Omega-3多不饱和脂肪...鼠炎症和细胞凋亡反应的影响_杨红秀.pdf

DOI:103969/j issn1672-7770 2023 02010论著Omega-3 多不饱和脂肪酸对缺血缺氧性脑损伤幼鼠炎症和细胞凋亡反应的影响杨红秀，李丽华【摘要】目的探讨 Omega-3 多不饱和脂肪酸(-3PUFA)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠模型的脑组织炎症、氧化应激和凋亡反应的作用。方法将 90 只新生大鼠根据随机数字表法等分为空白组、模型组、-3PUFA 组。-3PUFA 组和模型组行 HIBD 模型处理，造模后前者予150 mg/kg-3PUFA 灌胃，后者予等体积等频率生理盐水灌胃;空白组行假手术处理，术后处理同模型组。再根据处死时间将每组分为 6 h、12 h、24 h 三个亚组，比较空白组、模型组、-3PUFA 组及其亚组的脑组织白细胞介素(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-)、脑组织含水量、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、脑细胞凋亡率。结果在 12 h 和 24 h 时-3PUFA组 IL-6 水平低于模型组，在不同时间点-3PUFA 组 TNF-水平均低于模型组，高于空白组(均P 0 017);在 24 h 时，-3PUFA 组脑组织含水量低于模型组，高于空白组(均 P 0 017);24 h 时，-3PUFA 组MDA 水平低于模型组，高于空白组(均 P 0 017)，-3PUFA 组 SOD 水平高于模型组，低于空白组(均 P 0 017);在 24 h 时，-3PUFA 组脑细胞凋亡率低于模型组(P 0 017)。结论在新生大鼠 HIBD 模型中，应用-3PUFA 可有效改善脑组织损伤和凋亡情况。【关键词】Omega-3 多不饱和脂肪酸;大鼠;缺氧缺血性脑损伤;凋亡反应【中图分类号】R651【文献标志码】A【文章编号】1672-7770(2023)02-0173-06Effects of omega-3 polyunsaturated fatty acids on inflammatory and apoptotic responses inyoung rats model with ischemic-hypoxic brain injury YANG Hong-xiu，LI Li-hua Beijing LuheHospital Affiliated to Capital Medical University，Beijing 101100，ChinaCorresponding author:LI Li-huaAbstract:ObjectiveTo explore effects of omega-3 polyunsaturated fatty acids(-3PUFA)oninflammation，oxidative stress and apoptosis of brain tissue in newborn rats model with hypoxic-ischemic brain damage(HIBD)Methods90 newborn rats were divided into control group，modelgroup and-3PUFA group by random number table The-3PUFA group and the model group weretreated with HIBD model，after modeling the former was given 150 mg/kg-3PUFA by intragastricadministration，the latter was treated with equal volume and frequency physiological saline byintragastric administration，the control group was treated with sham surgery on the basis of the modelgroup Each group was divided into three subgroups of 6 h，12 h and 24 h according to the time ofbeing put to death，interleukin(IL)-6，tumor necrosis factor(TNF)-，brain tissue water content，malondialdehyde(MDA)，superoxide dismutase(SOD)and neuronal apoptpsis rate of the controlgroup，model group and-3PUFA group and their subgroups were comparatively analyzed ResultsAt 12 h and 24 h，IL-6 level in the-3PUFA group was lower than that in the model group，atdifferent points in time，TNF-level in the-3PUFA group was lower than that in the model group，TNF-level in the-3PUFA group was higher than that in the control group(all P 0 017)At24 h，brain tissue water content in the-3PUFA group was lower than that in the model group，braintissue water content in the-3PUFA group was higher