乳白肉芝软珊瑚Sarcop...的西松烷二萜及生物活性研究_吴敏.pdf

年 月第 卷第 期.，.，收稿日期 基金项目 海南省重点研发计划项目（）；国家自然科学基金项目（）；农业农村部财政专项（）通信作者曾艳波，副研究员，硕士生导师，研究方向为海洋天然产物，：（），：；戴好富，研究员，博士生导师，研究方向为天然产物化学，：（），：作者简介 吴敏，硕士研究生，：乳白肉芝软珊瑚 的西松烷二萜及生物活性研究吴敏，周开兵，戴好富，曾艳波，（海南大学 园艺学院，海南 海口；中国热带农业科学院 热带生物技术研究所海南省海洋生物资源功能性成分研究与利用重点实验室，海南 海口；中国热带农业科学院 湛江实验站，广东 湛江）摘要 综合运用各种色谱手段，分离纯化了乳白肉芝软珊瑚 的化学成分。结合波谱数据、文献数据对比和理化性质等，从中共分离鉴定了 个西松烷型二萜类化合物，分别是 （）、（）（）、（）、（）、（，），（）、（）、（）（）、（）和 （），其中化合物 为新化合物。生物活性测试结果表明，化合物 显示出微弱乙酰胆碱酯酶抑制活性，化合物 对肿瘤细胞 具有微弱的细胞毒活性。关键词 软珊瑚；化学成分；西松烷型二萜；细胞毒活性 ，（，；，；，），（），（）（），（），（），（，），（），（），（）（），（），（），；：.软珊瑚因其独特的生存环境，每年都会有许多结构新颖或者生物活性显著的化合物从中分离出来，一直以来在海洋天然产物的研究中备受青睐。肉芝软珊瑚属 属于软珊瑚目 年 月第 卷第 期.，.，软珊瑚科，是分布最广的软珊瑚之一，在软珊瑚的天然产物研究中也占据着重要的地位。等对 年至年 属软珊瑚的化学成分及其生物活性进行了综述，其次生代谢产物具有化学多样性，除了脂肪酸、甾醇、倍半萜等，还富含二萜；代谢产物也表现出广泛的生物活性，如抗肿瘤、抗糖尿病、抗炎、抗菌等，被认为是具有生物活性的天然产物的储藏库。年二萜 从乳白肉芝软珊瑚 中被分离得到，揭示了肉芝软珊瑚属二萜类化合物研究的开端。因新颖的结构和显著的药理活性，二萜的研究一直备受青睐。在肉芝软珊瑚属二萜化合物中，西松烷型二萜占 左右。西松烷型二萜最早是从烟草和松属植物中分离得到。西松烷型二萜不仅具有多样的化学结构，而且其生物活性广泛，如抗炎、神经保护、细胞毒活性和抗菌等。为了发现更多来自软珊瑚的具有生物活性的西松烷型二萜类化合物，本课题组研究了采集于西沙的乳白肉芝软珊瑚 的化学成分。从中共分离鉴定了 个西松烷型二萜（），见图，其中化合物 为 个新的西松烷型二萜 （）。生物活性测试结果表明，化合物 对乙酰胆碱酯酶的抑制率为.；化合物 对白血病细胞 具有微弱的细胞毒活性，其 为（.）。图 化合物 的化学结构.材料.仪器与试剂 色谱柱用硅胶（目，青岛海洋化工有限公司）；超净工作台（上海昕仪仪器仪表有限公司）；凝胶（德国 公司）；恒温培养振荡器（上海智城分析仪器制造有限公司）；（、）型超导核磁共振仪（德国 公司）；半制备高效液相色谱仪（南京元宝峰医药科技有限公司）；分析型高效液相色谱仪（美国安捷伦科技有限公司）；质谱仪（德国 公司）；红外光谱仪（美国 公司）；酶标仪（美国宝特公司）。乙酰胆碱酯酶、（，二硫二硝基苹果酸）、葡萄糖苷酶、（硫代乙酰胆碱）、（硝基苯基吡喃葡萄糖苷）均购于 公司；色谱纯甲醇（天津康科德科技有限公司）；级丙酮（广东西陇科学股份有限公司）；其余常用试剂为工业重蒸试剂。.药物 软珊瑚样品于 年 月采自中国南海西 沙 海 域，经 海 南 大 学 李 秀 保 教 授 鉴 定 为，凭证标本（）保存于中国热带农业科学院热带生物技术研究所 实验室。芒果炭疽病菌 、香吴敏等：乳白肉芝软珊瑚 的西松烷二萜及生物活性研究蕉枯萎病菌 （）、菠萝黑腐病菌 、荔枝霜疫病菌、火 龙 果 黑 斑 病 菌、火 龙 果 溃 疡 病 菌、金黄色葡萄球菌 以及耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（）（）均为中国热带农业科学院热带生物技术研究所 实验室保存菌种。