乳制品中AFT_M_1和A..._2的系统适应性试验的验证_牛丽丽.pdf

118 食品安全导刊 2023年1月（上）分析检测乳制品中 AFT M1和 AFT M2的系统适应性 试验的验证牛丽丽（长治市综合检验检测中心，山西长治 046000）摘 要：为了准确测定黄曲霉毒素 M1（AFT M1）和黄曲霉毒素 M2（AFT M2）的含量，本文采用高效液相色谱法对 AFT M1和 AFT M2的系统适应性试验进行了验证。在 0 5 ngmL-1，AFT M1和 AFT M2均呈现良好的线性关系。免疫亲和柱的验证、方法检出限和定量限均符合 GB 5009.242016 规定，AFT M1和 AFT M2的回收率符合 GB/T 274042008 规定。使用该方法对 9 个乳制品进行了测定，发现样品中 AFT M1和AFT M2可准确测得。关键词：黄曲霉毒素；高效液相色谱法；免疫亲和柱；系统适应性试验Validation the System Suitability Test of AFT M1 and AFT M2 in Dairy ProductsNIU Lili(Changzhi Comprehensive Inspection and Testing Center,Changzhi 046000,China)Abstract:In order to determine the content of aflatoxin M1(AFT M1)and aflatoxin M2(AFT M2)accurately,the system suitability test of AFT M1 and AFT M2 was verified by high performance liquid chromatography.AFT M1 and AFT M2 show a good linear relationship within the range of 0 5 ngmL-1.The verification test and the method detection limit and quantitative limit of the immunoaffinity column are in accordance with the provisions of GB 5009.242016.The average recovery rate of AFT M1 and AFT M2,which is in accordance with the provisions of GB/T 274042008.Nine dairy products were measured by this method,and the results showed that AFT M1 and AFT M2 in the samples could be accurately measured.Keywords:aflatoxin;high performance liquid chromatography;immunoaffinity column;system suitability test黄曲霉毒素俗称霉菌毒素，是由不同黄曲霉寄生曲霉产生的次生代谢产物1，由于黄曲霉毒素具有强致癌性，国际癌症研究机构（International Agency for Research on Cancer，IARC）将其列为类致癌物。到目前为止，已经发现 20 多种黄曲霉毒素,主要有黄曲霉毒素 B1、B2、G1、G2、M1、M2 6 种。其中，黄曲霉毒素 M1（AFT M1）和黄曲霉毒素 M2（AFT M2）是黄曲霉毒素 B1和黄曲霉毒素 B2在肝微粒体细胞色素 P450 作用下生成的羟基化代谢物2。本文主要对新修订的标准 GB 5009.2420163中液相色谱法的系统适应性试验进行了验证，确保本检验检测机构能够准确对乳制品中 AFT M1和 AFT M2进行测定。1 材料与方法1.1 材料与试剂灭菌乳、发酵乳、乳粉均购自长治市金威超市；AFT M1和 AFT M2溶液标准物质，阿杰泰克公司；乙腈、甲醇均为色谱纯，美国马自达公司；其他试剂均为分析纯。1.2 仪器与设备LC-20A 高效液相色谱仪（荧光检测器），岛津公司。1.3 试验方法1.3.1 样品前处理样品提取按照 GB 5009.242016 中 12.1 进行操作者简介：牛丽丽（1987），女，山西长治人，硕士，助理工程师。研究方向：食品安全检测。DOI:10.16043/ki.cfs.2023.01.057Jan.2023 CHINA FOOD SAFETY 119分析检测作；样品净化按照免疫亲和柱说明书进行操作。1.3.2 标准溶液的制备分别准确吸取 AFT M1和 AFT M2溶液标准物质各1 mL，共置于 100 mL 容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，即得 100 ngmL-1混合标准使用液。分别精密量取上述混合标准使用液 25 L、50 L、50 L、100 L、500 L、100 L、200 L 和 500 L，各置于 250 mL、250 mL、100 mL、100 mL、100 mL、10 mL、10 mL 和10 mL 容量瓶中，用初始流动相稀释至刻度，摇匀。1.3.3 色谱条件色谱柱：C18柱；流动相：A相为水，B相为乙腈-甲醇（50+50）；等梯度洗脱条件：A 70%，B 30%；流速：1.0 mLmin-1；柱温：40；波长：激发波长360 nm，发射波长 430 nm；进样量：50 L。2 结果与分析2.1 标准曲线的线性和工作范围按 1.3.2 中的操作进行测定，以 AFT M1 和 AFT M2的浓度为横坐标（x），峰面积为纵坐标（y）绘制标准曲线。