组培快繁生产技术实训指导_张娟主编.pdf

ZUPEI KUAIFANSHENGCHAN JISHU张娟主编责任编辑周淑芸封面设计玖月责任印制李宗妮地址银川市北京东路 139 号出版大厦（750001）网址http：/网上书店http：/www.hh-电子信箱邮购电话0951-5052103经销全国新华书店印刷装订宁夏雅昌彩色印务有限公司印刷委托书号（宁）0014929组培快繁生产技术张娟主编图书在版编目（CIP）数据组培快繁生产技术/张娟主编.银川：宁夏人民出版社，2014.5ISBN 978-7-圆圆苑原园5761-1陨.淤组陨陨.淤张III.淤植物组织组织培养IV.淤Q943.1中国版本图书馆 CIP 数据核字（2014）第 093137 号黄河出版传媒集团宁 夏 人 民 出 版 社出版发行开本787mm伊员092mm1/32印张1.75字数40 千字印数2000 册版次2014 年 5 月第 1 版印次2014 年 5 月第 1 次印刷书号ISBN 978-7-227-05761-1/S 332定价9.00 元版权所有侵权必究宁夏农业学校国家中等职业教育改革发展示范学校建设项目教材编写委员会主任：赵晓瑞副 主 任：陈冲刘进莱惠玲安青范为群委员：杨东玲李银春宋伶英韩立兵张涛马学礼冯丽白桦唐虎利赵娜卢潇张黎魏晓明吴志红朱晓江编委会办公室主任：范为群副 主 任：宋伶英组培快繁生产技术主编：张娟参编人员：詹虹前言2012 年 6 月，宁夏农业学校获教育部、财政部、人社部三部委批复立项建设国家中等职业教育改革发展示范学校。两年来，作为宁夏回族自治区级中等农业职业学校，学校紧紧把握机遇，秉承、光大“尚农、诚朴、强技”的校训和“德育为本学做人，技能为用会做事”的育人理念，全校上下凝心聚力，以农业职业人之执着、诚朴的精神，凝练办学特色，在政、行、企的大力支持下，在两年的建设期内顺利完成各项建设任务，取得了丰硕成果，极大地提升了学校的办学实力和水平。这套校本教材和实训指导的出版，既是学校示范校人才培养模式和课程体系改革的成果之一，又是学校多年来对农业职业技能人才培养和课程体系改革实践的承载与积淀，也是校企在专业与需求、课程与职业标准、教学与生产“三对接”实践的体现。成果付梓之日，适逢十八届三中全会以来国家部署加快发展现代职业教育和自治区党委、人民政府关于加快发展现代职业教育的意见 的出台之时。职业教育的改革发展迎来新的1机遇，这对我们培养现代农业职业技能人才的使命和责任提出了新要求，赋予了新内涵。本套书为自治区级中等农业职业学校改革发展成果，创新探索因素固存，错误疏漏之处难免，敬请读者批评指正，以促提升。编委会2014 年 3 月2目录实训项目卡 11实训一植物组织培养室参观与设计2实训项目卡 27实训二常用仪器、必要器皿、几种主要设备的使用方法8实训项目卡315实训三植物组织培养实验室卫生与灭菌16实训项目卡 418实训四MS 培养基母液的配制与保存19实训项目卡 523实训五MS 培养基制备和灭菌24实训项目卡 627实训六外植体的选择、预处理和灭菌28实训项目卡 730实训七无菌操作技术3112实训项目卡 834实验八菊花茎段培养35实训项目卡 937实验九微茎尖脱毒培养38实训项目卡 1040实训十试管苗的驯化与移栽41实训项目卡1143实训十一生产计划与成本核算44实训项目卡1245实训十二马铃薯脱毒快繁技术46实训项目卡 1348实训十三秋海棠叶片快繁49实训项目卡 1450实训十四葡萄组培快繁51实训项目序号1实训项目名称植物组织培养室参观与设计课程名称组培快繁生产技术计划学时数2实训目的及要求通过参观，使学生掌握如何组建植物组织培养实验室；同时，熟悉组培中涉及的各种仪器设备和器皿用具。备注主要实训设备专用设备：主要设备名称型号规格数量设备性质主要实训材料材料名称单位型号规格数量消耗额/组材料性质每组人数6实际学时2实训项目卡 11组培快繁生 产 技 术ZUPEI KUAIFANSHENGCHAN JISHU实训一植物组织培养室参观与设计一、目的和要求通过参观，使学生掌握如何组建植物组织培养实验室；同时，熟悉组培中涉及的各种仪器设备和器皿用具。