LncRNA_SLC26A...垂体瘤组织中的表达及其意义_彭超.pdf

DOI:103969/j issn1672-7770 2023 02012论著LncRNA SLC26A4-AS1 在人垂体瘤组织中的表达及其意义彭超，李晏丽，袁勇【摘要】目的探讨 lncRNA SLC26A4-AS1 在人垂体瘤中的表达情况，并分析其与垂体瘤侵袭性的关系。方法收集经病理确诊的 16 例非侵袭性垂体瘤和 25 例侵袭性垂体瘤，利用实时荧光定量聚合酶链反应技术检测 SLC26A4-AS1 在人垂体瘤中的表达，并进一步分析 SLC26A4-AS1 与垂体瘤临床参数的相关性。结果与非侵袭性垂体瘤相比，SLC26A4-AS1 在侵袭性垂体瘤中表达降低;与无功能瘤相比，SLC26A4-AS1 在泌乳素瘤、生长激素瘤和促肾上腺皮质激素瘤中表达无明显差异。与 SLC26A4-AS1 高表达组相比，SLC26A4-AS1 低表达组中肿瘤体积3 cm3的比例明显增加、侵袭性垂体瘤的比例明显增加，差异具有统计学意义(P 0 05)。结论SLC26A4-AS1 在侵袭性垂体瘤中表达降低，SLC26A4-AS1 的低表达与肿瘤体积和侵袭性相关。【关键词】垂体瘤;侵袭性;长链非编码 RNA;SLC26A4-AS1【中图分类号】R739 41【文献标志码】A【文章编号】1672-7770(2023)02-0183-06Expression and significance of lncRNA SLC26A4-AS1 in human pituitary adenoma PENGChao，LI Yan-li，YUAN YongDepartment of Neurosurgery，Guangdong Provincial PeoplesHospital，Guangzhou 510080，ChinaCorresponding author:YUAN YongAbstract:ObjectiveTo investigate the expression of lncRNA SLC26A4-AS1 in humanpituitary adenoma and analyze its relationship with the invasiveness of pituitary adenoma MethodsThe expression of SLC26A4-AS1 was measured in 41 specimens of pituitary adenomas includinginvasive pituitary adenomas(n=21)and noninvasive pituitary adenoma(n=16)by real-timequantitative reverse transcription polymerase chain reactionThen，the correlation betweenSLC26A4-AS1 expression and clinical features of patients with pituitary adenomas were analyzedResultsThe expression of SLC26A4-AS1 was decreased in invasive pituitary adenomas comparedwith noninvasive pituitary adenomas There was no difference of SLC26A4-AS1 expression betweenPRL adenoma，GH adenoma and ACTH adenoma and nonfunctional adenomas Compared with theSLC26A4-AS1 high-expression group，the proportion of tumor volume 3 cm3and the proportion ofinvasive pituitary adenoma in the SLC26A4-AS1 low-expression group were significantly increased(P 0 05)ConclusionsThe expression of SLC26A4-AS1 is decreased in invasive pituitaryadenomas The expression of SLC26A4-AS1 is related to tumor volume and invasivenessKey words:pituitary adenoma;invasiveness;long non-coding RNA;SLC26A4-AS1基金项目:广州市卫生健康科技一般引导项目(20201A011079)作者单位:510080 广州，广东省人民医院神经外科(彭超);广州医科大学附属第二医院内分泌科(李晏丽);昆明医科大学第二附属医院神经外科(袁勇)通信作者:袁勇垂体瘤是最常见的中枢神经系统肿瘤之一，占颅内肿瘤的 10%20%左右1。既往研究表明，垂体瘤虽然是一类良性肿瘤，但仍有相当一部分会侵袭海绵窦、蝶窦、骨质等周围结构，表现为侵袭性生长，即侵袭性垂体瘤2。侵袭性垂体瘤手术后容易残留或复发，给临床治疗带来极大困难3。探究侵袭性垂体瘤的发病机制及寻找预测垂体瘤侵袭性和术后复发的标记物是最近的研究热点4 6。长 链 非 编 码 RNA(long non-coding RNA，381临床神经外科杂志 2023 年第 20 卷第 2 期lncRNA)是一类转录本长度超过 200 个核苷酸的非编码 RNA，不具有编码蛋白功能，但可通过基因组印记、染色质修饰、染色体沉默、转录激活、转录沉默等方式，在表观遗传学、转录调控、转录后调控等层面参与基因调控过程7。随着高通量测序技术的发展，越来越多的 lncRNAs 被发现与肿瘤的增殖、侵袭、转移及预后等相关8 9。