三七与丹参合剂对大鼠疼痛变化的影响_付立波.pdf

7Gao Y，Zhang Y，Fan Y.Eupafolin ameliorates lipopolysaccharide-in-duced cardiomyocyte autophagy via PI3K/AKT/mTO signaling path-way J Iran J Basic Med Sci，2019;22(11):1340-6.8Zhu H，Wang D，Zhang L，et al Upregulation of autophagy by hypoxi-a-inducible factor-1 promotes EMT and metastatic ability of CD133+pancreatic cancer stem-like cells during intermittent hypoxia J On-col ep，2014;32(3):935-42.9Sun Z，Xu Q，Gao G，et al Clinical observation in edaravone treatmentfor acute cerebral infarction J Niger J Clin Pract，2019;22(10):1324-7.10王玲，王袁，黄超，等 依达拉奉对间歇低氧大鼠神经细胞 Apaf1、Survivin 蛋白表达及认知功能的影响 J 中国老年学杂志，2022;42(15):3757-6011刘瑶，刘俊杰，吴寅秋，等.依达拉奉对蛛网膜下腔出血大鼠海马区神经元自噬及凋亡的影响 J 中国老年学杂志，2019;39(2):378-81.2021-10-20 修回(编辑王一涵)三七与丹参合剂对大鼠疼痛变化的影响付立波王一冰朱妮娜王紫怡(长春师范大学生命科学学院，吉林长春130032)摘要 目的探究不同浓度的三七与丹参合剂对大鼠疼痛变化的影响。方法选取 8 只大鼠，适应性训练后第 1天 8 只大鼠灌胃生理盐水，用热板与压板测痛仪测定灌胃前及灌胃后 5、10、15、20、30、45、60 min 后爪缩爪反应潜伏期(HWL)，作为对照组数据。适应性训练后第 2 天 8 只大鼠灌胃 20 95 mg/ml 三七与丹参合剂，用热板与压板测痛仪测定灌胃前及灌胃后 5、10、15、20、30、45、60 min HWL，作为低剂量组数据。适应性训练后第 3 天 8 只大鼠灌胃 41 90 mg/ml 三七与丹参合剂，同上方法测定灌胃后不同时间点 HWL，作为中剂量组数据。适应性训练后第 4 天 8 只大鼠灌胃 62 85 mg/ml 三七与丹参合剂，同上方法测定灌胃后不同时间点 HWL，作为高剂量组数据。正常大鼠在大鼠足底注射鹿角菜溶液制备炎症模型大鼠，同上方法在 5、10、15、20、30、45、60 min 时用热板与压板测痛仪进行测试，观察并记录 HWL。结果与灌胃生理盐水的大鼠相比，用三七与丹参合剂灌胃后的大鼠的 HWL 在 5 30 min 有明显提高，并且在 5 min 时效果最明显(P0.05)。结论三七与丹参合剂对大鼠具有一定的消炎止痛作用，三七与丹参合剂参与大鼠的痛觉调节。关键词 三七;丹参;痛觉中图分类号 Q423 文献标识码 A 文章编号 1005-9202(2023)03-0664-04;doi:10.3969/j.issn.1005-9202.2023.03.040基金项目:吉林省科学技术厅自然科学基金项目(20200201110JC);吉 林 省 教 育 厅“十 三 五”科 学 技 术 项 目(JJKH20200826KJ);长春师范大学自然科学基金项目(长师大自然合字 2019 第 011 号)通信作者:朱妮娜(1980-)，女，讲师，硕士，主要从事天然药物提取及其生理机制研究。第一作者:付立波(1965-)，男，教授，硕士生导师，博士，主要从事基础生理学与神经生物学研究。三七有效成分提取物三七皂苷可修复受损的神经元1，而三七皂苷有 1、2、4、6 等物质2。丹参根及根茎有活血化瘀、安神养血、清心除烦等功能3，4，丹参中主要成分是丹参酮，丹参酮可阻止男性激素产生，减少皮脂产生，减轻由细菌引发的炎症疾病5，具有活血化瘀、改善微循环的作用，并且丹参酮对多种革兰阳性球菌抗菌感染有良好的抑制作用6，7，因此市场需求量大，开发利用价值高8，9。我们前期10，11研究发现，单体三七水煮液对大鼠有镇痛作用，而与丹参合剂对雄性正常大鼠和炎症大鼠痛觉变化的影响研究，在国内外尚未见报道，为了进一步验证三七与丹参中药合剂对大鼠的痛觉调节作用，本试验采用灌胃及行为药理学等方法，观察与记录不同浓度的三七与丹参合剂对大鼠痛觉变化的影响，为三七与丹参合剂在临床上镇痛应用提供理论依据，同时也为临床中药在镇痛方面的研究与开发提供了新的思路。1材料与方法1.1实验动物8 只雄性大鼠购于吉林大学试验动物中心，每个大鼠单独饲养，自由进食喝水，正常光照，温度 21 25。1.2药品主要成分为丹参与三七胶囊，购于长春市康爱大药房。将丹参与三七胶囊称量后置于瓷缸中，隔水加热制备成母液，之后用母液来配 制20.95、41.90、62.85 mg/ml 的丹参与三七的合剂。1.3主要仪器智能热板仪(型号为 YLS-3E)、电子压痛仪(型号为 YLS-6B)，均由安徽省正华生物仪器设备有限公司提供;灌胃针(型号为:810216)由上海化科实验器材有限公司提供。1.4大鼠疼痛实验1.4.1正常大鼠疼痛实验在进行行为学实验之466中国老年学杂志 2023 年 2 月第 43 卷前对雄性正常大鼠进行为时 7 d 的热板和压板致痛适应性训练。适应性训练后第 1 天 8 只大鼠灌胃生理盐水，用热板与压板测痛仪测定灌胃前及灌胃后5、10、15、20、30、45、60 min 后爪缩爪反应潜伏期(HWL)，作为对照组数据。