辣椒炭疽菌 为中国热带农业科学院热带生物技术研究所 实验室保存菌种。肿瘤细胞均购于中国科学院上海生命科学研究院细胞库。提取分离将冰冻的软珊瑚样品（干重.）剪碎，甲醇浸泡超声提取 次，减压浓缩后得到甲醇提取物.。分散于水中依次用乙酸乙酯和正丁醇萃取 次，减压浓缩后得到乙酸乙酯相浸膏.和正丁醇相浸膏.。乙酸乙酯相浸膏用硅胶柱色谱梯度洗脱，合并洗脱液分为 个流分（）。流分 （.），先后经过以石油醚（）氯仿（）为洗脱剂的凝胶柱色谱、硅胶柱色谱，以及流速为 的半制备（），得到化合物（.，.）。流分（.），先经过以 氯仿（）为洗脱剂的凝胶柱色谱，分为 个流分（），流分 经过硅胶柱色谱梯度洗脱，分为 个流分（），流分 再经过流速为 的半制备（），得到化合物（.，.），流分 再经过流速为 的半制备（），得到化合物（.，.）。流分（.），先后经过以 氯仿（）为洗脱剂的凝胶柱色谱、硅胶柱色谱，以及流速为 的半制备（），得到化合物（.，.）。流分（.），先经过以 氯仿（）为洗脱剂的凝胶柱色谱，分为 个流分（），流分 经过硅胶柱色谱梯度洗脱，分为 个流分（），流分 再经过硅胶柱色谱，以及流速为 的半制备（），得到化合物（.，.）。流分（.），先经过以 氯仿（）为洗脱剂的凝胶柱色谱，分为 个流分（），流分 再经过凝胶柱色谱（），分为 个流分（），流分 经过硅胶柱色谱梯度洗脱，分为 个流分（），流分 再经过反复硅胶柱色谱，得到化合物（.），流分 再经过反复硅胶柱色谱，得到化合物（.），流分 再经过流速为 的半制备（），得到化合物（.，.）。流分（.），先后经过以 氯仿（）为洗脱剂的凝胶柱色谱、硅胶柱色谱，以及流速为 的半制备（），得到化合物（.，.）。结构鉴定化合物 无色油状，易溶于氯仿；（.，）；（）（）：（.），（.）；（）：、；（，）和（，）数据见表。表 化合物 的（）和（）数据（）（）（）（）（）.（）.（）.（）.（）.（）.（）.（）.（）.（）.（，.）.（）.（）.（）.（）.（）.（）.（，.）.（）.（）.（）.（）.（）.（）.（）.（）.（）.（）.（）.（）.（）.（）.（）.（）.（）.（）年 月第 卷第 期.，.，显示化合物 的准分子离子峰 .（计算值.），推测其分子式为，不饱和度为。谱（表）显示 个甲基信号，个为烯甲基信号.（，），.（，），.（，），.（，），个为甲氧基信号.（，）；个烯氢信号.（，.），.（，.），.（，）；个亚甲基信号.（，），.（，），.（，），.（，），.（，）。谱（表）和 谱显示 个碳信号，包括 个伯碳 个伯碳（.，.，.，.）和 个连氧伯碳（.），个仲碳（.，.，.，.，.，.），个 双 键 叔 碳（.，.，.）和 个季碳 个双键 季 碳（.，.，.，.，.）和 个羰基碳（.，.）。谱显示 （.）（.），（.）（.）（.），（.）（.）相关信号，见图。谱显示 （.）与 （.），（.）与（.）、（.）、（.），（.）与 （.）、（.）、（.），（.）与 （.）、（.）、（.），（.）与（.）、（.）、（.），（.）与 （.）、（.）、（.），（.）与 （.）、（.）、（.）、（.）、（.），（.）与 （.）、（.）、（.），（.）与（.）、（.）、（.）相关信号，见图。以上数据与 的数据比较相似，其主要区别在于化合物 少了 个伯碳信号（.），个连氧仲碳信号（.），个仲碳信号（.，.）和 个环氧碳信号（.，.），多了 个连氧伯碳信号（.）和 个双键碳信号（.，.）。推断化合物 是、的双键结构代替了 同位置的环氧结构，的连氧甲基代替了化合物 同位置的连氧丁基。（.）与 （.）、（.）的 相关信号，以及 （.）与 （.）的 相关信号进一步证明了这一推断。图 化合物 的关键、和 相关.