近年来研究表明，一些lncRNAs 参 与 垂 体 瘤 侵 袭、进 展、复 发 等 过程6，10 11。目前研究表明，lncRNA 中的溶质载体家族 26 成员 4 的反义 RNA 1(solute carrier family 26member 4 antisense RNA 1，SLC26A4-AS1)与多种肿瘤的增殖、进展和预后相关12 15，但其在垂体瘤中的表达作用，尤其是与侵袭性相关的情况尚不清楚。本研究采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-timequantitativereversetranscriptionpolymerasechainreaction，qRT-PCR)对16 例非侵袭性垂体瘤和 25 例侵袭性垂体瘤组织中 SLC26A4-AS1 的表达进行检测，探讨其在垂体瘤中的表达情况，并分析其表达变化与垂体瘤侵袭性的关系。1资料与方法1 1材料11 1标本来源所有垂体瘤标本均来自广东省人民医院神经外科，所有患者均接受蝶窦入路的垂体瘤切除术。垂体瘤的诊断基于临床表现、激素分泌生化特征、MRI 和手术切除后两位病理医师证实的组织病理学分析2。非侵袭性垂体瘤的定义是垂体瘤局限于鞍区，不压迫周围结构，Knosp 分级为 级。侵袭性垂体瘤的定义根据 Knosp 分级为 级16。本研究共纳入 41 例标本，包含 16 例非侵袭性垂体瘤和 25 例侵袭性垂体瘤，将其按分泌功能分为:无功能瘤 25 例，泌乳素瘤(prolactin 瘤，PRL 瘤)6 例，生长激素瘤(growth hormone 瘤，GH 瘤)6 例，促 肾 上 腺 皮 质 激 素 瘤(adrenocorticotropichormone 瘤，ACTH 瘤)3 例，促 甲 状 腺 激 素 瘤(thyrotropin 瘤，TSH 瘤)1 例。垂体瘤体积计算方式是利用 MRI 测量并记录垂体瘤的三个平面，即横断面(TR)、正位面(AP)和颅侧面(CC)的尺寸，垂体瘤体积的估算公式为:V=(TR AP CC)/6 17。根据术中肿瘤切除情况及术后 72 h 的 MRI 复查结果，计算肿瘤的切除率，定义完全切除为肿瘤切除100%，部分切除，为肿瘤切除75%。本研究经医院伦理委员会批准，患者或家属签署知情同意书。1 1 2试剂和仪器Trizol 试剂:Invitrogen，美国;逆转录试剂盒:Promega，美国;qRT-PCR 试剂盒:Takara，日本;引物:生工生物，中国;NanoDrop 2000分光 光 度 计:Thermo Fisher，美 国;qRT-PCR 仪:Applied Biosystems(ABI)，美国。1 2垂体瘤 SLC26A4-AS1 测定手术切除后，所有垂体瘤组织样本立即被冷冻在液氮中，并保存在80 以待检。所有垂体瘤样本经过匀浆仪匀浆后，根据操作说明，使用 Trizol 试剂提取总 RNA。用NanoDrop 2000 分光光度计测定总 RNA 的浓度，并使用吸光度 A260/A280 对其纯度进行评估。使用逆转录试剂盒将RNA 逆转录为cDNA，按照qRT-PCR试剂盒说明书进行 qRT-PCR 操作，反应体系:SYBRGreen 50 L，无 RNA 酶水 3 0 L，上下游引物各05 L，cDNA 1 L，总体积为100 L。qRT-PCR 获取 SLC26A4-AS1 及内参基因 actin 的 Ct 值后，用 Ct值比较法计算 SLC26A4-AS1 在各组间的相对表达量(2 Ct)。SLC26A4-AS1 的上、下游引物序列分别为5-ACACGCGGGAAGGAATAAACT-3 和 5-GGTAGG-ATAGCTCCAGCTCCT-3;actin 的上、下游引物序列分别为 5-TGTGGATCGGTGGCTCCATCCT-3和 5-AAA-CGCAGCTCAGTAACAGTC CGC-3。1 3随访对 41 例患者定期于门诊复查或电话等方式进行随访，随访时间为出院日至 2021 年 9 月30 日，患者死亡、脱失或复发即为终止。利用 UCSCGenome Browser 软件(https:/genome ucsc edu/)分析 SLC26A4-AS1 在人各组织中的表达情况。14统计学分析计量资料以均数 标准差(xs)表示，计数资料以百分比表示。两组间比较采用 t检验，多组间比较采用 One-way ANOVA 分析。将本研究中垂体瘤组织 SLC26A4-AS1 的相对表达水平的中位数为界限18，将 41 例垂体瘤患者分为SLC26A4-AS1 低表达组和 SLC26A4-AS1 高表达组，分析两组间临床资料的差异。采用受试者工作特征(receiver operating characteristic，ROC)曲线分析和曲线 下 面 积(area under curve，AUC)来 评 估SLC26A4-AS1 对侵袭性垂体瘤的诊断能力。所有的统计分析都是采用 SPSS 25 0 软件进行统计分析。以 P 0 05 认为差异有统计学意义。2结果2 1垂体瘤的临床资料非侵袭性垂体瘤和侵袭性垂体瘤的典型 MRI 见图 1。将 41 例患者分为非侵袭性组(16 例)和侵袭性组(25 例)，两组平均年龄分别为(43 56 10 46)岁、(46 08 14 04)岁，两组在年龄、性别、分泌功能、肿瘤体积、肿瘤分类及手术方式上无统计学差异(表 1)。481J Clin Neurosurg，April 2023，Vol 20，No 2A:非侵袭性垂体瘤患者的 MRI T1加权像;B:非侵袭性垂体瘤患者的 MRI 增强;C:侵袭性垂体瘤患者的 MRI T1加权像;D:侵袭性垂体瘤患者的 MRI 增强图 1非侵袭性垂体瘤和侵袭性垂体瘤患者的典型 MRI 图像表 141 例垂体瘤患者的临床资料变量非侵袭性(n=16)侵袭性(n=25)P 值年龄(岁)4356 10 4646