［基金项目］国家自然科学基金面上项目(81972920);贵州省自然科学基金(黔科合基础-ZK〔2022〕一般449，黔科合基础-ZK〔2022〕一般413)［作者单位］1.贵州医科大学，贵州贵阳550025;2.贵州医科大学附属医院皮肤科，贵州贵阳550004［通信作者］陆洪光，E-mail:hongguanglu@hotmail.com［网络首发时间］2022-12-0512∶22［网络首发地址］https://kns.cnki.net/kcms/detail//61.1197.Ｒ.20221202.1446.005.html2023年3月第37卷第3期Mar.2023，Vol．37，No．3265http://pfxbxzz.paperopen.com视蛋白3调控人真皮成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白生成牟慧玲1，2，曾雯2，董仙2，汪宇2，张伟2，冯江龙2，兰应华2，罗欢欢2，叶藤2，陆洪光2［摘要］目的研究视蛋白3在正常人真皮成纤维细胞中对Ⅰ型胶原蛋白生成的影响及其可能的机制。方法取小儿包皮真皮成纤维细胞分离、培养、传代，至3～5代，用荧光定量PCＲ、蛋白免疫印迹分别检测视蛋白1～5的表达，细胞免疫荧光检测视蛋白3及Ⅰ型胶原蛋白表达及定位。设计针对人视蛋白3的小干扰ＲNA，利用脂质体转染入正常人真皮成纤维细胞，分别用荧光定量PCＲ、蛋白免疫印迹检验视蛋白3抑制效率。成功下调视蛋白3后，用荧光定量PCＲ、免疫印迹法、酶联免疫吸附测定及细胞免疫荧光检测Ⅰ型胶原蛋白表达变化;通过CCK-8及EDU检测细胞增殖活力，流式细胞仪检测细胞周期，Transwell检测细胞迁移能力;通过蛋白免疫印迹法检测PI3K、AKT及磷酸化蛋白p-PI3K、p-AKT的表达情况。最后抑制通道蛋白AKT的磷酸化，通过蛋白免疫印迹法检测Ⅰ型胶原蛋白表达变化。结果视蛋白1～5均在正常人真皮成纤维细胞中表达，其中视蛋白3基因及蛋白表达水平较其他视蛋白表达高，差异有统计学意义(P＜0.05)。下调正常人真皮成纤维细胞中视蛋白3后，细胞合成及分泌Ⅰ型胶原蛋白水平降低，差异有统计学意义(P＜0.05);细胞增殖、迁移能力减弱，差异有统计学意义(P＜0.05);细胞周期中S期比例明显降低，差异有统计学意义(P＜0.05);磷酸化蛋白p-PI3K、p-AKT的蛋白表达水平被明显抑制;抑制通路蛋白AKT的活化后，细胞合成Ⅰ型胶原蛋白水平降低。结论视蛋白3参与调控正常人真皮成纤维细胞中Ⅰ型胶原蛋白的合成，可能是创伤愈合、纤维化相关疾病及医疗美容潜在的治疗靶点。［关键词］视蛋白3;成纤维细胞;Ⅰ型胶原蛋白［中图分类号］Ｒ751;Ｒ622［文献标志码］A［文章编号］1001－7089(2023)03－0265－08［DOI］10．13735/j．cjdv．1001-7089．202206150Opsin3Ｒegulating...