适应性训练后第 2 天 8只大鼠灌胃 20 95 mg/ml 三七与丹参合剂，用热板与压板测痛仪测定灌胃前及灌胃后 5、10、15、20、30、45、60 min HWL，作为低剂量组数据。适应性训练后第 3 天 8 只大鼠灌胃 41 90 mg/ml 三七与丹参合剂，同上方法测定灌胃后不同时间点 HWL，作为中剂量组数据。适应性训练后第 4 天 8 只大鼠灌胃62 85 mg/ml 三七与丹参合剂，同上方法测定灌胃后不同时间点 HWL，作为高剂量组数据。1.4.2炎症大鼠疼痛实验在进行行为学实验前3 4 h，在每只大鼠的左侧足皮下注射新配制的2%鹿角菜溶液作为致炎剂，每只每次注射 0.1 ml。大鼠在注射致炎剂后，脚掌肿胀变红，尾巴开始变黑，几天后个别大鼠还会有断尾现象。致炎剂长时间放置会变性，对实验数值产生影响，每次致炎时都应重新配置。正常大鼠疼痛实验后第 1 天，炎症大鼠建模后，8 只大鼠灌胃生理盐水，用热板与压板测痛仪测定灌胃前及灌胃后 5、10、15、20、30、45、60 minHWL，作为 Y-对照组数据。第 2 天 8 只大鼠灌胃20 95 mg/ml 三七与丹参合剂，用热板与压板测痛仪测定灌胃前及灌胃后 5、10、15、20、30、45、60 minHWL，作为 Y-低剂量组数据。适应性训练后第 3 天8 只大鼠灌胃 41 90 mg/ml 三七与丹参合剂，同上方法测定灌胃后不同时间点 HWL，作为 Y-中剂量组数据。适应性训练后第 4 天 8 只大 鼠 灌 胃62 85 mg/ml三七与丹参合剂，同上方法测定灌胃后不同时间点 HWL，作为 Y-高剂量组数据。1.5疼痛测试1.5.1热板法实验前将热板仪器预热到 52，一只手握住大鼠的身体，另一只手捏住大鼠腿部关节部位使其腿完全伸直，将模型大鼠后爪放置热板上，当其后爪完全与热板面充分接触时，打开开关，待大鼠感到疼痛主动回缩后爪时，关闭开关，此时记录的数据作为大鼠的 HWL。1.5.2压板法使用压力测痛仪对大鼠进行压力测试。将大鼠爪的关节处置于压力测痛仪测痛区域，打开开关，待大鼠感到明显疼痛后爪往回收缩时，关闭开关停止计时，记录大鼠 HWL。1.6统计学分析采用 SPSS16.0 统计学软件进行独立样本 t 检验、单因素方差分析。2结果2 1灌胃丹参和三七合剂对正常大鼠 HWL 的影响低、中、高剂量组灌胃5、10、15、20、30 min 时热板及压板试验 HWL 均显著高于对照组(P005);中、高剂量组灌胃45 min 时压板试验 HWL 均显著高于对照组(P005)。说明丹参和三七合剂对正常大鼠有镇痛作用，且在灌胃后5 min 时效果最佳。见表1。表 1正常大鼠热板与压板 HWL 比较(n=8，xs，s)组别部位热板灌胃前5 min10 min15 min20 min30 min45 min60 min对照组L2.190.162.180.102.200.262.160.182.200.162.170.212.190.222.20.232.270.062.340.082.270.162.270.122.250.162.250.082.290.152.20.12低剂量组L2.200.093.000131)2.900.081)2.810.091)2.660.111)2.420.101)2.210.152.10.152.180.093.000.081)2.930.071)2.800.111)2.500.081)2.340.101)2.150.082.20.12中剂量组L2.170.063.480.061)3.250.051)3.040.131)2.840.101)2.570.101)2.220.202.10.152.190.043.550.101)3.250.081)3.030.091)2.850.141)2.640.101)2.130.162.20.09高剂量组L2.220.103.990.321)3.780.251)3.620.271)3.230.361)2.790.321)2.360.062.160132.170.163.940.631)3.750.581)3.410.661)3.260.451)2.980.241)2.400.112.10.24组别部位压板灌胃前5 min10 min15 min20 min30 min45 min60 min对照组L97.22.3197.285.5796.732.5896.744.2096.303.0894.812.7994.051.8094.762.1997.53.6097.084.4998.293.9695.652.6695.014.4893.203.6595.993.6194.662.48低剂量组L97.92.38124.13.641)119.21.951)111.92.651)107.691.731)103.842.291)96.953.8396.743.1896.71.44121.83.791)119.21.211)115.73.441)105.632.591)102.042.441)97.413.4498.442.80中剂量组L96.61.41148.44.791)137.62.031)124.62.401)117.443.751)111.011.561)101.914.091)98.604.7093.51.20147.255.161)136.71.291)122.83.081)115.462.501)108.693.811)101.564.611)94.162.44高剂量组L98.42.10152.46.561)138.31.871)128.76.641)124.585.381)116.934.191)107.165.261)97.913.1098.81.73155.45.271)151.33.901)143.94.521)137.264.581)128.558.651)106.657.381)99.465.24与对照组比较:1)P0.001;L:左后爪;:右后爪566付立波等三七与丹参合剂对大鼠疼痛