than that in the control group(allP 0 017)At 24 h，MDA level in the-3PUFA group was lower than that in the model group，MDA level in the-3PUFA group was higher than that in the control group(all P 0 017)，基金项目:首都医科大学 2019 年度科技技术、社科计划项目(KM201910025001)作者单位:101100 北京，首都医科大学附属北京潞河医院儿科通信作者:李丽华371临床神经外科杂志 2023 年第 20 卷第 2 期SOD level in the-3PUFA group was higher than that in the model group，SOD level in the-3PUFA group was lower than that in the control group(all P 0 017)At 24 h，neuronal apoptpsisrate in the-3PUFA group was lower than that in the model group(P 0 017)ConclusionInthe neonatal rats with HIBD model，the application of-3PUFA can effectively relieve the braintissue injury and apoptosisKey words:-3PUFA;rats;HIBD;apoptotic responses缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic braindamage，HIBD)是指新生儿在围生期由于窒息导致部分或完全缺氧，脑血流量降低或暂停引起的脑损伤1。在我国，新生儿 HIBD 的发病率约为 2，其中 15%20%的患儿于新生期死亡，存活的患儿中25%30%者将伴有永久性神经系统损伤2。HIBD 致病机制错综复杂，缺血缺氧状态通过炎症反应、氧化应激、线粒体功能障碍等途径引发神经元坏死和凋亡，形成近远期神经功能缺陷3。当前针对 HIBD 尚无根治性治疗方法，临床多采用亚低温治疗、机械通气、保护神经元等对症支持治疗，但预后并不理想4 5，促使研究人员积极地寻找更多的治疗靶点。Omega-3多 不 饱 和 脂 肪 酸(omega-3polyunsaturated fatty acids，-3PUFA)是人体必需脂肪酸之一。既往体外研究表明其不仅作为营养物质供能，还能在许多神经疾病中发挥调控炎性因子水平、保护神经元、减轻伤后自噬反应等效用6 7，如Zhang 等8 报道-3PUFA 能改善新生 HIBD 大鼠的血脑屏障功能，减少神经元损伤。据此，本研究应用新生 HIBD 大鼠模型，进一步探索-3PUFA 在HIBD 中对脑组织的影响。1资料与方法1 1实验动物来源及分组90 只 10 日龄新生 SD大鼠由潞河医院实验室提供，体质量 15 22 g，实验期间大鼠饲养于室温 18 25、相对湿度 40%80%的清洁环境中;所有大鼠应用随机数字表法等分为空白组、模型组、-3PUFA 组(各 30 只)，每组再随机分为 3 个亚组(各 10 只)，处死时间分别为模型建立后 6 h、12 h、24 h。比较空白组、模型组、-3PUFA 组 及 其 亚 组 的 脑 组 织 白 细 胞 介 素(interleukin-6，IL-6)、肿瘤坏死因子(tumor necrosisfactor-，TNF-)、脑 组 织 含 水 量、丙 二 醛(malondialdehyde，MDA)、超 氧 化 物 歧 化 酶(superoxide dismutase，SOD)、脑细胞凋亡率。1 2HIBD 模型建立1 2 1模型组和-3PUFA 组行 HIBD 模型处理-3PUFA 组于术后立即予150 mg/kg 的-3 鱼油脂肪乳 注 射 液(华 瑞 制 药 有 限 公 司，国 药 准 字J20150040，100 mL10 g1 2 g)灌胃9;模型组予等体积等频率生理盐水灌胃。HIBD 模型采用 Rice-Vannucci 经典方法10:两组大鼠经 1%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后，消毒颈部，然后钝性分离大鼠右颈总动脉，用丝线行右颈总动脉永久性结扎，逐层缝合切口。大鼠在室温中恢复 2 h 后，再而将两组大鼠置于 37 的水浴恒温箱中，通入 80 mL/L 氧气和920 mL/L氮气行缺氧处理 2 h，完成 HIBD 模型后放回母鼠身边喂养。当大鼠苏醒后，于爬行时出现向右转圈，或提尾后右前肢屈曲，提示 HIBD 模型建立成功。12 2空白给予假手术处理仅做右颈处钝性分离和切口缝合，不做右颈总动脉结扎和缺氧处理，术后予等体积等频率生理盐水灌胃，操作结束后放回母鼠身边喂养。分别于造模后 6 h、12 h、24 h 予-3PUFA 组、模型组、空白组的亚组大鼠断头处死，死后快速取脑。1 3脑组织炎性因子水平检测大鼠经处死后，取其右侧脑皮质组织约(200 20)mg，用冰 9 g/L 盐水洗净表面附着的血液，加入无菌生理盐水，置入匀浆器行冰上匀浆，制成 100 g/L 的匀浆液。将匀浆液在 4 条件下以 3 000 r/min 离心10 min，取上清保存于 80 冰箱中待检。采用 ELISA 法检测 IL-6 和 TNF-水 平，试 剂 盒 购 自 美 国 AdlitteramDiagnostic Laboratories 公司，操作遵说明书。1 4脑组织氧化因子水平检测脑组织匀浆液制备方法同上，采用黄嘌呤氧化酶法检测 SOD 水平，用硫代巴比妥酸法检测 MDA 水平。试剂盒购自南京建成生物工程研究所，操作遵说明书。1 5脑组织含水量检测大鼠经处死后，取其右侧脑皮质组织约(200 20)mg，采用干湿比重法检测脑组织含水量。用已知重量的锡纸包裹脑组织