现代生物医学进展biomed.cnjournals.comProgressinModernBiomedicineVol.23NO.1JAN.2023doi:10.13241/j.cnki.pmb.2023.01.002三种固定液对两种氧化应激细胞模型Bclin1和LC3蛋白免疫荧光染色的影响*宗毓麟1于雪1刘畅2刘锦钢1李昱达1汤阳1王淑艳1张淑静1△刘燕1△（1北京中医药大学中医学院北京102488；2北京中医药大学生命科学学院北京102488）摘要目的：比较采用三种不同的固定液对两种氧化应激细胞模型Bclin1和LC3蛋白免疫荧光染色的影响。方法：本研究使用丙酮/甲醇（1:1）固定液、甲醇固定液和4%多聚甲醛三种固定液分别对氧化应激细胞模型大鼠原代心肌成纤维细胞和MCF-7乳腺癌细胞株进行固定，然后再分别进行免疫荧光双染实验，对比三种固定液固定后对自噬关键调控蛋白Bclin1和LC3染色效果。结果：三种固定液对氧化应激细胞模型Bclin1和LC3蛋白免疫荧光染色结果存在较大差异。丙酮/甲醇（1:1）固定液固定后免疫荧光染色效果最佳，细胞结构清晰可见，两种蛋白定位表达清晰，甲醇固定液次之，4%多聚甲醛固定液效果欠佳。结论：在对大鼠原代心肌成纤维细胞和MCF-7乳腺癌细胞进行自噬相关蛋白免疫荧光双染色实验中，在使用其它固定液染色效果不佳的情况下，可以选择应用丙酮/甲醇（1:1）固定液固定，再进行免疫荧光染色；根据不同实验需求相应选择更适宜的固定液，以达到最佳的荧光染色结果。关键词：固定方法；氧化应激；免疫荧光；乳腺癌细胞；心肌成纤维细胞中图分类号：R-33；Q5-3；Q593文献标识码：A文章编号：1673-6273（2023）01-09-05EffectsofThreeKindsofFixativesonImmunofluorescenceStainingofBclin1andLC3ProteinsinTwoHypoxicCellModels*ZONGYu-lin1,YUXue1,LIUChang2,LIUJin-gang1,LIYu-da1,TANGYang1,WANGShu-yan1,ZHANGShu-jing1△,LIUYan1△(1CollegeofTraditionalChineseMedicine,BeijingUniversityoftraditionalChineseMedicine,Beijing,102488,China;2CollegeofLifeSciences,BeijingUniversityofTraditionalChineseMedicine,Beijing,102488,China)ABSTRACTObjective:TocomparetheeffectsofthreedifferentfixationsolutionsonimmunofluorescencestainingofBclin1andLC3proteinsintwohypoxiccellmodels.Methods:Inthisstudy,primarymyocardialfibroblastsandMCF-7breastcancercelllinesofhypoxiccellmodelswerefixedwithacetone/methanol(1:1),methanoland4%paraformaldehyde,respectively,andthendoubleim-munofluorescencesta...