在 0 5 ngmL-1呈现良好的线性关系，AFT M1 的线性方程为 y=3 582 690 x+15 840.9，r=0.999 8，AFT M2 的 线 性 方 程 为 y=6 777 570 x+32 434.1，r=0.999 9，符合 GB/T 2740420084中验证方法相关系数不应低于 0.99 的规定。2.2 柱容量、柱回收率、交叉反应率验证每个批次的免疫亲和柱在使用前均需进行质量验证，包括柱容量、柱回收率以及交叉反应率的验证。按 GB 5009.242016 规定的操作进行测定，得到同一批次3根免疫亲和柱的AFT M1含量（111.3 ng、109.2 ng、111.0 ng）和AFT M2含量（105.6 ng、104.6 ng、105.4 ng）均 80 ng，说明该免疫亲和柱符合同时测定样品中 AFT M1和 AFT M2含量的使用要求。2.3 方法检出限和定量限按照 GB 5009.242016 对灭菌乳和乳粉的检出限和定量限进行测定。由表 1 可以得到，灭菌乳和乳粉的检出限信噪比均大于 3，定量限的信噪比均大于 10，满足试验测定要求。表 1 检出限和定量限的确认样品类型项目黄曲霉毒素信噪比 S/N灭菌乳检出限AFT M13.5AFT M24.6定量限AFT M112.7AFT M229.1乳粉检出限AFT M14.2AFT M24.1定量限AFT M110.1AFT M216.02.4 回收率从表 2 中可以看出，样品中 AFT M1添加浓表 2 AFTM1回收率分析加标浓度/gkg-1序号 称样量/g峰面积加标量/ng空白值/ng 测得量/ng 回收率/%平均回收率/%RSD/%0.012 514.116 9186 5690.0500.047 795.31947.724.032 7169 0170.042 885.5134.025 2196 6850.050 5100.9544.011 4172 4720.043 787.4454.005 1201 9600.051 9103.9064.020 7182 6080.046 593.100.250 014.110 53161 5921.0000.878 087.80932.924.120 73 411 1530.947 794.7734.032 43 421 0300.950 595.0544.041 33 330 2120.925 192.5154.021 83 373 4780.937 293.7264.110 83 388 3670.941 394.130.500 014.002 66 493 9662.0001.808 290.41892.824.121 86 504 2741.811 190.5534.015 46 159 2591.714 885.7444.110 96 154 7071.713 585.6754.113 86 563 9271.827 791.3964.001 56 412 2561.785 489.27120 食品安全导刊 2023年1月（上）分析检测度 在 0.012 5 0.500 0 gkg-1，平 均 回 收 率 为89%94%，准确度良好；同时做3水平6平行实验，RSD 为 2.8%7.7%，重复性良好。从表 3 中可以看出，样品中 AFT M2添加浓度 在 0.006 25 0.500 00 gkg-1，平 均 回 收 率 为79%87%，准确度良好；同时做3水平6平行实验，RSD 为 1.8%7.7%，重复性良好。回收率和 RSD均满足 GB/T 274042008 对验证试验的要求。表 3 AFTM2回收率分析加标浓度/gkg-1序号称样量/g峰面积加标量/ng 空白值/ng 测得量/ng 回收率/%平均回收率/%RSD/%0.006 2514.116 9173 7490.02500.020 983.40797.724.032 7179 5330.021 786.8234.025 2156 8940.018 473.4544.011 4160 5670.018 975.6254.005 1155 2240.018 172.4764.020 7173 6530.020 883.340.250 0014.110 56 121 4521.00000.898 489.84871.824.120 75 957 2080.874 287.4234.032 45 893 3190.864 786.4744.041 35 844 4010.857 585.7554.021 85 845 8050.857 785.7764.110 85 880 9190.862 986.290.500 0014.002 611 483 0792.00001.689 584.47833.424.121 811 553 5551.699 984.9934.015 410 856 6541.597 179.8544.110 910 816 9021.591 279.5654.113 811 638 9401.712 585.6264.001 511 588 8121.705 185.252.5 不同样品中 AFT M1和 AFT M2的测定分别对灭菌乳、发酵乳、乳粉各 3 种进行测定，所有样品中的 AFT M1和 AFT M2均未检出（含量均低于方法检出限）。从侧面说明了乳制品市场的稳定性，同时为广大消费者提供了参考。3 结论不同动物以牛奶中的 AFT M1 含量最高5，同时各种乳制品又是深受广大消费者喜爱的一类食品，考虑到黄曲霉毒素的强致癌性，GB 276120176规定了乳制品中 AFT M1的限量为 0.5 gkg-1。食品新项目扩项工作要求满足检测标准 GB/T 274042008 项下的要求，本文通过对新修订的标准 GB 5009.24 2016 中 液 相 色 谱 法 的 系 统 适 应 性 试 验 方 法 进行了验证，在本检验机构检验条件下，测得该方法具有良好的准确度、精密度和重复性。在 0 5 ngmL-1AFT M1 和 AFT M2均呈现良好的线性关系。柱验证试验证明该免疫