现代生物医学进展biomed.cnjournals.comProgressinModernBiomedicineVol.23NO.2JAN.2023doi:10.13241/j.cnki.pmb.2023.02.005人源诱导多能干细胞体外定向分化为功能性肝细胞的方法研究*邵文桂1张阳2阮海文2窦金辉2张雪峰2△赵树立1△（1中国药科大学南京市第一医院江苏南京201106；2江苏鼎泰药物研究股份有限公司江苏南京211800）摘要目的：研究开发一种简易、快速在体外使多能诱导干细胞（inducedpluripotentstemcells，iPSCs）定向分化为功能性肝样细胞的培养方法。方法：根据正常肝细胞在体内的发育规律，设计简化诱导方法使iPS细胞定向分化为内胚层细胞，应用qPCR和流式细胞术鉴定其纯度后进一步诱导分化为肝样细胞，并通过qPCR、ELISA、免疫荧光等技术鉴定肝细胞的性状和功能。结果：iPS细胞诱导7天后，OCT4和NANOG的表达水平显著下降，内胚层细胞相关基因CXCR4、FOXA2和HNF4A表达水平明显升高。内胚层细胞继续诱导培养15天后，肝细胞特异性标志基因ALB、TDO2、RBP4、G6PC和肝药酶基因CYPs等显著上调，同时产生高水平的白蛋白和尿素；PAS糖原染色为阳性，能主动摄取和释放吲哚菁绿，证实诱导成的肝样细胞具备正常肝细胞的部分功能。结论：该诱导方案能够在体外使iPS细胞遵循正常肝脏发育通路简易、高效地分化为功能性肝细胞。本研究为大量获得iPS来源的肝细胞及其在细胞疗法和药筛模型中的运用提供了可能性。关键词：多能诱导干细胞；内胚层；定向分化；肝细胞；药筛模型中图分类号：R-33；R329.2文献标识码：A文章编号：1673-6273（2023）02-225-07StudyontheMethodofDirectionalDifferentiationofHumanInducedPluripotentStemCellsintoFunctionalHepatocytesinVitro*SHAOWen-gui1,ZHANGYang2,RUANHai-wen2,DOUJin-hui2,ZHANGXue-feng2△,ZHAOShu-li1△(1NanjingFirstHospital,ChinaPharmaceuticalUniversity,Nanjing,Jiangsu,201106,China;2JiangsuDingtaiPharmaceuticalResearchCo.,LTD.,Nanjing,Jiangsu,211800,China)ABSTRACTObjective:Thisstudyistoresearchanddevelopasimpleandrapidmethodtodirectlydifferentiatetheinducedpluripotentstemcells(iPS)intofunctionalhepatocytesinvitro.Methods:Accordingtothedevelopmentofnormalhepatocytesinvitro,asimplifiedmethodwasdesignedfordifferentiationofiPScellsintoendodermalcells.ThephenotypesofendodermalcellswasidentifiedbyqPCRandflowcytometry,andthenthesecellswerefurther...