二、仪器与用具仪器：超净工作台、空调机、蒸馏水发生器或纯水发生器、高压灭菌锅、普通冰箱、电炉、显微镜、天平、恒温培养箱、烘箱等设备。用具：各种培养皿、各种实验器皿和各种器械用具。三、方法步骤（一）实验室组成1.指导老师集中介绍组织培养实验室守则及有关注意事项2.指导老师讲解本次实验的目的、仪器设备和器皿用具的名称及实验步骤3.指导老师逐一讲解组培实验室的构建情况包括准备室（又称化学实验室）、缓冲室、无菌操作室、培养室、驯化室、温室等使用的各种仪器设备和器皿用具的名2称、用途。（1）准备室（化学实验室）。面积：20 m2左右。用途：器皿洗涤、培养基配置、分装、高压灭菌、植物材料的预处理、重蒸馏水的制备以及进行生理、生化因素的分析，试管苗出瓶，清洗及整理工作。要求：明亮、通风。设备：工作台、橱柜、水池、仪器、药品等遥（2）缓冲室。面积：3耀5 m2。用途：进入无菌室前需在缓冲室里换上经过灭菌的工作服、拖鞋，戴上口罩。设备：1 盏紫外灯、1 个配电板、时控器等。（3）无菌操作室（无菌室，接种室）。面积：10耀20m2，视生产规模和超净工作台数量而定。用途：材料的灭菌接种，无菌材料的继代，丛生菌的增殖或切割，嫩枝扦插生根等，是关键的部分，关系到培养物的污染率、接种工作效率等重要指标。要求：干爽安静、清洁明亮，墙壁光滑平整不易积染灰尘，地面平坦无缝便于清洗和灭菌。门窗要密闭，一般用移动门窗。设备：超净工作台、空调机、医用小平车、操作台、搁架等。实训一植物组织培养室参观与设计3组培快繁生 产 技 术ZUPEI KUAIFANSHENGCHAN JISHU（4）培养室。面积：视培养架多少及培养物数量而定。用途：将接种到培养瓶等器皿中的植物材料进行培养的场所。设备：淤培养架与灯光。培养架数目多少视生产规模而定，年产4 万耀10 万苗需 4耀6 个培养架；年产 10 万耀20 万苗需 8耀10 个培养架。每个培养架一般 6 层，总高度 2 m，每 0.3 m 为一层，最下一层距离地面 0.2 m；架宽以 0.6 m 为好；架长以 40W 日光灯的长度来决定，即约 1.26 m。每层架子安装 2 盏日光灯。于通风设备在稍高处设置进风气窗，在其对侧近天花板处设置排风窗。盂边台、空调机、加湿器（除湿器）、各类显微镜、温湿度计。（5）驯化室。面积：视生产规模而定。用途：组培苗（试管苗）移栽前进行炼苗。要求：清洁无菌。设备：空调机、加湿器、恒温恒湿控制仪、喷雾器。4（6）温室。面积：视生产规模而定。用途：保证试管苗不分季节地常年生产。设备：温度控制装置、通风口、喷雾装置、光照调节装置、杀菌杀虫工具及相应药物。（二）实验室设计常见实验室设计，如下图遥基本实验室布局平面图4.0m4.5m3.0m3.5m搁 水槽架冰 箱搁架实验台电炉准备室药品及仪器柜无菌台无菌台无菌室搁拉窗培养架培养架架 培养室培养架培养架缓冲室门实训一植物组织培养室参观与设计5组培快繁生 产 技 术ZUPEI KUAIFANSHENGCHAN JISHU四、实训报告1.每个人设计一个植物组织培养实验室的组建方案（可用CAD 软件或 WORD 软件）。2.将本次实训内容整理成实训报告。3.实验中的问题及解决方法。6实训项目卡 2实训项目序号2实训项目名称常用仪器、必要器皿、几种主要设备的使用方法课程名称组培快繁生产技术计划学时数2实训目的及要求掌握植物组织培养必需的仪器、器皿、几种主要设备的使用方法，几种常用药剂的配制。备注主要实训设备专用设备：主要设备名称型号规格数量设备性质主要实训材料材料名称单位型号规格数量消耗额/组材料性质每组人数6实际学时27组培快繁生 产 技 术ZUPEI KUAIFANSHENGCHAN JISHU实训二常用仪器、必要器皿、几种主要设备的使用方法一、目的和要求掌握植物组织培养必需的仪器、器皿、几种主要设备的使用方法，几种常用药剂的配制。