胶质瘤就进入了“组织学+分子病理”的诊 断 模 式，其 中 异 柠 檬 酸 脱 氢 酶(isocitratedehydrogenase，IDH)的野生型与突变型作为分类的首个分子标记物，对于胶质瘤的诊断有着极其重要的意义，其次是 地中海贫血伴智力低下综合征基因(alpha-thalassemia/mental retardation syndrome X-linked，ATRX)与 P53，1p/19q，其中 ATRX 与1p/19q的突变不会同时发生，把胶质瘤的常见类型分为弥漫星形细胞瘤 IDH 突变型、少突胶质细胞瘤 IDH 突变，1p/19q 共缺失、弥漫性星形细胞瘤，IDH 野生型、少突胶质细胞瘤、NOS 等。然而 ATRX 基因异常表达的致病机制仍不十分明确，其治疗靶向的可处理机制也不清楚。ATRX 作为端粒维持基因，与肿瘤细胞发生端粒替代延长机制(ALT)有关，而P53 对端粒酶的作用也有一定的影响4 在胶质瘤的发展进程中同样起重要作用。本研究回顾性分析2014 年 1 月2020 年 12 月在徐州医科大学附属医院神经外科初次行手术切除并经病理检查确诊的胶质瘤标本 92 例，使用免疫组织化学方法对上述标本进行处理，分析 ATRX 失表达及 P53 过表达情况并分析二者在胶质瘤发展过程中的某条或多条途径中的共同作用及联合临床其他多因素对于胶质瘤预后的关系。1资料与方法1 1一般资料共纳入 92 例脑胶质瘤患者标本，其中男 50 例，女 42 例;年龄 22 74 岁，平均年龄48 5 岁;星形细胞瘤(WHO、级)30 例，少突胶质细胞瘤(WHO、级)50 例，胶质母细胞瘤(WHO 级)12 例;对患者本人或家属进行电话随访，随访内容包括患者术后是否进行放化疗，是否死亡及死亡时间。随访时间自患者手术日开始，截止日期为 2020 年 12 月。纳入标准:(1)原发脑胶质瘤;(2)病理检查确诊为胶质瘤;(3)初次行手术治疗;(4)术后联合放化疗;(5)患者资料完善可进行有效随访，并取得患者知情同意。排除标准:(1)合并其他系统的原发肿瘤;(2)入院前对胶质瘤有其他治疗;(3)入院前肝肾功能、电解质、凝血功能明显异常;(4)入院前近期有慢性或急性感染病史。1 2试剂ATRX 多克隆抗体、P53 单克隆抗体均购自北京中杉金桥公司，DAB 显色剂、EDTA(PH84)修复液、PBS 缓冲液、二抗均购自罗氏(上海)公司。1 3标本制作手术切除肿瘤组织均经 10%中性福尔马林固定，HE 染色;石蜡包埋，4 m 厚连续切片，每个切片均行 HE 染色。1 4免疫组织化学染色切片脱蜡后分别滴加ATRX 多克隆抗体、P53 单克隆抗体行免疫组化EnVision 法染色，染色步骤严格按试剂盒说明书进行:DAB 显色、苏木精复染、返蓝、乙醇脱水、二甲苯透明、中性树胶封固，以 PBS 缓冲液代替一抗作为阴性对照。15判断标准结果由两位有经验的病理医师阅片后，取得一致意见。以肿瘤周围正常细胞作为内对照，免疫组化结果以肿瘤细胞核棕褐色为阳性细胞。光镜下随机选择数个高倍视野，记录每个视野中阳性细胞所占的百分率，采用染色判定标准5 7。肿瘤细胞中，ATRX 阳性肿瘤细胞数 10%即ATRX 表达，ATRX 阳性细胞数10%即 ATRX 失表达;P53 阳性细胞数 10%即 P53 过表达，P53 阳性细胞数10%即 P53 阴性。1 6统计学方法采用 SPSS 26 0 软件进行数据统计分析;2检验分析 ATRX、P53 表达与不同类型胶质瘤的关系;ATRX 与 P53 表达之间的关系用Spearman 等级相关分析法检验;ATRX 与 P53 表达与胶质瘤患者生存时间的关系用 Kaplan-Meier 生存曲线表示，再采用多因素 Cox 回归分析，以 P 0 05为差异有统计学意义。2结果2 1人口学统计结果在 60 岁患者中，男性患者 ATRX 失表达与 P53 过表达的发生率分别是3947%、40 62%，女性患者中为 37 50%、2812%;在60 岁患者中，男性患者 ATRX 失表达与 P53 过表达的发生率分别是 33 33%、66 67%，女性患者中分别为 30 00%、40 00%，ATRX 失表达与 P53 过表达更加倾向于年轻患者，而在不同性别中无明显差别，P 0 05(表 1)。2 2ATRX 失表达、P53 过表达与不同病理类型胶质瘤的关系