，谱图中 与、与、与、与、与 存在 效应，见图，证明，、，和，双键的构型均为，双键的构型为。综上所述，化合物 的结构见图，并将其命名为。化合物 白色固体；.；（，）：.（，.，），.（，.，），.（，），.（，），.（，），.（，），.（，.，），.（，），.（，），.（，），.（，），.（，.，.，），.（，），.（，），.（，），.（，），.（，），.（，），.（，）；（，）：.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（）。以上数据与文献报道基本一致，故鉴定该化合物为（）。化合物 白色固体；.；（，）：.（，），.（，），.（，），.（，），.（，），.（，.，），.（，），.（，），.（，吴敏等：乳白肉芝软珊瑚 的西松烷二萜及生物活性研究），.（，），.（，.，.，），.（，），.（，），.（，），.（，），.（，），.（，），.（，），.（，）；（，）：.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（）。以上数据与文献报道基本一致，故鉴定该化合物为 。化合物 无色油状；.；（，）：.（，），.（，.，），.（，），.（，.，），.（，.，），.（，.，.，），.（，），.（，），.（，），.（，），.（，），.（，），.（，），.（，），.（，），.（，.，），.（，.，），.（，.，），.（，），.（，）；（，）：.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（）。以上数据与文献报道基本一致，故鉴定该化合物为 。化合物 无色油状；.；（，）：.（，），.（，），.（，），.（，.，），.（，），.（，），.（，），.（，），.（，），.（，），.（，），.（，），.（，.，），.（，.，.，），.（，），.（，.，.，.，），.（，），.（，），.（，），.（，），.（，），.（，）；（，）：.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（）。以上数据与文献报道基本一致，故鉴定该化合物为（，），。化合物 无色油状；.；（，）：.（，.，.，），.（，.，），.（，），.（，.，.，），.（，），.（，），.（，），.（，）；（，）：.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（）。以上数据与文献报道基本一致，故鉴定该化合物为 。化合物 无色油状；.；（，）：.（，），.（，），.（，.，），.（，.，），.（，.，），.（，），.（，.，.，），.（，），.（，），.（，），.（，），.（，），.（，）；（，）：.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（年 月第 卷第 期.，.，），.（），.（），.（）。以上数据与文献报道基本一致，故鉴定该化合物为（）。化合物 白色固体；.；（，）：.（，.，），.（，.，），.（，.，.，），.（，.，.，），.（，.，.，），.（，.，），.（，），.（，），.（，），.（，.，），.（，），.（，），.（，），.（，），.（，），.（，），.（，），.（，）；（，）：.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（），.（）。以上数据与文献报道基本一致，故鉴定该化合物为 。化合物 无色油状；.；（，）：.（，），.（，），.（，），.（，.，.，），.（，），.（，），.（，），.（，.，），.（，），.（，），.（，），.（，.，），.（，.，.，），.（，.，.，），.（，），.（，），.（，），.（，），.（，），.（，）；（，）：.（