二、常用仪器（一）蒸馏水器（学习操作）8（二）手提式高压消毒锅、立式高压消毒锅（学习使用、操作）（三）天平1.药物天平（工业天平）、粗天平（精密度 1/10）2.扭力天平（精密度 1/100）3.分析天平（精密度 1/10000）（四）超净工作台（学习、使用、操作）实训二常用仪器、必要器皿、几种主要设备的使用方法9组培快繁生 产 技 术ZUPEI KUAIFANSHENGCHAN JISHU（五）电热干燥箱（烘箱）（六）恒温光照培养箱（学习、操作）（七）电冰箱（八）显微镜和解剖镜1.手提式解剖镜（学习、使用、操作）2.立体解剖镜3.普通显微镜10目镜观察头标本压片调焦机构开关物镜物镜转换器载物台聚光镜及光栏光源（九）酸度测定仪1.精密 pH47 试纸2.笔型袖珍酸度计三、必要的器皿（一）玻璃器皿1.培养器皿试管、三角烧瓶（锥形瓶）、玻璃组培瓶、培养皿、扁身培养瓶、凹面载玻片。2.盛装器皿试剂瓶、烧杯。3.计量器皿量筒、容量瓶、吸管。实训二常用仪器、必要器皿、几种主要设备的使用方法11组培快繁生 产 技 术ZUPEI KUAIFANSHENGCHAN JISHU4.其他器皿滴瓶、称量瓶、漏斗、玻璃管、注射器等实验室常用器皿。（二）金属器械1.镊子类（员）20耀25 cm 长形镊子（接种或转移愈伤组织）。（圆）尖端弯曲“枪形”镊子（镊取较小的植物组织）。（猿）尖头钟表镊子和鸭嘴镊子（剥离表皮用）。（源）尖端为小铲状镊子（挖取带琼脂培养基的培养物）。2.解剖刀和刀类（员）眼科用刀、种牛痘疫苗的菱形刀。（切割柔软组织中小细胞团）（圆）解剖刀（手术刀）。（猿）双面刀片焊接在玻棒上（切取茎尖用）。（源）锋利小刀、大刀和小铁锹。3.剪刀类解剖剪、眉剪、眼科剪、18耀25 cm 弯头剪、修枝剪。4.接种针四、几种常用药剂的配制（一）尝试用无水乙醇配制不同浓度的酒精学习配制 70%和 75%的酒精浓度。（二）消毒剂1.20%次氯酸钠溶液称取 20 g 次氯酸钠用少许水溶解，100 ml 水定容。122.0.1%升汞（HgCl2）溶液称取 0.1g HgCl2用少许水溶解，100 ml 水定容。（三）洗涤剂1.HCl 酒精100 ml 95%酒精加入 2 ml HCl。2.硫酸原重铬酸钾洗液称取 10 g 重铬酸钾加入蒸馏水 90 ml，加热溶解冷却后，逐渐加入浓硫酸 175 ml，放入棕色玻璃瓶备用。（注意：切记不可将盛过酒精、甲醛等药剂的玻璃器皿直接泡入洗液，因为重铬酸钾是一种强的氧化剂，一旦被还原氧化，洗液会变绿，失去洗涤作用。这些器皿必须用自来水冲洗干净并晾干再浸入洗液。）（四）1 摩尔浓度（mol/L）NaOH 和 1 摩尔浓度（mol/L）HCl 配制摩尔浓度是指用 1 升（1000 ml）溶液中所含溶质的分子量数来表示的溶液的浓度。用 M 表示。1.NaOH 摩尔浓度（M）NaOH 摩尔质量=分子克数=40 g1M NaOH 是指 1000 ml 溶液中含有 40 g 摩尔质量的NaOH，现要配制 100 ml 1M NaOH，应称取 NaOH4 g，用少量蒸馏水溶解，定容至 100 ml。2.HCl 摩尔浓度具体配制酸的摩尔浓度时，应考虑原浓酸的比重。V=要求配制的 mol伊浓度需配制的体积伊原酸分子量原酸的百分浓度伊原酸的比重配制 1.0 M HCl 100 ml，量取 38%、比重为 1.19 的实训二常用仪器、必要器皿、几种主要设备的使用方法13组培快繁生 产 技 术ZUPEI KUAIFANSHENGCHAN JISHUHCl 8.06 ml 加蒸馏水，定容至 100 ml。五、实训报告1.将本次实训内容补充完成，完成实训报告。2.计算配制 75%酒精，需要酒精多少毫升、蒸馏水多少毫升。14实训项目卡 3实训项目序号3实训项目名称植物组织培养实验室卫生与灭菌课程名称组培快繁生产技术计划学时数2实训目的及要求掌