不同配伍比例黄芪-白术水煎剂中黄芪黄酮溶出规律的研究_王建业.pdf

不同配伍比例黄芪-白术水煎剂中黄芪黄酮溶出规律的研究王建业1，王露莹2*，沃静2（1.浙江省嵊州市中医院，浙江 嵊州 312400；2.浙江工业大学 长三角绿色制药协同创新中心，浙江 杭州 310014）摘要：本研究旨在通过 HPLC法测定黄芪-白术水煎剂中 4 种黄芪黄酮类的含量，探讨黄芪配伍不同比例白术后黄酮类活性成分的溶出规律。试验方法：采用 Dikma Diamonsil Plus C18 色谱柱（250mm4.6 mm，5 m）；流动相为 0.1%甲酸水溶液-乙腈，梯度洗脱；流速 1 mL min-1；检测波长 254 nm；柱温 25；进样量 10 L。结果表明：4 种黄芪黄酮类成分的溶出率为毛蕊异黄酮苷 毛蕊异黄酮 芒柄花苷刺芒柄花素，在所观察的 5 个黄芪-白术配伍质量比例（10，21，11，23，12）中，毛蕊异黄酮苷、毛蕊异黄酮和刺芒柄花素的溶出率随着黄芪-白术配伍比例增加而整体呈下降趋势，芒柄花苷的溶出率则呈先上升后下降的趋势，在黄芪-白术 11 时达到最大值。由此可见，黄芪-白术的配伍比例会影响黄芪黄酮类成分在水煎剂中的溶出率。关键词：黄芪；白术；配伍；黄酮类成分；高效液相色谱法doi：10.3969/j.issn.2095-3801.2023.02.009中图分类号：R917文献标志码：A文章编号：2095-3801（2023）02-0057-06Astragalus Flavonoids Dissolution of Different CompatibilityProportion of Astragalus Membranaceus-Atractylodes MacrocephalaDrug Pair in Water DecoctionWANGJianye1,WANGLuying2*,WOJing2（1.Shengzhou Hospital ofTraditional Chinese Medicine,Shengzhou 312400,Zhejiang;2.Collaborative Innovation Center ofYangtzeRiver Delta Region Green Pharmaceuticals,ZhejiangUniversityofTechnology,Hangzhou 310014,Zhejiang）Abstract：This research aims to establish HPLC method for the determination of four Astragalus Flavonoids inAstragalus Membranaceus-Atractylodes Macrocephala water decoction,and to explore the principle of flavonoiddissolution after different proportion of Astragalus Membranaceus was mixed with Atractylodes Macrocephala.Theseparation was performed on Dikma Diamonsil Plus C18(250 mm4.6 mm,5 m)with mobile phase composed收稿日期：2022-10-03；修回日期：2022-10-24基金项目：嵊州市级科技计划项目“术枳黄芪汤的药物化学性质表征及其在治疗气虚型功能性便秘上的临床应用”（嵊科技 2021 28 号 0328）作者简介：王建业，男，浙江嵊州人，主任医师。*通信作者：王露莹，女，浙江嵊州人，助理研究员，博士。丽 水 学 院 学 报JOURNAL OF LISHUI UNIVERSITY第 45 卷第 2 期Vol.45No.22023 年 3 月Mar.2023of 0.1%formic acid-acetonitrile solution for gradient elution at the flow rate of 1 mL min-1,the detectionwavelength was set at 254 nm,the column temperature was set at 25,and the injection volume was 10 L.Theorder of flavonoid dissolution rate from high to low was Calycosin-7-glucoside,calycosin,ononin,andformononetin.As the Astragalus Membranaceus-Atractylodes Macrocephala compatibilityproportions(10,21,1 1,2 3,1 2)increased,the dissolution rate of Calycosin-7-glucoside,calycosin,and formononetindecreased,while the dissolution rate of ononin first increased and then decreased,reaching maximum at theproportion of 1 1.These results show that the Astragalus Membranaceus-Atractylodes Macrocephalacompatibilityproportions would affect the Astragalus flavonoid dissolution in water decoction.Key words：Astragalus Membranaceus;Atractylodes Macrocephala;compatibility;flavonoids;HPLC黄芪为豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪的干燥根，性微温，归肺、脾经1。