祛风养心方通过SIRT3-...9c2心肌细胞肥大机制研究_史默怡.pdf

53第 2 5 卷 第 2 期 2023 年 2 月辽 宁 中 医 药 大 学 学 报JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCMVol.25 No.2 Feb.，2023祛风养心方通过SIRT3-AMPK介导自噬抑制Ang诱导H9c2心肌细胞肥大机制研究史默怡，王明珠，周训杰（上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院，上海 200437）基金项目：国家自然科学基金青年科学基金项目（81904160）作者简介：史默怡（1987-），女，河北枣强人，主治医师，博士，研究方向：中西医结合防治心血管内科疾病的基础研究。通讯作者：周训杰（1980-），男，江苏南京人，副主任医师，博士，研究方向：中西医结合防治心血管疾病。E-mail：。摘要：目的 探究祛风养心方通过SIRT3-AMPK通路介导自噬抑制Ang诱导H9c2心肌细胞肥大的作用机制。方法 用慢病毒感染H9c2心肌细胞构建SIRT3低表达稳定株。用Ang诱导H9c2心肌细胞肥大模型，制备含药血清。实验组分为4组：10%空白血清（blank）+Lv-NC；Ang+10%空白血清（blank）+Lv-NC；Ang+10%QFYX含药血清+Lv-NC；Ang+10%QFYX含药血清+Lv-shSIRT3。用鬼笔环肽染色评价细胞面积，Western Blot方法检测ANP、BNP、ACT1、LC3-II、Beclin1、P62、P-AMPK、P-mTOR蛋白的表达含量。结果 与blank+Lv-NC组比较，Ang+Lv-NC组H9c2心肌细胞肥大，心肌肥厚基因蛋白的表达上调ANP、BNP（P0.01），ACT1（P0.05），自噬代表基因Beclin1、LC3-II、P62的表达显著上升（P0.01），SIRT3的表达下降（P0.05），P-AMPK下 降（P0.01），P-mTOR上 升（P0.01）。与Ang+Lv-NC组 比 较，Ang+QFYX+Lv-NC组 心 肌肥大不显著，肥厚基因ANP、BNP、ACT1、自噬代表基因Beclin1、LC3-II、P62的表达显著下降ANP、BNP、ACT1、Beclin1（P0.01），LC3-II、P62（P0.05），SIRT3的表达上升（P0.01），P-AMPK上升（P0.01），P-mTOR下降（P0.01），与Ang+QFYX+Lv-NC组比较，Ang+QFYX+Lv-shSIRT3组肥厚基因表达增强ANP、BNP（P0.01），ACT1（P0.05），SIRT3处于低表达水平（P0.01），自噬代表基因的表达升高Beclin1、P62（P0.01），LC3-II（P0.05），P-AMPK下降（P0.01），P-mTOR上升（P0.01）。结论 祛风养心方可以通过改善自噬，通畅自噬流，抑制Ang诱导H9c2心肌细胞肥大，这种保护作用是通过促进SIRT3的表达介导AMPK-mTOR通路实现的。关键词：SIRT3；AMPK；祛风养心方；自噬；细胞肥大中图分类号：R285.5 文献标志码：A 文章编号：1673-842X (2023)02-0053-06Research on the Mechanism of the Qufeng Yangxin Decoction（祛风养心方）Inhibitting Ang-Induced Hypertrophy of H9c2 Cardiomyocytes by Regulating Autophagy Based on SIRT3-AMPK Signaling PathwaySHI Moyi，WANG Mingzhu，ZHOU Xunjie（Yueyang Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine，Shanghai University of Traditional Chinese Medicine，Shanghai 200437，China）Abstract：Objective To explore the mechanism of the Qufeng Yangxin Decoction（祛 风 养 心 方）465-469.7 王布江，罗远.葛根芩连汤对结肠癌大鼠病理损伤、炎症反应及肠道微生态的影响 J .现代实用医学，2020，32(10 )：1185-1188.8 范春丽，裴王伟，骆丰.18152例消化系统恶性肿瘤患者贫血情况分析 J .中国卫生检验杂志，2021，31(1 )：105-108.9 李松霏，李军.肠道菌群在结直肠癌不同阶段的变化 J .胃肠病学和肝病学杂志，2021，30(1 )：21-24.10 胡嘉怡，陈蕾.肠道菌群失调与结直肠癌的相关研究进展 J .转化医学杂志，2021，10(1 )：57-60.11 曹云，张熔熔，袁晓敏，等.肠道菌群与结肠癌术后手术部位感染关系研究进展 J .中华医院感染学杂志，2020，30(20 )：3196-3200.12 武瑞赟，马俪珍，李平兰.鲟鱼硫酸软骨素对结直肠癌患病小鼠肠道菌群的影响 J .食品科学，2020，41(15 )：216-223.13 VAN DER POST S，JABBAR KS，BIRCHENOUGH G，et al.Structural weakening of the colonic mucus barrier is an early event in ulcerative colitis pathogenesis J .Gut，2019，68(12 )：2142-2151.14 LOW END，MOKHTAR NM，WONG Z，et al.Colonic mucosal transcriptomic changes in patients with long-duration ulcerative colitis revealed colitis-associated cancer pathways J .J Crohns Colitis，2019，13(6 )：755-763.15 孙洁.