黄芪被视为中医补气圣药，现代药学研究表明：黄芪中含有黄酮类、皂苷类、多糖类等多种活性成分，具有调节免疫系统、保护心血管、抗氧化、抗肿瘤等功效2。黄芪与白术是补气健脾的常用配伍药对，在众多经典方剂中均有记载3-4。药对配伍可影响药物有效成分溶出，甚至会形成新的化合物，从而产生与单一用药全然不同的效果5-9。研究表明，黄芪和白术配伍会使黄芪的主要活性成分黄芪甲苷的含量显著增加10-11。刘焕蓉等12-13的研究表明：黄芪与白术、防风的配伍比例会影响黄芪中黄芪甲苷、槲皮素和芒柄花素等成分的溶出率。高丽等14研究发现：加入白术后黄芪醇提液中的 4 种黄酮类成分有不同程度的下降。本研究采用 HPLC 法测定黄芪水煎剂中毛蕊异黄酮苷、毛蕊异黄酮、芒柄花苷和刺芒柄花素的含量，系统探究了黄芪-白术的配伍比例对黄芪黄酮类成分的溶出率的影响，以期揭示黄芪-白术药对在不同复方中药效物质基础与药效作用的相关关系。1材料与方法1.1仪器Agilent 1260 Infinity II 高效液相色谱仪（美国Agilent 公司）；ME204E 电子天平（瑞士 MettlerToledo 公司）；FD-1C-50 冷冻干燥机（上海比郎仪器制造有限公司）；KQ5200E 型超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；Centrifuge 5810R 冷冻离心机（德国 Eppendorf 公司）；纯水仪（Milli-Q，美国 Millipore 公司）；YJD20D-CL 自动煎药机（北京东华原医疗设备有限责任公司）。1.2药品与试剂试验用的黄芪饮片（产地内蒙古，批号20210630）购自绍兴市众泰医药药材有限公司，白术饮片（产地浙江，批号 20210623）购自嵊州瑞元堂中药有限公司，经嵊州市中医院主任药师汪苏英鉴定，它们均为符合 2020 年版 中华人民共和国药典：一部 的中药饮片。对照品毛蕊异黄酮苷（批号 939975，纯度98%）购于北京百灵威科技有限公司，毛蕊异黄酮(批号 C123665，纯度98%)、芒柄花苷（批号 O138900，纯度97%）和刺芒柄花素（批号 F111388，纯度98%）均购于上海阿拉丁生化科技股份有限公司。乙腈、甲醇为色谱纯；甲酸为试剂纯；水为超纯水。1.3溶液制备1.3.1混合对照品溶液的制备精密称取对照品适量，加甲醇溶解，混匀，制成毛蕊异黄酮苷、毛蕊异黄酮、芒柄花苷和刺芒柄花素浓度分别为 0.172、0.078、0.041、0.029mg mL-1的混合对照品溶液。1.3.2试供品溶液的制备取黄芪 60 g，分别与 0、30、60、90、120 g 白术配伍，使黄芪-白术质量比为 10，21，1丽 水 学 院 学 报2023 年581，23，12，加 1 000 mL 水浸泡 30 min，120 煎制 45 min，最后加水定容至 1 000 mL；取 20 mL上述水煎液冷冻干燥，加入 4 mL 水溶解，12 000r/min 离心 15 min，取上清液，微孔滤膜过滤，制成试供品溶液。1.4色谱条件Dikma Diamonsil Plus C18 色谱柱（250 mm4.6 mm，5 m）；流动相为 0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）；梯度线性洗脱（05 min，2%10%B；535 min，10%35%B；3550 min，35%60%B；5055 min，60%95%B；5562 min，95%2%B）；流速 1 mL min-1；检测波长 254 nm；柱温25；进样量 10 L。2结果2.1系统适应性试验分别精密吸取“1.3.1”项下混合对照品溶液和“1.3.2”项下黄芪-白术质量 11 的试供品溶液，按“1.4”项下色谱条件进样，记录色谱图，见图1，毛蕊异黄酮、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、刺芒柄花素依次出峰，且分离效果良好。（A）对照品（B）黄芪-白术质量比为 11 配伍的试供品注：1.毛蕊异黄酮苷；2.芒柄花苷；3.毛蕊异黄酮；4.刺芒柄花素。图 1对照品和黄芪-白术质量比为 11 配伍的试供品的 HPLC 谱图2.2线性关系考察分别精密量取“1.3.1”项下混合对照品溶液1、5、10、15、20、25、30 L 进样测定，记录峰面积。以待测成分质量浓度（X，mg mL-1）为横坐标，以峰面积（Y）为纵坐标，做线性回归，得回归方程、线性范围，见表 1。表 14 种黄酮类成分的回归方程和线性范围成分回归方程r线性范围/g毛蕊异黄酮苷Y=2 602.96X+101.840.999 70.1415.080毛蕊异黄酮Y=4 380.96X+34.560.999 90.0722.348芒柄花苷Y=3 310.70X+14.700.999 90.0381.234刺芒柄花素Y=5 016.43X+12.980.999 90.0270.8732.3精密度试验精密量取“1.3.1”项下混合对照品溶液，按照“1.4”项色谱条件，连续进样 6 次，记录 4 种黄酮类成分的峰面积。计算得到毛蕊异黄酮苷、毛蕊异黄酮、芒柄花苷和刺芒柄花素的峰面积 RSD 分别为 0.60%、0.57%、0.57%、0.64%，结果表明仪器精密度良好。2.4稳定性试验取“1.3.2”项下的黄芪-白术质量比为 11的试供品溶液，室温下放置，并分别于 0、2、4、8、峰高/mAU峰高/mAUt/mint/min1 4001 2001 000800600400200010203040506001020304050600102030405060132412346 0005 0004 0003 0002 0001 000王建业，王露莹，沃 静：不同配伍比例黄芪-白术水煎剂中黄芪黄酮溶出规律的研究第 2 期5916、24 h 后按照“1.4”项色谱条件进行测定，分析峰面积并分析，结果显示：毛蕊异黄酮苷、毛蕊异黄酮、芒柄花苷和刺