完整结肠系膜切除术治疗老年结肠癌的临床疗效及对患者血清CRP、TNF-和IL-6水平的影响 J .实用癌症杂志，2019，34(3 )：393-396.16 谢宝强，刘萍萍，吴畴斌.结直肠癌患者围手术期血清TNF-、NO、IL-1、IL-6变化的临床研究 J .国际检验医学杂志，2018，39(7 )：828-830.17 张璐.肥胖患者右半结肠癌腹腔镜完整结肠系膜切除术后肠道菌群变化及预后的影响因素 J .中国现代普通外科进展，2020，23(1 )：31-35.18 张巍远，王玉柳明，张宇坤，等.结肠癌患者术前肠道菌群特征与术后腹泻的关系研究 J .结直肠肛门外科，2020，26(3 )：337-341.19 陈李骏，俞继卫，张灵犀.吗啡通过WNT/-catenin信号通路调控结肠癌细胞增殖和凋亡的分子机制研究 J .癌症进展，2019，17(12 )：1440-1444.20 余钧辉，孙学军，郑见宝，等.TNF-通过Wnt/-catenin信号通路促进结肠癌细胞的增殖 J .西安交通大学学报（医学版），2018，39(4 )：504-508.DOI：10.13194/j.issn.1673-842x.2023.02.01254 辽宁中医药大学学报 25 卷in improving Ang-induced hypertrophy of H9c2 cardiomyocytes through SIRT3-AMPK pathway.Methods SIRT3 low expression stable strain was constructed by lentivirus infection of H9c2 cells，H9c2 cardiomyocyte hypertrophy model was induced by Ang，prepared drug-containing serum.The experiment was divided into 4 groups：10%blank serum+Lv-NC；Ang+10%blank serum+Lv-NC；Ang+10%QFYX medicated serum+Lv-NC；Ang+10%QFYX medicated serum+Lv-shSIRT3.Phalloidin staining was used to evaluate the cell area，and Western Blot was used to detect the protein expression of ANP，BNP，ACT1，LC3-，Beclin1，P62，P-AMPK and P-mTOR.Results Compared with the 10%blank serum+Lv-NC group，in Ang+Lv-NC group，the expression of cardiac hypertrophy gene protein was up-regulated（ANP，BNP P0.01，ACT1 P0.05），the expression of autophagy representative genes Beclin1，LC3-，P62 were significantly increased（P0.01），the expression of SIRT3 was weaken（P0.05），P-AMPK was decreased（P0.01）accompanied by P-mTOR was increased（P0.01）.Compared with Ang+Lv-NC group，myocardial hypertrophy in Ang+QFYX+Lv-NC group was not significantly increased，and the expression of hypertrophic genes ANP，BNP，ACT1，autophagy representative genes Beclin1、LC3-、P62 were significantly decreased（ANP，BNP，ACT1，Beclin1 P0.01，LC3-，P62 P0.05）.The expression of SIRT3 was increased（P0.01），with P-AMPK was increased and P-mTOR was decreased（P0.01）.Compared with Ang+QFYX+Lv-NC group，SIRT3 in Ang+QFYX+Lv-shSIRT3 group had a low expression level（P0.01），and the expression of autophagy representative genes Beclin1，LC3-and P62 were increased（Beclin1，P62 P0.01，LC3-P0.05），while P-AMPK was decreased and P-mTOR was increased（P0.01）.Conclusion The dispelling pathogenic wind and nourishing heart Qufeng Yangxin Decoction can inhibit the hypertrophy of H9c2 cardiomyocytes induced by Ang by improving autophagy and smooth autophagy flow，and this protective effect is achieved by promoting SI